 PROFESOR(A) : SONIA POMAREDA

 ALUMNO : JAVIER MOISES MAMANI COHAILA

 CÓDIGO : 2016-111014

 ESPECIALIDAD : ESIA

 AÑO : 3°
NUMERACIÓN DE STAPHYLÓCÓCCUS
AUREUS
CÓAGULASA PÓSITIVÓ

I. FUNDAMENTO
TEÓRICO: Morfología
El S. áureus es un coco inmóvil, de 0.8 a 1 micrómetro de diámetro, que se
divide en tres planos para formar grupos de células irregulares semejantes a
racimos de uvas. En extendidos de pus los cocos aparecen solos, en pares, en
racimos o en cadenas cortas. Los racimos irregulares son característicos de
extendidos tomados de cultivos que se desarrollan en medios sólidos, mientras
que en otros cultivos son frecuentes las formas de diplococos y en cadenas
cortas. Unas pocas cepas producen una capsula o capa de baba que incrementa la
virulencia del microorganismo.
El S. aureus es un microorganismo Gram positivo pero las células viejas y los
microorganismos fagocitados se tiñen como gramnegativos.

II. OBJETIVOS

Determinar la numeración de staphylococcus áureus en muestras de

alimentos.
 Diferenciar dentro del género de staphylococcus las especies patógenas
y no patógenas.

III. EQUIPOS Y MATERIALES:

1. Los requisitos necesarios para la preparación y dilución de la muestra de

alimento
2. Placas de Petri de vidrio (100x 15mm) o de plástico de 90 x 15mm.
3. Pipetas de1ml graduadas al 0.1
4. Extensores de vidrio
5. Baño de agua regulado a 44-46ºC
6. Incubadora regulada a 35º-37ºC
7. AGAR SAIR- PARKER
8. Caldo de cerebro-corazón
9. Tubos de 75 x 10mm contenido 0.3ml de plasma de conejo.
IV. PROCEDIMIENTO

1. Preparar diluciones con anticipación : TElurito de K 1% 2.4ml y la Emulsion de

Yema de huevo 5ml , esta se diluye al 50% con SSF (7.4ml) esta solución
autoclavar y se prepara la solución con con el agar Baird Parker en proporción
1:1
2. Pipetear 0. 1ml del homogenizado y las diluciones por duplicado en la
superficie de las placas de Agar BAIRD PARKER previamente secadas y,
distribuir cada inoculo con un extensor de vidrio hasta que la superficie del
medio aparezca seca.

ABP
ABP
ABP ABP ABP

3. Incubar las placas en posición invertida a 37±1ºC durante 30-48horas.

4. Después de 30 horas de incubación seleccionar las placas que representan

entre 20 y 200 colonias y contar todas aquellas colonias negras y brillantes
con borde blanco angosto rodeadas de zonas claras que contrastan con el
medio opaco. Estas colonias corresponden a Staphylococcus aureus.

5. Marcar la posición de las colonias a incubar las placas durante 18 horas

adicionales.
6. Al final del periodo de incubación (48horas) contar todas las colonias con las
características descritas anteriormente y además aquellas colonias negras
brillantes con o sin borde blanco y sin zonas claras. Someter un número
significativo de colonias sospechosas (no menor a 5) la prueba de la
coagulasa. Algunas cepas de S. áureus pueden aparecer rodeadas de zona
opaca después de 30 horas de incubación de 35-37ºC, para un gran número de
cepas a veces no muestra esta apariencia después de 48 horas y someter a un
número equivalente de ellas a la prueba de la coagulasa. esta prueba servirá
para distinguir aquellos cultivos de S. aureus (coagulasa positivo) de S.
epidermidis (coagulasa negativa) que puedan dar una apariencia similar

7. PRUEBA DE LA COAGULASA
a) Sembrar las colonias seleccionadas en Caldo de cerebro –
corazón e incubar a 35-37°C. durante 20 a 24 horas.
b) Adicionar 0.1ml del cultivo a tubos de 75x10mm que contenga
0.3ml de plasma de conejo incubar a 35°-37°C.
c) Examinar después de 4 horas de incubación si el plasma ha perdido
su fluidez o se encuentra un coágulo más o menos grande. Si la
reacción es negativa, incubar los tubos a temperatura de laboratorio y
re-examinar después de 24 horas. Las diferentes reacciones de
coagulasa se observan en la tabla de puntuación.
8. Calcular del total de colonias características, la proporción de la colonias
positivas a las prueba de la coagulasa teniendo en cuenta dilución empleada
y expresar el número Staphylococcus coagulasa positivo por gramo o
mililitro de muestra
V. RESULTADOS

VI. CONCLUSIONES
 La coagulasa que se quiso determinar fue la coagulasa libre la cual se detecta por
tubos.
 En esta ocasión la prueba salió negativa lo cual hace concluir que el
Staphylococcus hallado es la epidermis que se encuentra en la piel de las
personas al igual que el S. Ominis
 VII. CUESTIONARIO

1.-Indique como se realiza la prueba de la coagulasa.

Mecanismo de acción de la coagulasa libre: procoagulasa (enzima extracelular bacteriana)
reacciona con un factor activador presente en el plasma sanguíneo similar a la protrombina,
dando lugar a un complejo análogo a la trombina (coagulasa propiamente dicha) que
reacciona con fibrinógeno formando un coágulo de fibrina en ausencia de Ca2+.
La coagulasa ligada o factor de agregación actúa directamente sobre el fibrinógeno y lo
convierte en fibrina. No requiere la presencia de activadores plasmáticos.
Para la coagulasa libre en S.Aeurus se detecta con la previa solución de carne molida +
agua peptonada + la solución concentrada en 1:1 de la solución (agar Baird Parker +
Emulsion de Huevo + Telurito de K con SSF –Cin 0.85%-) de estas placas se vierten una
pequeña muestra a 2 tubos de contengan caldo de cerebro corazón incubado37 °C por 24
hrs. Luego de estos tubos se realiza una pequeña muestra y se añade 0.3ml de agar plasma
de conejo y este se deja incubar de 35 a 37°C x 4hrs.
Ya si en esta existe un pequeño coagulo significa coagulasa +.

VIII.BIBLIOGRAFIA
1.- Bourgeois C.M. Microbiología Alimentaria. Editorial Continental S.A.1995.

2.-Frazier, W.C. Microbiología de los alimentos .Ed. Acribia . España 2000.

3.- Mossel.D. Microbiología de los alimentos. Ed. Acribia. España 2000.

4.-DIFCO Manual de medios de cultivo. Ed. Difco.

5.-MERCK. Manual de medios de cultivo Ed. Merck, Alemania.

6.-Ministerio de Salud DIGESA. Manual de Análisis Microbiológico de Alimentos.

7.-FAO-ONU- Manuales para el control de calidad de Alimentos para la agricultura y la

Alimentación. Roma.