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METODOLOGÍA:

 Preparación del reactivo de biuret

En la preparación del reactivo de Biuret se pesó 0,953 g de 𝐶𝑢𝑆𝑂4 . 5𝐻2 𝑂; 1,675 g de

NaEDTA y 0,253 g de KI. Se preparó una solución de hidróxido de sodio de 5N, donde se

pesó 20g de NaOH y se lo disolvió en un balón de aforo de 100 ml. Las cantidades pesadas

se las coloco en el siguiente orden: Los 0,953 g 𝐶𝑢𝑆𝑂4 . 5𝐻2 𝑂 se disolvió junto con 1,675 g

de NaEDTA en un balón de aforo de 250 ml, mientras se agitaba se añadía 50 ml de la

disolución prepara de hidróxido de sodio y finalmente se colocó los 0,253 g de KI como

estabilizante. El reactivo de Biuret se lo guardó en un frasco de color ámbar un día antes de

realizar la determinación de las proteínas.

 Determinación de las proteínas

Al siguiente día, se llevó tres diferentes tipos de leches: cruda, pasteurizada y de soya. Lo

primero que se realizo fue verter las leches, cada una en un vaso de precipitación de 100 ml

y se filtraron con un embudo de vidrio.

Se cogió una muestra de leche, en este caso se cogió 5ml de leche pasteurizada en 4 tubos

de ensayo y se colocó 2ml de HCl, para posteriormente colocarlos en la maquina

centrifuga. Los pesos de los tubos deben ser iguales para que así la maquina funcione de

manera estable. La función de la maquina centrifuga es acelerar la fuerza de la gravedad,

donde la parte solida quedara al fondo y la parte liquida (las grasas, proteínas) quedaran

arriba, de esta manera sabremos que se separaron, caso contrario se repite el proceso. En

nuestro caso se realizaron cuatro veces para así tener más sólidos. Cada centrifugada se
realizó en tiempo de 15 min. Cada vez se presionaba los sólidos para enviarlos al fondo y se

removía el líquido para conservar la parte sólido.

Se cogió con 1 ml de leche cruda y un 1ml de leche y se colocaron en un baño María

durante 5 minutos a 70°C, sin embargo se los tuvo que remover debido a que el color

morado (el color ideal) estaba cambiando a un color café verdoso. Se los hizo enfriar para

ver si regresaban a su color original, sin embargo no hubo ningún cambio y se los desecho

debido que se desnaturalizaron, por lo que perdieron las proteínas. Realizamos el mismo

procedimiento pero esta vez se usó leche de soya sin calentar conservando así el color

morado y se la diluyo para así tener un color más claro, luego se realizó el proceso de

filtración con ella, sin embargo no se obtuvo el color deseado ya que aún estaba oscura para

usarla en el espectofotometro e iba a salir un dato demasiado grande.

Se prepararon dos blancos, donde se colocó 1ml de agua destilada y 2ml de Biuret en

ambos y se colocó a uno de ellos en el baño María durante 5 minutos, El cual se decidió

que el blanco calentado ira al espectofomotometro por su color mas claro.

Debido a que la intensidad de las muestras no eran las apropiadas, en un balón de aforo de

100 ml se cogió leche cruda (como muestra), se aforo y se cogió 1 ml de esta disolución,

junto a 2 ml de biuret, donde se lo agito y se observó un color azul claro. Este proceso se lo

realizo nuevamente, esta vez con leche pasteurizada y se realizó el proceso dos veces, la

primera muestra se la calentó y la segunda sin calentar. Sin embargo debido a que todos

salieron con color azul claro, lo que representa que no tienen proteínas, se las desecho

posteriormente.
Debido a que no hubo los resultados deseados, se usó la clara de un huevo, la cual se la

coloco en una capsula de porcelana, se le añadió reactivo de Biuret la cual hizo que

cambiara de color a morado, la razón fue para comprobar si existe proteína y si el reactivo

de Biuret estaba bien preparado y se la colocó en 5 tubos de ensayo con diferentes pesos. El

proceso de pesado se lo realizo en un vaso de precipitación de 100 ml junto con un tubo de

ensayo.

Los pesos son los siguientes:

MUESTRAS PESO

Tubo de ensayo # 1 0,06 gr

Tubo de ensayo # 2 O,16 gr

Tubo de ensayo # 3 0,37 gr

Tubo de ensayo # 4 0,56 gr

Tubo de ensayo # 5 0,88 gr

En cada tubo de ensayo se les coloco agua destilada para tener todos, un volumen de 2 ml y

se les coloco 2 ml de reactivo de Biuret a cada uno y se los agito. Posteriormente se usó el

espectofotometro donde los datos que se obtuvieron fueron los siguientes:

MUESTRAS LONGITUD DE ONDA A 540 nm

Blanco 0,492 A

Muestra # 1 0,380 A

Muestra # 2 0,538 A
Muestra # 3 0,612 A

Muestra # 4 0,596 A

Muestra # 5 0,630 A

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