“Año de la Inversión para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria”

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE

GROHMANN
Facultad de Ciencias Agropecuarias

Escuela de Ingeniería en Industrias Alimentarias

DETERMINACION DE PROTEINAS EN
GELATINA MEDIANTE ESPECTROSCOPIA UV
(PRACTICA 01)

Alumna : Tito Osco, Eva Martha Cód. 2013-38995

Curso : Laboratorio de Análisis Instrumental de los Alimentos

Año : Tercero

Sección : A

Docente : Ing. Dr. Miguel A. Larrea Céspedes

Tacna – Perú

2017
 ANALISIS INSTRUMENTAL DE
LOS ALIMENTOS
INTRODUCCION

La radiación de absorción ultravioleta o visible provine de la excitación de los

electrones enlazantes y como consecuencia, las longitudes de onda de los picos
de absorción pueden correlacionarse con los tipos de enlace que existen en las
especies en estudio.

La espectroscopia de absorción molecular es por tanto valiosa para la

identificación de los grupos funcionales de una molécula. Sin embargo, son más
importantes las aplicaciones de la espectroscopia de absorción ultravioleta y
visible para la determinación cuantitativa de compuestos que contienen grupos
absorbentes o también llamados cromo foros, de hecho la aplicación más
generalizada de relevancia biológica es la medida de concentraciones de
proteínas, NADH y ácidos nucleicos, por en la mayoría de los casos hay una
relación directa y simple ente el número de moléculas presentes y la absorción.

No obstante en algunos casos, la absorción depende notablemente del entorno

molecular; así los cambios en el espectro con cambios de entorno pueden
interpretarse en términos de procesos tales como la fusión de ácidos nucleicos,
interacciones proteínas – ligando (ensayos de actividad enzimática, enzima –
cofactor, activador, inhibidor), etc.

El espectro UV/V de un biopolímero es una huella dactilar y como tal puede

usarse en ocasiones para identificarlo.

La gran utilidad de tales medidas radica en la alta sensibilidad, la sencillez de la

medida y el hecho de hacerse en disolución; aunque no son posible estas
medidas en sistemas biológicos intactos, es decir en vivo, tales como tejido
debido a que esta radiación es fuertemente dispersa.
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LOS ALIMENTOS
I. OBJETIVOS:

Determinar la cantidad de proteínas de una muestra de gelatina

comercial, aplicando el método espectrofotométrico en la región
ultravioleta.
Determinamos nuestra curva de calibración.

II. FUNDAMENTO TEORICO :

Las proteínas poseen una banda de absorción en el UV entre 190 y 290 nm.

Fundamentalmente a la presencia de aminoácidos aromáticos (tirosina,

triptófano y Fenilalanina).

El método se basa en la medición de absorbancia a 280nm. Es un método

simple, rápido y no destructivo.

Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ion cúprico en medio
alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo absorción a 540nm, cuya
intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en la muestra.

Por sus propiedades físico-químicas, las proteínas se pueden clasificar en

proteínas simples (holoproteidos), que por hidrólisis dan solo aminoácidos o sus
derivados; proteínas conjugadas (heteroproteidos), que por hidrólisis dan
aminoácidos acompañados de sustancias diversas, y proteínas derivadas,
sustancias formadas por desnaturalización y desdoblamiento de las anteriores.
Las proteínas son indispensables para la vida, sobre todo por su función plástica
(constituyen el 80% del protoplasma deshidratado de toda célula), pero también
por sus funciones biorreguladoras (forma parte de las enzimas) y de defensa (los
anticuerpos son proteínas).

Las proteínas desempeñan un papel fundamental para la vida y son las

biomolecular más versátiles y más diversas. Son imprescindibles para el
crecimiento del organismo.
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LOS ALIMENTOS
III. MATERIALES Y METODOS :

a) Materiales:

Muestra de gelatina comercial

Suero albumina bobina liofilizado
Tubos de ensayo de 10ml.
Balanza analítica
Espectrofotómetro
Pipetas automáticas
Matraces aforados de 10ml
Vasos de precipitación
Tubos de ensayo
Pipetas graduadas

b) Sustancias :

Agua destilada
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LOS ALIMENTOS

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL :

A. PREPARACION DE LA MUESTRA :

1. Pesar aprox. 1 g. de una gelatina comercial.

2. Disolverlos en un mínimo volumen de agua caliente.

3. Dejar enfriar y llevar a 100ml. Con agua destilada.

4. Tomar una muestra y medir la absorbancia de dicha solución a ʎ: 280 nm

en un espectrofotómetro UV – visible.

5. Calcular la concentración de proteína en la muestra expresada en ppm a

partir de la curva de calibración determinada.
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LOS ALIMENTOS

B. CONSTRUCCION DE LA CURVA DE CALIBRACION :

a. Procedimiento:

1. Preparar un padrón de SAB (1000 ppm (1000 mg. /L).

2. Tomar 1; 2; 3; 4; 5; 6; 7; 8; 9 y 10ml. De la solución de proteína estándar

(1000ppm).

3. Colocar cada volumen en distintos matraces aforados de 10 ml.

4. Llevar a volumen a cada matraz con agua destilada.

5. Tomar 2 ml. De las soluciones finales y medir la absorbancia de dichas

soluciones a ʎ: 280 nm. En un espectrofotómetro UV- VISIBLE.
6. Construir una curva de calibración graficando las absorbancias leídas a
280 nm. Vs. La concentración de proteína.
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LOS ALIMENTOS

V. RESULTADOS :

 CURVA DE CALIBRACION 1000 PPM (1000 mg. /l) :

 ʎ = 280 nm.

NUMERO DE PADRON SAB H2 O CONCENTRACION ABSORVNACIA

TUBO (ML.) (MG.) (280NM.)
ML.

2 2.0 8.0 2.0 0.1271

4 4.0 6.0 4.0 0.2412

6 6.0 4.0 6.0 0.3617

8 8.0 2.0 8.0 0.4833

10 10.0 ……… 10.0 0.6063

blanco ………. 10.0 …….. 0.0001

 ABSORBANCIA DE LA MUESTRA DE LA GELATINA : 0.2816

 CALCULANDO RESULTADOS:

 a = 0.00377
0.5019 g. 0.2816
 b = 0.060025
 r = 0.999 A=X
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LOS ALIMENTOS
 REEMPLAZAMOS LOS VALORES CON LA FORMULA INDICADA:

𝐘 = 𝐚 + 𝐛𝐗

0.2816 − 0.00377
X° =
0.060025

X° = 4.6285 mg

4.6285 500 mg.

X 100 %

X = 0.9257 de proteína

0.9257 X 100
= 77 – 100 = 20 % de error.
1.16

Gráfica de la solución patrón:

12

10
Absorvancia

6
y = 16.656x - 0.0616
4 R² = 0.9998

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Concentracion
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LOS ALIMENTOS

VI. CONCLUSIONES :

Llegamos a determinamos exitosamente la cantidad de proteínas en una

muestra de gelatina comercial aplicando el método de espectrofotómetro
en la región ultravioleta, aplicando nuestra curva de calibración
correspondiente.

VII. RECOMENDACIONES:

Al momento de realizar la práctica se hace necesario conocer con

anterioridad el procedimiento a seguir en el laboratorio para el desarrollo
de las pruebas, con el fin de aclarar dudas, realizar las pruebas conociendo
su fundamento y finalidad, además de conocer cuáles son los valores
esperados.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS :

COOK, T.E, SANTINI, R.E, PARDUE, H.L ANAL. CHEM. 49,871(1977);

SAVISTZKY, A, GOLAY, M.J.E IBID 36,1627(1964).
OPERATORS MANUAL UV-VIS SPECTROPHOTOMETER PERKIN –
ELMER MODELO 552 242 – A1-M202/11.78 WEST GERMANY 103 709.
SCHMITT, A, DERIVATIVE SPECTROSCOPY AN INTRODUCCION
WITH PRACTICAL EXAMPLES, BODENSEEWERD PERKIN-ELMER
1651/1.77.
CAHILL, J, PADERA, F.G; APLICATIONS DATA BULLETIN DERIVATIVE
SPECTROSCOPY APPLICATION AND THEORY, REPRINT PERKIN-
ELMER NOV. 1979-APRIL 1980.
BOTTEN, D, HONKAWA, T, TOHYAMA, S; APLICATIONS DATA
BULLETIN SECOND DERIVATE SPECTROSCOPY, REPRINT PERKIN-
ELMER. PANAMERICANA DE LA SALUD; SEPTIMA EDICION;
WASHINGTON, D.C.