PRÁCTICA N°03

OBSERVACIÓN DE BACTERIAS

NOMBRE: CHERO NUNURA ANDY NÚMERO: #12

I. INTRODUCCIÓN

El interés de esta práctica radica en que las bacterias representas el tipo de organismo
más abundante de nuestro planeta.
Las bacterias son microorganismos unicelulares procariotas, esto quiere decir que su
material genético se encuentra disperso por el núcleo al contrario que los organismos
eucariotas cuyo material genético se encuentra protegido por una capa lipídica que lo
aísla del citoplasma. Las bacterias pasan por ser los organismos más abundantes del
planeta encontrándose en todos los ecosistemas incluso en aquellos que no dependen
de la energía del Sol como las fumarolas submarinas. Tal es la adaptación de las
bacterias al medio que las rodeas que se han encontrado bacterias hasta en los residuos
nucleares.
Las bacterias fueron observadas por primera vez por Anton van Leeuwenhoek
utilizando el microscopio que el mismo diseño, pero fue Pasteur el primero en ver la
importancia de las bacterias en los procesos biológicos, desechando así la teoría
errónea de la generación espontánea.

II. OBJETIVOS

 Reconocer la morfología de las bacterias.

 Adquirir destreza en la obtención de un frotis.
 Describir las técnicas de coloración simple y compuesta.
 Adquirir destreza en la tinción de Gram.
III. METODOLOGÍA
OBTENCIÓN DE UN FROTIS

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra

o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si
aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y
nítida.
 EXTENSIÓN
Consiste en formar una fina capa de la muestra sobre un portaobjeto que debe
de encontrarse perfectamente limpio y desengrasado. Si el cultivo fuera
sólido, se coloca previamente una gota de solución salina o agua destilada
sobre la lámina portaobjeto. La muestra debe ocupar aproximadamente 1𝑐𝑚2 .
Posteriormente se rotula el portaobjeto y el área donde se va a disponer la
muestra.

 FIJACIÓN
Consiste en que los microorganismos se adhieran a las paredes del portaobjeto
por coagulación de proteínas y evitar que sea arrastrado durante el lavado. Se
puede fijar el frotis por el calor suave del mechero.

PROCEDIMIENTO

 Desengrasar la lámina portaobjetos con alcohol o en todo caso ron de quemar

y lo dejamos secar.
Si queremos que el secado sea más rápido, podemos pasar la lámina
portaobjetos por la llama del mechero.
 Identificamos la lámina portaobjetos, rotulando con nuestro nombre al
extremo de éste con un marcador permanente.

 Con un hisopo, tomaremos una muestra de nuestros dientes frotándolos sobre

ellos con cuidado.

 La muestra obtenida, la colocaremos en la lámina portaobjetos por el lado

que no está marcado nuestro nombre y extendemos por el medio sin llegar a
los bordes.

 Para que la muestra tenga un secado más rápido, podemos pasar la lámina
portaobjetos por la llama del mechero.
 COLORACIÓN SIMPLE

La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. La
tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su interior. Utiliza un solo
colorante (violeta de genciana, azul demetileno, fuscina diluida).
La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las
formas y las estructuras celulares básicas. En las tinciones simples se usa un único reactivo,
que preferentemente es de tipo básico y contiene un cromógeno (compuesto que da color al
tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con
carga negativa que atraen y enlazan el cromógeno. Se utilizan solamente para incrementar el
contraste; todas las células absorberán el colorante y quedarán teñidas del mismo color.

COLORACIÓN COMPUESTA: TÉCNICA DE GRAM

Es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de

bacterias, sobre todo en muestras clínicas.
Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder
realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria
Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a
las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.
 MUESTRAS OBSERVADAS

 MUESTRA 1

 MUESTRA 2

 MUESTRA 3
 MUESTRA 4

 MUESTRA 5
PROCEDIMIENTO

 Cubriremos el frotis con una gota de violeta de genciana y dejaremos actuar

durante 3 minutos aproximadamente.

 Lavar a chorro de agua.

 Cubriremos con una gota de Lugol y dejaremos actuar durante 1 minuto

aproximadamente.
 Lavar a chorro con agua.

 Decoloramos de manera rápida con alcohol acetona.

 Lavar a chorro suave de agua.

 Cubriremos con una gota de safranina y dejaremos actuar durante 30 a 60
segundos aproximadamente.

 Lavar a chorro suave de agua.

 Secaremos al calor suave del mechero.

  Colocaremos una gota de aceite de inmersión.

 Llevamos al microscopio y observamos.

IV. CONCLUSIONES

 Para observar las preparaciones en el microscopio óptico siempre tenemos

que realizar de forma correcta todos los pasos para tener un buen enfoque de
nuestra muestra.
 Es muy importante el estudio de la cavidad bucal para posteriormente no
adquirir las famosas caries.
 A través de la tinción de Gram pudimos diferenciar las bacterias
grampositivas de las gramnegativas, gracias al color que tornan después de
haberlas teñido.

V. BIBLIOGRAFÍA

Lederman.W. (2007). Una historia personal de las bacterias. Santiago, Chile. RIL
Editores.
Margaret. O. (2014). Guías prácticas para los laboratorios de bacteriología clínica.
Editorial Médica Panamericana, S.A.