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Elaborado por:
Adien A. Lugo Báez MD
Es por eso que surge como componente básico de las ciencias medicas la
microbiología la cual trata de entender la organización, composición y características de los
principales agentes patógenos al ser humano. Dentro del estudio de los microbios, el
abordaje ocurre clasificándolos de acuerdo al reino biológico a que pertenezca. En esta
clasificación encontramos a las bacterias, hongos, protozoarios, anélidos (platihelmitos y
nematelmitos), virus y priones.
Los agentes bacterianos se pueden clasificar por múltiples formas de acuerdo a las
características morfológicas, medios de cultivos y tinciones. Las bacterias son descoloridas y
usualmente invisibles a la luz del microscopio por lo que colorearlas con tinciones ha
permitido visualizarlas.
Membrana Citoplasmática
El citoplasma bacteriano está rodeado por una membrana citoplasmática que se
encuentra inmediatamente por dentro de la capa de peptidoglicanos de la pared celular de las
bacterias Gram + y adyacente al espacio periplasmático en las bacterias Gram -.
1) Grosor de casi 80 nm
2) Constituida por varias capas peptidoglicanos (40-80% del peso seco de algunas paredes
celulares)
Ejemplo:
*Antígeno grupo D de estreptococo y en los miembro del género
enterococos
*El polisacárido C del Streptococcus pneumoniae es un ácido
lipoteicoico complejo (compuesto por ribitol y fosfatos sustituidos
por N-acetil-D-galactosamina,D-glucosa,N-acetil-2,4diamino-2,4,6
tridesoxihexosa por medio de uniones O-glucosídica o con colina).
Esquema de representación de la
bacteria gram-positiva. Tienen un
gruesa capa de peptidoglicano (PGN),
así como ácidos teicoicos (TA) y ácidos
lipoteicoicos (LTA). Membrana
plasmática (Mb), Porinas (PO)
Pared Celular Bacterias Gram -
1) Más delgada que en las bacterias Gram + pero estructuralmente más compleja.
3) Una capa de peptidoglicanos de una sola unidad de espesor forma el borde externo del
espacio periplásmico. Esta capa es bastante laxa y entrecruzada con un grupo carboxilo
terminal de D-alanina en una cadena de aminoácidos libre del residuo de ácido
diaminopimélico en la cadena adyacente de peptidoglicano.
Los LPS son glucolípidos complejos compuestos por una porción lipídoca llamada
lípido A, la región del centro o Core polisacárido y cadenas laterales O-específicas (son
regiones de estructura bioquímica variable confieren una entidad serológica única a las
especies de bacterias Gram -).
Esquema de representación de la
bacteria gram-negativa. Capa bien
delgada de peptidoglicano (PGN), así
como una membrane externa (OM),
constituida por lipopolisacáridos
(LPS), cápsula (Caps), lipoproteinas
(Lprot), membrana plasmática (Mb),
porinas (PO).
TINCIÓN DE GRAM
1. Introducción
Es un método empírico desarrollado en 1884 por el físico danés Hans
Christian Gram para diferenciar las especies de bacterias pneumococos y klebsiella
pneumoniae. Pero a la vez clasifica estos microbios en dos grandes grupos basado en las
propiedades físicas y químicas de la pared celular.
Morfología bacteriana
Según su forma se clasifican en:
*Cocos: esféricos
*Bacilos: bastones (algunos bacilos pequeños se denom cocobacilos)
*Espirales: coma, forma S o espiral
*Pleomórficas: adoptando diferentes formas (aspecto gelatinoso)
Existen 6 grupos de bacterias Gram positivas que causan enfermedades en el humano, 2 de
ellas son cocos y las 4 restantes son bacilos.
Un grupo de cocos:
* Neisseria (eventualmente se agrupan en 2 → diplococos)
Un grupo de espirales:
* Espiroquetas (Treponemas, Borrelias y Leptospiras)
* Micobacteria: bacteria débilmente Gram positiva. La mejor tinción para este grupo
especial es la tinción ácido-alcohol resistente.
* Espiroquetas: son Gram negativas por poseer pared celular fina,; pero son tan
pequeñas que no se pueden ver a la luz del microscopio, por lo que se visualizan mejor en
microscopía de campo oscuro.
2.2 Prácticos
2.2.1 Analizar los procesos de tinción bacteriana.
2.2.2 Realizar el proceso de tinción de Gram.
2.2.3 Interpretar los resultados de la tinción de Gram.
3. Materiales
3.1 Biológico:
a) Cultivos bacterianos
3.2 Equipos
a) Portaobjetos
b) Agua destilada estéril
c) Guantes
d) Asa bacteriológica estéril
e) Lámpara de alcohol
f) Rejilla de tinción
g) Microscopios
h) Aceite de inmersión para microscopio
i) Fósforos
j) Lentes de laboratorio
3.3 Reactivos
a) Set de tinción de Gram
4. Procedimiento
4.1 Procesamiento de la muestra
Se toma cuidadosamente el plato de cultivo bacteriano con las manos cubiertas con
guantes como forma de evitar contacto directo con el germen y utilizando lentes de
laboratorio. Se procede a abrir el cultivo cerca de la lámpara de alcohol.
Con el asa bacteriológica esterilizada (por flameo) hasta tomar color incandescente,
se dejándose enfriar posteriormente. Luego se toma una pequeña muestra del cultivo, de
aproximadamente 10 4 - 10 5 microorganismos/cc (cantidad necesaria para que sea visible),
depositándose sobre una gota de agua esterilizada en un portaobjeto limpio y rotulado donde
se distribuirá homogéneamente hasta realizar el frotis (2 cm diámetro aproximadamente).
Recuerde no dispersarlo mucho o dejarlo compacto para evitar artefactos o superposición de
bacterias.
Inmediatamente de distribuir el contenido con el asa bacteriológica la misma se
deberá esterilizar nuevamente por flameo, previo a su empaquetamiento y almacenaje.