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Catalasa
2H2O2 O2 + 2H2O
Peroxido de hidrógeno
En los mamíferos esta enzima se encuentra en todo tipo de células, siendo su actividad
mayor en el hígado, riñón y eritrocitos. Un mol de catalasa puede descomponer 5.000.000
moléculas de H2O2 por minuto a 37°C, esto se conoce como número de recambio y representa
uno de los más altos de toda la enzimología.
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Actividad de la Catalasa Sanguínea
MATERIALES Y REACTIVOS
- Matraces erlenmeyer
- Tubos de ensayo
- Embudo
- Bureta y soporte universal
- Gradilla
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Actividad de la Catalasa Sanguínea
- Baños de calentamiento
- Pipetas graduadas de 1, 5 y 10 mL.
- H2SO4 2 N
- Buffer fosfato 0,01 M, pH 3, 7 y 8. Debe contener H2O2 para gastar aproximadamente 15
mL de KMnO4 0,012 N.
- KMnO4 0,012 N
- Solución de KCN 10-3 preparada el día de su uso.
-
Obtención de un preparado de catalasa sanguínea: (será preparada con anticipación por el
docente).
Para obtener una preparación cruda y altamente activa de la enzima se sigue el siguiente
procedimiento:
1.- Pipetear 25 mL de agua destilada en un frasco Erlenmeyer y enfriarla sobre hielo picado.
2.- Con ayuda de una lanceta estéril, extraer sangre capilar (del dedo pulgar), descartar la primera
gota de sangre y luego pipetear 0,02 mL de sangre con una pipeta de Shalli.
3.- Agregar los 0.02 mL de sangre en los 25 mL de agua destilada fría. Lavar varias veces la
pipeta en el agua.
4.- Mantener la preparación de enzima en baño de agua helada con suficiente hielo para prevenir
el deterioro de la misma.
Procedimiento:
a. Tomar 5 frascos Erlenmeyer de 125 mL c/u; rotularlos del 1 al 5 y proceder a agregar los
volúmenes que se indican en la siguiente tabla:
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Actividad de la Catalasa Sanguínea
mL
Frasco H2O2 Tiempo
Enzima H2SO4 2N gastados
N° pH 7 en min
KmnO4
1 5 mL 0,1 mL 5' 5 mL
2 5 mL 0,2 mL 5' 5 mL
3 5 mL 0,4 mL 5' 5 mL
4 5 mL 0,8 mL 5' 5 mL
5* 5 mL ----- 5' 5 mL
*Tubo control.
Toda reacción enzimática presenta una temperatura óptima la cuál es definida como la
temperatura a la cual la velocidad de la reacción es mayor, manteniendo constante los otros
factores. En este experimento se utilizarán tres temperaturas diferentes para observar el efecto de
la misma sobre la actividad de la catalasa.
Procedimiento:
a. Preparar tres series de tubos de ensayo (cada serie consta de dos tubos).
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Actividad de la Catalasa Sanguínea
c. Agregar a cada uno de los tubos los reactivos y volúmenes indicados en la siguiente tabla:
mL
Tubo H2O2
Temperatura Enzima Tiempo H2SO4 2N gastados
Nº pH 7
KmnO4
1A 5 mL 10°C -- 5' 5 mL
1B 5 mL 10°C 0,5 mL 5' 5 mL
2A 5 mL 37°C -- 5' 5 mL
2B 5 mL 37°C 0,5 mL 5' 5 mL
3A 5 mL 60°C -- 5' 5 mL
3B 5 mL 60°C 0,5 mL 5' 5 mL
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Actividad de la Catalasa Sanguínea
Procedimiento:
mL gastados
Frasco H2O2 H2O2 H2O2
Enzima Tiempo H2SO4 2N KmnO4
N° pH 3 pH 7 pH 8
1A 5 mL -- --- -- 5' 5 mL
1B 5 mL -- --- 0,5 mL 5' 5 mL
2A -- 5 mL --- -- 5' 5 mL
2B -- 5 mL -- 0,5 mL 5’ 5 mL
3A -- -- 5 mL -- 5’ 5 mL
3B -- -- 5 mL 0,5 mL 5’ 5 mL
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Actividad de la Catalasa Sanguínea
Procedimiento:
mL gastados
Frasco H2O2 H2 O H2SO4
Enzima Tiempo KmnO4
No. pH 7 destilada 2N
1A 1,25 mL 3,75 mL -- 5' 5 mL
1B 1,25 mL 3,75 mL 0,5 mL 5' 5 mL
2A 2,50 mL 2,50 mL -- 5' 5 mL
2B 2,50 mL 2,50 mL 0,5 mL 5' 5 mL
3A 5 mL --- -- 5' 5 mL
3B 5 mL --- 0,5 mL 5' 5 mL
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Actividad de la Catalasa Sanguínea
Procedimiento:
KCN mL
Frasco H2O2
H2 O -3 Enzima Tiempo H2SO4 2N gastados
N° pH 7 10 M KmnO4
1A 1,25 mL 3,75 mL 0,5 mL -- 5’ 5 mL
1B 1,25 mL 3,75 mL 0,5 mL 0,5 mL 5’ 5 mL
2A 2,50 mL 2,50 mL 0,5 mL -- 5’ 5 mL
2B 2,50 mL 2,50 mL 0,5 mL 0,5 mL 5’ 5 mL
3A 5 mL -- 0,5 mL -- 5’ 5 mL
3B 5 mL -- 0,5 mL 0,5 mL 5’ 5 mL
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Actividad de la Catalasa Sanguínea
g. Tabule los resultados y calcule la velocidad de reacción para los tubos experimentales, así
como los inversos de las velocidades 1/[V] y de las concentraciones de sustrato 1/[S] de
los experimentos N° 4 y 5 (gráfico de los inversos recíprocos)
Volumen
Concentración Velocidad de 1 / [S] 1 / [S] 1 / [V] 1 / [V]
de
de sustrato reacción Exp 4 Exp 5 Exp 4 Exp 5
sustrato
1,25 mL
2,5 mL
5 mL
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Actividad de la Catalasa Sanguínea
1. ¿Cómo cree usted que será el efecto de las temperaturas 15°C, 37°C y 60°C sobre la actividad
enzimática de la catalasa sanguínea?
2. Explique ¿Qué diferencia existe entre los tubos controles y experimentales de esta práctica?
Bibliografía
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