TERAPIA GÉNICA: USO DE VECTORES VIRALES

La terapia génica consiste en una técnica terapéutica basada en la inserción de un gen con una función
determinada o transgen en células de un paciente humano proporcionando supliendo carencias funcionales
por defectos genéticos o aportando nuevas funcione; en ambos casos esto provoca cambios fenotípicos.

1. Tipos de terapia génica

-Por inserción génica: Se incluye en la célula un gen normal respecto al gen mutado que no se modifica.

-Por modificación génica: Se normaliza el gen alterado mediante mutagenesis controlada.

-Por cirugía génica: Se sustituye el gen mutado por el gen normal.

2. Métodos para llevar a cabo terapias génicas

-Ex vivo: Tras obtener las células del paciente, se mantienen en cultivos in vitro. Las células son
transfectadas con el gen terapéutico y se seleccionan e implantan las que han realizado bien el proceso.

-In vivo: El gen terapéutico se introduce directamente en el órgano afectado del paciente. El ADN puede
introducirse de forma directa o mediante un vector viral que ayuda a su correcta entrada y localización
celular, por lo que es importante que sean vectores específicos para las células afectadas evitando recurrir a
técnicas invasivas para introducir el ADN.

3. Metodología

Es importante conocer el tejido diana y seleccionar bien el vector. El ácido nucleíco de la célula diana se
escinde con enzimas de restricción para eliminar el gen patógeno que se sustituyen por el gen terapéutico
(transgen) que se ensambla al azar (posible inactivación de genes celulares), transfecta y posteriormente se
expresa. El transgen debe ser estable, no puede replicarse por sí mismo y se le colocan zonas homologas al
lugar donde se va a insertar en los extremos.

4. Vectores

Sistemas que facilitan la entrada y biodisponibilidad intracelular de un gen exógeno cuando se transfiere
para que funcione correctamente. Existen dos tipos:

4.1. Vectores no virales

Inconvenientes: Bajo índice de transferencia y poca expresión a largo plazo

Ventajas: Alta seguridad con una baja respuesta inmune. Además pueden transferir mayores porciones de
ADN y ser formulados como medicamentos pudiendo ser estudiados farmacológicamente.

Se puede administrar por métodos físicos (ej.: microinyección) o químicos (ej.: policationes, liposomas)

4.2. Vectores virales

Inconvenientes: Solo se pueden transferir pequeños fragmentos de ADN ya que el tamaño de la cápside es
limitado y hay que incluir otras moléculas como la transcriptasa inversa, por lo que suele utilizarse el ADN
complementario (sin intrones). Además produce una respuesta inmune contra el virus y la posible inserción
d genes potencialmente oncogénicos.

Ventajas: Facilidad para infectar células e introducir el transgen de manera muy eficiente. Esta inserción es
más limpia debido a la eficiencia del virus para llegar a los lugares requeridos del genoma del huésped. Otra
ventaja es poder escoger virus que actúen selectivamente sobre ciertas celulas.

El vector viral ideal requiere:

-Ser estable, fácil de producir y purificable a altas concentraciones.

-Ser específico hacia la célula diana y expresar el gen el tiempo necesario con la regulación adecuada.

- No producir respuesta inmune ni provocar inflamación, así como ser inocuo tanto para el paciente como
para el medio ambiente

Existen diferentes tipos de virus utilizados como vectores que podrían utilizarse en enfermedades como la
talasemia, la hemofilia, la hipercolesterolemia familiar etc. y se usan en el SIDA, algunos cánceres etc.

4.2.1. Retrovirus

Virus de ARN monocatenario que contiene tres genes para sintetizar las proteínas de la envuelta, la enzima
transcriptasa inversa y otras proteínas y antígenos específicos. Mediante la transcriptasa inversa sintetizan
ADN bicatenario para integrarlo en el genoma de la célula huésped que puedan replicarse (excepto el
VIH). Se desarrollan en grandes cantidades sin daño celular aparente y su expresión dura mucho tiempo. Se
utilizan en técnicas ex vivo.

Ventajas: Se integran en el genoma del huésped.

Inconvenientes: Existe riesgo de mutaciones y recombinaciones por inserción de ADN al azar y sólo en
células en proliferación activa. Además es difícil concentrar y almacenar estos virus.

4.2.2 Adenovirus

Virus de ADN bicatenario que codifica proteínas de síntesis temprana y tardía. Son del mismo tipo que
causan resfriados comunes y se utilizan el técnicas in vivo.

Ventajas: Solo causan enfermedades benignas y pueden infectar a células en no división. Además se pueden
producir en gran cantidad y transfieren el material genético de manera muy eficiente.

Inconvenientes: Al no integrarse en el genoma del huésped la repuesta no es duradera. Aparte son

reconocidos y eliminados por el sistema inmune, por lo que no se puede volver a infectar.

4.2.3. Virus Adeno-asociados

Parvovirus inocuos de ADN monocatenario lineal que requieren una coinfección con adenovirus o
herpesvirus. Puede infectar a muchos hospedadores, incluyendo celulas en división y en no división. El
problema es que transfectan poco ADN y que es difícil producir grandes cantidades.
4.2.4. Lentivirus

Grupo de retrovirus que incluyen el VIH. Infectan diferentes tipos de celulas en no división integrando su
genoma y se utiliza en terapias in vivo. El vector trans-lentiviral se obtiene separando los genes para dos
enzimas y no es capaz de infectar activamente pero no se reduce su eficacia; además se puede producir en
laboratorios eficientemente.

4.2.5. Herpesvirus

Virus de ADN bicatenario que se replica como un episoma en el núcleo del huésped. Se utilizan in vivo.

Ventajas: Transportan mucho ADN y actúan hasta a nivel del SNC. Actúan en muchos hospedadores.

Inconvenientes: Son citotóxicos, debiéndose eliminar los genes responsables de linfoproliferaciones.

5. Actualidad y futuro de la Terapia Génica

Ahora mismo solo se puede aplicar a enfermedades recesivas, en las que hay un defecto de una actividad,
pero no a enfermedades dominantes, en las que se sintetiza un producto dañino. En un futuro se busca, en
vez de insertar genes, poder sustituirlos por otros aplicándose a estas enfermedades. Es uno de los países
que más pacientes aporta a los estudios y tenemos diez hospitales investigando sobre ello. La legislación es
más permisiva que la de otros países pero muy rigurosa en cuanto a bioseguridad, lo que obliga a una alta
dedicación del personal sanitario que en muchas ocasiones no es posible.

5.1. Requisitos para que la Terapia Génica sea segura

- Este fármaco debe conservarse a –80ºC y estar vigilado y aislado.

- El fármaco debe prepararse en una cabina de seguridad altamente aislada y sin contaminar.

- El fármaco debe administrarse en condiciones quirúrgicas con anestesia local y el médico debe estar
debidamente protegido. Tras ello el paciente debe permanecer una hora aislado y dos más en el hospital.

5.3 Conclusiones

La terapia génica se encarga de generar virus que se repliquen con un fenotipo alterado, inactivar un
oncogén o genes supresores de tumores por mutagenesis insercional, así como de estudiar el potencial
inmunológico de las proteínas codificadas.

Los adenovirus son los más eficientes por ahora en transferencia genética, aunque los más utilizados en
ensayos son los retrovirus. El principal problema de los adenovirus es que su ADN no se integra en el
genoma por lo que ha de repetirse periódicamente la transducción, lo cual no es posible; además de la
expresión de proteínas inmunogénicas. A cambio incorporan gran cantidad de ADN y se les suprime el
ADN que codifica genes patógenos; además transducen las células en reposo o en división con gran
cantidad de viriones.