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Universidad Veracruzana

El Microscopio
Aplicaciones de la microscopia en la histología y la
biología celular

Alumno: Azael Ahumada Zamudio


Experiencia Educativa: Histología
Catedrático: Dra. Guadalupe Melo Santiesteban
Sección: 202
Periodo: Segundo
Fecha: Febrero del 2011
Objetivos
El siguiente ensayo tiene como objetivo dar a conocer acerca del microscopio, sus
aplicaciones en la histología y los diferentes tipos de estudios con ellos.

Introducción
La totalidad del conocimiento actual referido a la estructura y la función de los
organismos biológicos tiene su fundamente en los métodos necesarios para la
investigación de las células y los tejidos, En algunos casos, los grandes avances
en las comprensión y el conocimiento fueron consecuencia directa del desarrollo
de una nueva técnica, La creación de la microscopia electrónica, los métodos de
fraccionamiento celular, la inmunohistoquímica y la tecnología de DNA son
ejemplos claros. Es necesario contar con ciertos conocimientos respecto de los
principios fundamentales de los métodos aplicados con mayor frecuencia, para
que el estudio de la histología no sea tan solo un aprendizaje de determinados
hechos sino que además permita adoptar una postura crítica frente a ellos. En
consecuencia, se comenzara el estudio de la histología con un breve análisis de
las generalidades de los métodos histológicos, si bien a menudo será de gran
utilidad revisar alguno de estos métodos relacionados con el estudio especifico de
las células y los tejidos. En general, los métodos histológicos se clasifican en dos
grupos: los que se basan en la observación directa de células y tejidos vivos, y los
que analizan material muerto o inanimado. En un lugar intermedio se ubican las
técnicas de aislamiento de los componentes de células vivas mediante métodos
de centrifugación. En todos los casos se comienza con el análisis microscópico, de
importancia fundamental para todos los métodos histológicos.

Material y métodos
Se asistió al Hospital General de Zona No. 71 del IMSS, localizado en la ciudad de
Veracruz, Ver; para observar los pasos de cómo se desarrolla la prueba de tejidos
y el resultado final visto en un microscopio óptico.
Resultados
Se obtuvo como resultado poder apreciar las partes de los componentes celulares
a través del microscopio óptico y las partes que constituyen estas y el propio
microscopio.

Desarrollo
EL microscopio es el instrumento mas importante en la hitologiam debido al
pequeño tamaño de las estructuras analizadas. Cuando la luz atraviesa un
material biológico, cambian sus características, y estas modificaciones se hacen
visibles mediante los sistemas de lentes. EL ojo puede diferenciar variaciones de
intensidad de la luz y de color. En consecuencia, es necesario modificar la luz,
para que el preparado se observe como formado por elementos mas oscuros y
más claros o de distintos colores.

Microscopio óptico
Está compuesto por partes mecánicas y ópticas. Los componentes ópticos
constan de tres sistemas de lentes: condensador, objetivo y ocular. El
condensador produce un haz de luz que ilumina el objeto estudiado. El objetivo
aumenta el objeto y proyecta la imagen sobre el ocular. El ocular aumenta aun
mas la imagen y la proyecta sobre la retina del ojo del observador. El aumento
total se determina mediante el producto del aumento del objetivo por el aumento
del ocular. El poder de resolución depende de la longitud de onda de la luz
utilizada y de las aperturas numéricas del objetivo y el condensador. EL máximo
poder de resolución que se puede obtener es de 0,2 um, pero con los preparados
rara vez excede de 0,5 um. Para obtener el máximo poder de resolución, de
alrededor de 0,2 um, e requiere un aumento de unas 1,000-1,400 veces. Sobre la
base del microscopio óptico común se han desarrollado varios microscopios
especiales, cada uno de los cuales presenta ventajas y limitaciones.

Microscopio de campo oscuro

Se utiliza para analizar partículas pequeñas, que presentan muy escaso contraste
con la microscopia óptica o que se encuentran en el limite del poder de resolución
o por debajo de este. Se emplea un condensador especial, el cual impide que
llegue luz directa al objetivo, de manera que solo incide en este lente la luz
desviada o esparcida por las pequeñas partículas que se desea investigar. Se
observan luminosas sobre un fondo oscuro. En la histología se utiliza a menudo el
campo oscuro para el análisis de preparadoras radioautográficas.

Microscopio de contraste de fase

Los tejidos no coloreados producen muy escaso contraste dado que no absorben
cantidades importantes de luz. Sin embargo producen cierto retardo en las
longitudes de onda, de acuerdo con la “densidad óptica” variable de tejidos, es
decir, los distintos índices d refracción. Mediante el microscopio de contraste de
fase es posible transformar estas diferencias de fase no visibles , en diferencias de
amplitud es decir, que las diferencias d refracción entre los componentes del tejido
se transforman en diferencias de intensidad que pueden ser captadas por el ojo
humano. Es posible transformar en visibles componentes de las células vivas.

Microscopio de interferencia

Esta construido sobre la base de principios similares al microscopio de contraste


de fase, dado que también en este caso se utilizan las diferencias de fase
producidas por la luz que atraviesa el objeto. Mediante el microscopio de
interferencia es posible tener datos cuantitativos. Esto se logra al dividir la luz de
una única fuente en dos haces luminosos, de los cuales uno se envía a través del
objeto y el otro no se altera, por lo que actúa como haz de referencia. Después se
vuelven a unir ambos haces, que interfieren entre si del mismo modo que en el
microscopio de contraste de fase. El haz que atravesó el objeto sufre un retraso
respecto al haz de referencia, es decir, sufre una modificación de fase. Una
variante del microscopio de interferencia es el microscopio de contraste por
interferencias diferencial, en el cual los dos haces luminosos separados tiene
polaridad opuesta, por lo que se aumenta el contraste y se obtiene una imagen de
aspecto tridimensional del objeto investigado.

Microscopio de luz polarizada

Los componentes cristalinos y fibrosos del material biológico poseen una


orientación característica de las moléculas. En consecuencia, cuando se ilumina el
objeto con luz polarizada plana, esta se divide en dos componentes con distinta
velocidad, es decir, desfasados entre si. Se haba de estructuras birrefringentes o
anisótropas. En contraste, se denomina estructuras isótropas a las que no dividen
la luz polarizada por lo que el índice de refracción es igual en todas direcciones.
Se obtiene datos referidos a la anisotropía del objeto mediante el microscopio de
luz polarizada, que se diferencia del microscopio óptico común por tener dos filtros
polarizantes. Uno de ellos, el polarizador, se encuentra antes del preparado y el
otro, el analizador, esta ubicado por detrás. El polarizador transforma la luz en una
polarizada plana antes de llegar al objeto, mientras que el analizador se utiliza
para registrar las modificaciones de la polarización de la luz que ha atravesado el
preparado. La birrefringencia de un objeto depende de una estructura regular
determinada.

Microscopio de fluorescencia

Determinadas sustancia fluorescen, tienen la particularidad de irradiar luz de otra


longitud de onda al ser iluminadas. La luz irradiada siempre presenta una longitud
de onda mas larga que la original. Algunos componentes biológicos tienen
fluorescencia natural y se denomina autofluorescencia, mientras que otro
adquieren la fluorescencia después de un tratamiento con determinados
colorantes. En el microscopio de fluorescencia se ilumina el preparado con intensa
luz de la longitud de onda capaz de activar de colorante fluorescente empelado.
Esto se lleva a cabo mediante un filtro de color adecuado que se coloca por
debajo del condensador; así se filtra la luz antes de que incida en el preparado. Se
coloca un filtro por encima del objetivo con un color correspondiente a la longitud
de onda de la luz que emite el colorante utilizado como fluorescente.

Microscopio de barrido confocal

Una limitación de la microscopia de fluorescencia radica en la necesidad de que


todo el espesor del preparado emita fluorescencia, pero solo es posible enfocar el
objetivo en un plano del corte a la vez. La luz emitida por fluorescencia desde
zonas del preparado ubicadas por encima y por debajo del plano focal puede
restar nitidez a la imagen. El preparado se ilumina por un rayo laser que barre
todos los puntos del plano focal, mientras que la luz emitida por el preparado
atraviesa una hendidura muy estrecha que detiene a luz emitida por el preparado
atraviesa una hendidura muy estrecha que detiene la luz emitida por otros niveles,
distintos del plano focal.

Microscopio de luz ultravioleta

Con el empleo de luz ultravioleta con longitud de onda de alrededor de 250 nm,
casi la mitad de la luz visible que se utiliza habitualmente en el microscopio óptico,
en principio es posible duplicar el poder de resolución. El microscopio de luz
ultravioleta, permite el paso de la luz, que es invisible.

Microscopio electrónico

El microscopio electrónico se debe a que se reemplaza la lux visible, de longitud


de onda de alrededor de 500 nm, por una haz de electrones de longitud de onda
del orden de 0,005 nm, Se calienta un cátodo filamentoso del metal tungsteno en
una atmosfera de vacio por los que emite electrones que son acelerados desde el
ánodo debido a una diferencia de potencial de alrededor de 50-100kc, EL ánodo
tiene la forma de una placa metálica con un orificio en el centro, a través del cual
pasan algunos de los electrones para formar un flujo constante o haz de
electrones. La formación de la imagen en el microscopio electrónico se debe, a la
dispersión de los electrones, Así se dispersan los electrones que colisionan con
los núcleos atómicos y con sus electrones en el objeto, a menudo de manera tal
que inciden por fuera de la lente objetivo. El microscopio electrónico esta limitado
por el escaso poder de penetración del haz de electrones. Este implica la
necesidad de utilizar cortes de tejido muy delgados. Esta limitación se puede
superar en parte mediante el uso del denominado microscopio electrónico de alto
voltaje, cuyo haz de electrones que alrededor de 10 veces más rico en energía
que el que se utiliza en los microscopios electrónicos comunes. El microscopio
estereoelectronico, permite cortes de tejido más gruesos, ya que el mismo
preparado es fotografiado desde dos ángulos algo diferentes.

Microscopio electrónico de barrido

En el microscopio electrónico de barrido los electrones no atraviesan el objeto, la


imagen se forma indirectamente, a través de la captación puntual de detalles en la
superficie del preparado. El preparado se recubre de una delgada capa de un
metal pesado y se bombardea con un haz de electrones muy estrecho, que “barre”
sobre el objeto en un patrón lineal y lo copia. Desde cada punto se emiten
electrones secundarios, de modo tal que la intensidad de la emisión secundaria
varía según el ángulo con que incide el haz de electrones sobre la superficie. La
emisión secundaria se mide con un detector ubicado cerca del preparado y
adaptado a una pantalla de televisión, cuyos rayos catódicos barren en forma
coordinada con el haz de electrones “que iluminan”. La imagen obtenida se
visualiza directamente sobre la pantalla y se puede registrar en una fotografía o en
forma digital.
Conclusión
El microscopio es un instrumento sumamente importante en las pruebas
histológicas ya que es el que nos permite poder observar con mayor eficacia las
diferentes partes de las células. Gracias a él se ha podido dar a conocer mejor las
diferentes estructuras de los tejidos.

Bibliografía
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