INFORME DE VALIDACIÓN DEL ANASIS DE ACIDO DOMOICO

(Biotoxina Amnésica ASP)

VALIDACIÓN DEL ANASIS DE ACIDO DOMOICO

(Biotoxina Amnésica ASP)

I OBJETIVO:

El presente informe tiene por objetivo principal presentar los resultados del plan de ensayos de
validación del procedimiento: ISP -018

DOCUMENTOS

Para la elaboración del presente informe se recopilo la siguiente información:

 Plan de ensayos

 Desarrollo experimental

Equipos y Materiales

NOMBRE MODELO RANGO CALIBRACIÓN N° CERTIFICADO

Cromatografo Liquido LaChrom Elite 160 nm - 400nm Anual Verif. 1 de Mayo -2011
Balanza Analitica OHAUS 0 - 210 g / 0.1 mg C/2 años M-0369-2011
Centrifuga HETTICH 0-6000 rpm C/2 años LLA-023-2010
Micropipeta Eppendorf 10 -100 µl C/2 años MV-310-2010
Micropipeta Eppendorf 10 -1000 µl C/2 años MV-945-2010
Fiola de Vidrio WITEG Clase A No aplica Anual LV-059-2011

Reactivos

 Agua grado cromatografico o equivalente

 Acetonitrilo HPLC

 Metanol HPLC

 Ácido Trifluoroacetico grado espectrofotométrico

 Solución Certificada de Ácido DomoicoNRC CRM-DA-f (Lote # 20071205)

 Materia de Referencia Certificado NRC CRM ASP- MUS-c(Lote # 200310)

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(Biotoxina Amnésica ASP)

1. PRUEBA: DETERMINACIÓN DE ACIDO ADOMOICO (Biotoxina Amnésica ASP )

2. LUGAR: LABORATORIO QUIMICO SENSORIAL

3. DETERMINACION:
ACIDO DOMOICO (Biotoxina Amnésica ASP )

4. METODO USADO:
ISP-018: Determinación de Ácido Domoico (Biotoxina Amnésica ASP ) por HLPC con Detector UV-
VIS

5. PRODUCTO:
MOLUSCOS BIVAVOS

6. PARTICIPANTES: CODIGO
LUCIA ESPINO BARRIENTOS 1

LORENA SLI MOCHIZUKI CACERES 2

7. RESULTADOS:

IDENTIFICACIÓN DE
Analista 1 Analista 2
PARTICIPANTES

1 41.00 40.51
2 40.53 41.00
RESULTADOS 3 41.26 39.51
OBTENIDOS 4 41.98 42.16
(mg/Kg) 5 40.45 40.31
6 41.10 40.59
7 39.55 40.58
8 40.38 39.79
9 39.99 39.74
10 40.78 39.36
11 39.78 39.77
12 39.29 39.84
13 39.44 40.62

Fecha 08 08 11

Lorena Mochizuki Lucia Espino Ing Jorge Alejandro Vargas Mogollón

Analista Quimico Analista Quimico Jefe Laboratorio Químico

2
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(Biotoxina Amnésica ASP)

II PRUEBA DE GRUBBS - ACIDO DOMOICO (ASP)

Analista 1 Analista 2

ANALISIS ASP ANALISIS ASP

(m g/Kg) (m g/Kg)

1 41.0000 1 40.5100
2 40.5300 2 41.0000
3 41.2600 3 39.5100
4 41.9800 4 42.1600
5 40.4500 5 40.3100
6 41.1000 6 40.5900
7 39.5500 7 40.5800
8 40.3800 8 39.7900
9 39.9900 9 39.7400
10 40.7800 10 39.3600
11 39.7800 11 39.7700
12 39.2900 12 39.8400
13 39.4400 13 40.6200

Prueba Simple(n>2) Prueba Simple (n>2)

n 13 n 13
Promedio 40.43 Promedio 40.29
Desviación Estándar 0.80 Desviación Estándar 0.75
Valor Mínimo 39.29 Valor Mínimo 39.36
Valor Máximo 41.98 Valor Máximo 42.16

Mínimo Máximo Mínimo Máximo

Valor a probar 39.290 41.980 Valor a probar 39.360 42.160
Estadístico de Prueba G 1.4201 1.9445 Estadístico de Prueba G 1.2336 2.4774
RESULTADO Correcto Correcto RESULTADO Correcto Anómalo

Valores Críticos Prueba Simple Valores Críticos Prueba Simple

n 5% 1% n 5% 1%
13 13
2.462 2.699 2.462 2.699
Correcto Dudoso Anómalo Correcto Dudoso Anómalo

Se concluye que de acuerdo a la Prueba de Grubbs, los resultados

del Analista 1 y del Analista 2 son típicos.

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III EVALUACIÓN DE LA REPETIBILIDAD

ACIDO DOMOICO (ASP)
Analista 1 Analista 2
ANALISIS ANALISIS
ASP (m g/Kg) ASP (m g/Kg)

1 41.00 1 40.51
2 40.53 2 41.00
3 41.26 3 39.51
4 41.98 4 42.16
5 40.45 5 40.31
6 41.10 6 40.59
7 39.55 7 40.58
8 40.38 8 39.79
9 39.99 9 39.74
10 40.78 10 39.36
11 39.78 11 39.77
12 39.29 12 39.84
13 39.44 13 40.62

NIVEL DE CONFIANZA = 95.0%

CALCULO DE LOS ESTIMADOS

n 1 = 13 n 2 = 13
X 1 = 40.425 X 2 = 40.291
S 1 = 0.800 S 2 = 0.755
n = 12 n = 12
C.V.= 1.98% C.V.= 1.87%

CALCULO DE LA VARIABILIDAD (a = S . t a /2)

ta /2 = 2.1788 ta /2 = 2.1788

a 1 = 1.7420 a 2 = 1.6439
CALCULO DE LOS LIMITES DE TOLERANCIA (X n ± a)

L.I. 1 = 38.6834 L.I. 2 = 38.6468

X1 = 40.4254 X2 = 40.2908
L.S. 1 = 42.1674 L.S. 2= 41.9347

EVALUACION DE RESULTADOS

MUESTRA EVALUACION MUESTRA EVALUACION

1 Dentro de los límites
2 Dentro de los límites
3 Dentro de los límites
4 Dentro de los límites
5 Dentro de los límites
6 Dentro de los límites
7 Dentro de los límites
8 Dentro de los límites
9 Dentro de los límites
10 Dentro de los límites
11 Dentro de los límites
12 Dentro de los límites
13 Dentro de los límites
1 Dentro de los límites
2 Dentro de los límites
3 Dentro de los límites
4 Fuera de los límites
5 Dentro de los límites
6 Dentro de los límites
7 Dentro de los límites
8 Dentro de los límites
9 Dentro de los límites
10 Dentro de los límites
11 Dentro de los límites
12 Dentro de los límites
13 Dentro de los límites

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IV EVALUACION DE LA DIFERENCIA ENTRE ANALISTAS

ACIDO DOMOICO (ASP)

Analista 1 Analista 1
ANALISIS ANALISIS
ASP (m g/Kg) ASP (m g/Kg)
1 41.00 1 40.51
2 40.53 2 41.00
3 41.26 3 39.51
4 41.98 4 42.16
5 40.45 5 40.31
6 41.10 6 40.59
7 39.55 7 40.58
8 40.38 8 39.79
9 39.99 9 39.74
10 40.78 10 39.36
11 39.78 11 39.77
12 39.29 12 39.84
13 39.44 13 40.62

NIVEL DE CONFIANZA = 95.0%

PLANTEAMIENTO DE LAS HIPOTESIS

Ho : µ1 = µ2 Hipótesis nula
Ha : µ1  µ2 Hipótesis alternativa

CALCULO DEL ESTADISTICO DE PRUEBA

n 1 = 13 n 2 = 13
X 1 = 40.425 X 2 = 40.291
S 1 = 0.7995 S 2 = 0.7545
S X1 = 0.2217 S X2 = 0.2093

S 2 p = 0.604250641 t cal = 0.4415

CALCULO DEL VALOR TEORICO

GRADOS DE LIBERTAD (n) = 24 ta /2 = 2.0639
ERROR (a) = 5%

REGIONES CRITICAS

Distribución T
de Student

Región de Región de
Rechazo Rechazo
Región de Aceptación

ta/ 2 0 ta/ 2
-2.0639 2.0639
CONCLUSION
" Se ha podido determinar que No existen diferencias estadísticamente significativas entre las medias
aritméticas obtenidas con los datos de los dos analistas para el nivel de significación considerado"

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V EVALUACIÓN DE LA EXACTITUD / RECUPERACIÓN DE ADICIONES DE ACIDO ADOMOICO (ASP)

Concentración Valor Promedio

Muestra
ug/g ug/g
M1 0.10
M2 0.05
M3 0.08 0.06
M4 0.06
M5 0.02

Material de Referencia

Valor Promedio (Experi.) 40.36 ug/g

Aplicamos la siguiente ecuacion:

CS  C
R  100
s

donde:
R: Porcentaje de recuperación
Cs: Concentración de la mezcla fortificada.
C: Concentración de la muestra.
s: Concentración equivalente del analito añadido.

Referencia EPA 200.7 (Acapite 9.4.3)

PRIMER NIVEL

Se adiciono 50uL del estandar de 99.4 ug/mL para obtener una recuperación de 2.48 ug/g

Muestra Muestra con Adicion

Recuperación (%) Promedio (%) Evaluación
(ug/g) (ug/g)
0.06 2.59 102.02 Dentro de los limites
0.06 2.56 100.81 Dentro de los limites
0.06 2.43 95.56 Dentro de los limites
0.06 2.50 98.39 Dentro de los limites
0.06 2.60 102.42 Dentro de los limites
99.11
0.06 2.41 94.76 Dentro de los limites
0.06 2.60 102.42 Dentro de los limites
0.06 2.42 95.16 Dentro de los limites
0.06 2.53 99.60 Dentro de los limites
0.06 2.54 100.00 Dentro de los limites

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SEGUNDO NIVEL

Se adiciono 150uL del estandar de 99.4 ug/mL para obtener una recuperación de 7.46 ug/g

Muestra Muestra con Adicion

Recuperación (%) Promedio (%) Evaluación
(ug/g) (ug/g)
0.06 7.35 97.72 Dentro de los limites
0.06 7.52 100.00 Dentro de los limites
0.06 7.54 100.27 Dentro de los limites
0.06 7.59 100.94 Dentro de los limites
0.06 7.25 96.38 Dentro de los limites
98.55
0.06 7.68 102.14 Dentro de los limites
0.06 7.57 100.67 Dentro de los limites
0.06 7.37 97.99 Dentro de los limites
0.06 6.93 92.09 Dentro de los limites
0.06 7.32 97.32 Dentro de los limites

TERCER NIVEL

Se adiciono 300uL del estandar de 99.4 ug/mL para obtener una recuperación de 14.91 ug/g

Muestra Muestra con Adicion

Recuperación (%) Promedio (%) Evaluación
(ug/g) (ug/g)
0.06 15.44 103.15 Dentro de los limites
0.06 15.30 102.21 Dentro de los limites
0.06 14.97 100.00 Dentro de los limites
0.06 15.40 102.88 Dentro de los limites
0.06 14.51 96.91 Dentro de los limites
99.70
0.06 14.89 99.46 Dentro de los limites
0.06 14.06 93.90 Dentro de los limites
0.06 14.59 97.45 Dentro de los limites
0.06 14.81 98.93 Dentro de los limites
0.06 15.29 102.15 Dentro de los limites

Tomando como referencia el Certificado del NRC CRM-ASP-Mus-c , se tiene como rango de recuperación entre 85% a 115%,
considerando un promedio mayor a 90%, para los tres niveles evaluados podemos concluir que estan dentro de la
recuperaciónesperada, por lo tanto , el metodo validado tiene buena EXACTITUD.

Para los tres niveles evaluados ,los porcentajes de recuperación están dentro de los rangos permitidos

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VI LINEIIDAD DEL METODO DE ACIDO ADOMOICO (ASP)

METODO DE MINIMOS CUADRADOS

Ecuación de la Recta

Y  mX  b
Donde :

m : Pendiente de la Recta
b : Intercepto de a Lineacon el Eje Y
Y: Concentración Estandar
X : Area obtenida ( Rspuesta)

Planteamiento de Hipotesis

Hipotesis Nua Ho : m =0
Hipotesis Alterna Hi m: diferente de cero

Literalmente

Ho : No existe correaci{on entre las variables X e Y

Hi : Si existe correaci{on entre las variables X e Y

DATOS

Concentración (X)
Area (Y) Xi.Y i Yi 2 Xi 2
(ug/g)
1.00 131691 131691 17342519481.00 1
1.00 149383 149383 22315280689.00 1
1.00 145795 145795 21256182025.00 1
1.00 142697 142697 20362433809.00 1
5.00 721400 3607000 520417960000.00 25
5.00 730199 3650995 533190579601.00 25
5.00 775223 3876115 600970699729.00 25
5.00 747130 3735650 558203236900.00 25
10.00 1478738 14787380 2186666072644.00 100
10.00 1474774 14747740 2174958351076.00 100
10.00 1485891 14858910 2207872063881.00 100
10.00 1508852 15088520 2276634357904.00 100
15.00 2283820 34257300 5215833792400.00 225
15.00 2228584 33428760 4966586645056.00 225
15.00 2256612 33849180 5092297718544.00 225
15.00 2249194 33737910 5058873649636.00 225
20.00 3039966 60799320 9241393281156.00 400
20.00 3073309 61466180 9445228209481.00 400
20.00 3047823 60956460 9289225039329.00 400
20.00 2913365 58267300 8487695623225.00 400
25.00 3654848 91371200 13357913903104.00 625
25.00 3648217 91205425 13309487279089.00 625
25.00 3679552 91988800 13539102920704.00 625
25.00 3689826 92245650 13614815910276.00 625
SUMATORIA 45256889.00 818495361 121758643709739.00 5504

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m 148331.5123
b 6837.885887
r 0.999443416
r2 0.998887142

Ecuación de a Recta Y = 148331.5123X + 6837.885887

Grados de Libertad : n-2 = 22 ttabla (α = 0.025) 2.074

tcalculado 140.5237539 >>> 2.074

S2 x,y 1842161855
Sb 1055.561841
Sb2 32.48941121

Empleando el Exce para determinar la Linealidad

4000000
y = 148332x + 6837.9
3500000
R² = 0.9989
3000000
2500000
2000000
1500000
1000000
500000
0
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00

Concusión : Para uuestadistico de α : 0.025 ,existe correlación lineal entre as variables X e Y.

Por lo tanto, si exsite un reación lineal entre la concentración del estandar del Acido Domoico y las areas obtenidas
respectivamente para cada nivel.
El valor de r2 es de 99.89% , esto significa que el 99.89 % de la Concentración del estandar puede ser determinada por e area que
obtenga.

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VII LIMITE DE DETECIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE ACIDO ADOMOICO (ASP)

Se efectuaron tres mediciones por triplicado en a zona inferior a la curva de calibración

para el caculo de Limite de Detección y DE Cuantificación

Concentración
Area s RSD
(ug/L)
0.1 18096 18078 15745 1352.184282 7.81323378 17306
0.25 41632 42451 40462 999.6484382 2.40792108 41515
0.5 84686 83874 84628 452.9944812 0.53674876 84396

1. Caculo de Respuesta a Concentración a Concentración Cero

Anaisis de regresión tomando valores medios de area de la recta

90000
80000 y = 168112x + 107.4
R² = 0.9997
70000
60000
50000
40000
30000
20000
10000
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

Estimación de la respuesta aconcentracón Cero Y bl = 107.4

2. Calculo de la Desviación Estandar de a respuesta aconcentración cero :

Seefectua e anasis de regresión tomando concentración como X y desviación estandar como Y

1600
y = -2241.7x + 1570.1
1400 R² = 0.9996
1200

1000

800

600

400

200

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

Y se toma Sbl = 1570.1

Luego tomando como pendiente b: 148331.5123 los indices a calcular son:

Limite de Detección 0.02 mg/L

0.11 mg/kg

Limite de
0.07 mg/L
Cuantificación
0.37 mg/kg

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VII ROBUSTEZ DE ACIDO ADOMOICO (ASP)

ENSAYOS Platos Teoricos

1 6613
2 6218
3 6742
4 6283
5 6991
6 6362
7 7019
8 6309

Influencia del Factor A : Fujo de la Fase Movil

A= 1/4 ( -6613 + 6218 - 6742 + 6283 - 6991 + 6362 - 7019 + 6309 )

A= -548.25

Influencia del Factor B : Volumen de Inyección

B= 1/4 ( -6613 - 6218 + 6742 + 6283 - 6991 - 6362 + 7019 + 6309 )

B= 42.25

Influencia del Factor C : Peso de Muestra

C = 1/4 ( - 6613 - 6218 - 6742 - 6283 + 6991 + 6362 + 7019 + 6309 )

C= 206.25

Influencia del Factor D : Tiempo de Interación con la Muestra

D = 1/4 ( - 6613 + 6218 + 6742 - 6283 + 6991 - 6362 - 7019 + 6309 )

D= -4.25

Influencia de la Interacción de los Factores A y B :

AB = 1/4 ( + 6613 - 6218 - 6742 + 6283 + 6991 - 6362 - 7019 + 6309 )

AB = -36.25

Influencia de la Interacción de los Factores A y C :

AC = 1/4 ( + 6613 - 6218 + 6742 - 6283 - 6991 + 6362 - 7019 + 6309 )

AC = -121.25

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(Biotoxina Amnésica ASP)

Influencia de la Interacción de los Factores B y C :

BC = 1/4 ( + 6613 + 6218 -6742 -6283 - 6991 - 6362 + 7019 + 6309 )

BC = -54.75

CONCLUSIÓN

De los factores evalualuados , el factor A : Flujo de la Fase Miovil obtuvo el mayor puntaje, por lo que se considera un factor ligeramente critico
en el analisis de Acido Domoico por HPLC, debido al valor absoluto relativamente bajo de su infuencia.
Po lo tanto , se concluye de acuerdo alos datos obtenidos : no se deberá tener una variación mayor de 0,1 mL/min
Para el resto de parametros se considera ROBUSTO el metodo.

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SELECTIVIDAD – ESPECIFICIDAD

Nombre Tiempo de retención

TRIPTOFANO 8.79 min.

ASP 10.25 min.

Nombre Tiempo de retención

TRIPTOFANO 8.58

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(Biotoxina Amnésica ASP)

Nombre Tiempo de retención

ASP 10.23

Conclusión: Al evaluar los tiempos de retención de la Biotoxina ASP y el Triptofano, se concluye que el
método es Selectivo/ Especifico

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(Biotoxina Amnésica ASP)

CALCULO DE LA INCERTIDUMBRE - Biotoxina ASP

El calculo involucrado en la medicion de una concentración de masa de cuialquier

elemento quimico, sobre la base del metodo descrito esta dado por:

ASP( mg / Kg ) 
C0  * (VE )  fd1  fd 2
wm
Donde:
[C0] = Concentración de ASP en la curva de calibración
VE = Volumen de aforo (ml)
wm = Peso de muestra, (g)
fdn = Factor de dilución.

En el siguiente diagrama de flujo se muestra el proceso de extracción del ASP y su ectura final

Pesar 2 g de muestra en
una fiola de 10 mL

Aforar con Metanol a 50 %

Agitar en el vortex por 10

Dejar que lamuestra

interactue por espacio de
2 horas

Agitar en el vortex por 10

min. y centrifugar Preparar disoluciones de
estandar certificado ASP

Lectura de a Curva de
Filtrar con filtro de 0.45 µm Calibración - HPLC

RESULTADO DE ASP

15
 INFORME DE VALIDACIÓN DEL ANASIS DE ACIDO DOMOICO
(Biotoxina Amnésica ASP)

IDENTIFICACION DE FUENTES DE INCERTIDUMBRE

DIAGRAMA DE CAUSA - EFECTO

Precision (Repetibilidad) volumen (r)

Deriva
resolucion
Repetibilidad
(Volumen)
Calibracion.

Repetibilidad
(Masa) corrección temperatura

C MENSURANDO

corrección
calibración

resolucion Estandar ASP

deriva

temperatura Micropipeta

masa (M) Curva de Calibración

Despues de haber identificado las fuentes de incertidumbre nuestra ecuación para el calculo de
la misma queda de la siguiente forma:

C 0  * (V )
ASP ( mg / Kg )  E

w m

Donde:
[C0] = Concentración de Plomo en la curva de calibración
VE = Volumen de aforo (ml)
wm = Peso de muestra, (g)

Aplicanco la ley de propagación de las incertidumbres, la expresion asociada a la concentración

del analito en la muestra seria de la siguiente:

u ( ASP )  u 2
w   u 2
V E   u 2
C 0 

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 INFORME DE VALIDACIÓN DEL ANASIS DE ACIDO DOMOICO
(Biotoxina Amnésica ASP)

ANALISTA ANALISTA 1 ANALISTA 2

1 41.00 40.51
2 40.53 41.00
3 41.26 39.51
4 41.98 42.16
5 40.45 40.31
RESULTADOS 6 41.10 40.59
OBTENIDOS 7 39.55 40.58
(µg/g) 8 40.38 39.79
9 39.99 39.74
10 40.78 39.36
11 39.78 39.77
12 39.29 39.84
13 39.44 40.62

Promedio 40.36
Desviación
Estandar 0.76
n 23

I. INCERTIDUMBRE DEBIDO A LA PRECISIÓN

DESVIACIÓN ESTANDAR 0.7647

II. INCERTIDUMBRE DEL VOLUMEN

Incertidumbre (Fiola 10ml)

CV-1514 - Fiola de 10mL (Aforo)

U= 0.004
U estandar = 0.002

17
 INFORME DE VALIDACIÓN DEL ANASIS DE ACIDO DOMOICO
(Biotoxina Amnésica ASP)

A continuacion desarrollamos las contribuciones de incertidumbre:

INCERTIDUMBRE DEL PROCESO DE PESADO u(w) 0,000551

Incertidumbre (Balanza) u (Bal) = 0,000150499 g

Balanza OHAUS - ELAB-087

I (g) = 2
U = 2√ 0.000000083 + (0,0000000014 x I2) g= 0,000601997
Uestándar = U/2 = 0,000300998

Operador (Analista) u (Ope) = 0,000530 g

Promedio Global 2,0029

Desviación Estándar 0,0018
n 12

u(w )  u  Bal 2  u Ope 1 

2

INCERTIDUMBRE DEL PROCESO DE AFORO u(V E ) 0,002002

Incertidumbre (Fiola 10ml) u (Fiola) = 0,002

CV-1686 - Fiola de 10mL (Aforo)

U= 0,004
U estandar = 0,002

Operador (Analista) u (Ope) = 0,000089

Promedio Global 10,0005

Desviación Estándar 0,000306989
n 12

u(V E )  uFiola  uOpe1 2

2

u ( f a c id o )  u  HCl  2
 u  HNO 3  2
 u ( Fio la ) 2
 u ( Pip 50 ) 2
 u ( Pip 20 ) 2
 u ( Pip10 ) 2

INCERTIDUMBRE DEL MESURANDO u(C 1 ) 0,006536

mL
Tabla de absorbancias utilizadas en la curva

Conc. Area Promedio Area

1,00 131691 149383 145795 142697 142392 mL

5,00 721400 730199 775223 747130 743488
10,00 1478738 1474774 1485891 1508852 1487064
15,00 2283820 2228584 2256612 2249194 2254553 mL
20,00 3039966 3073309 3047823 2913365 3018616
25,00 3654848 3648217 3679552 3689826 3668111

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 INFORME DE VALIDACIÓN DEL ANASIS DE ACIDO DOMOICO
(Biotoxina Amnésica ASP)

U =

RESULTADOS DEL CALCULO DE INCERTIDUMBRE ESTANDAR DE LA CONCENTRACION

b1 148332
b0 6837,9
S 41977
p 4
n 24
Ci(ASP) 40,36
C(curva) 12,67
Sxx 1328,89
u (C 1 ) = 0,2638

RESULTADOS DE LA REPETIBILIDAD DEL ANALISTA

Promedio Global 40,36
Desviación Estándar 0,000
n 26

INCERTIDUMBRE DE LA SOLUCION ESTANDAR u(C 2 ) 0,000206

CONCENT INCERTIDUMBRE
ANALITO TOLERANCIA (µg/mL)
(µg/mL)

ASP 101,80 0,021

INFORMACION CERTIFICADO LOTE 20071205

INCERTIDUMBRE DE LA CURVA DE CALIBRACION u(C 3 ) 0,010710

ELAB-1462 - Pipeta Automatica de 10-100µL u (Pip 10-100ul) = 0,00135

U= 0,27 (x 6) 0,0081
Uestándar = 0,135

ELAB-1463 - Pipeta Automatica de 10-100µL u(Pip 100-100u0l)= 0,000435

U= 0,87 (x 6) 0,00261
Uestándar = 0,435

 (C 0 )  (C1 ) 2  (C 2 ) 2  (C 3 ) 2

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 INFORME DE VALIDACIÓN DEL ANASIS DE ACIDO DOMOICO
(Biotoxina Amnésica ASP)

CALCULO DE LA INCERTIDUMBRE COMBINADA

ASP

u ( ASP )  u 2
w   u 2
V E   u 2
C 0 

Incertidumbre Combinada 0,513 mg/Kg

CALCULO DE LA INCERTIDUMBRE EXPANDIDA

ASP

Estimación de la Incertidumbre de la Medición, se calculará con un factor de cobertura K = 2,

para un nivel de confianza del 95%, la Incertidumbre Expandida:

± 1,03
(2 x Incertidumbre Combinada)

ASP (mg/Kg) = 40.36 ± 1,03

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