UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

PRACTICAS DE LABORATORIO UROCULTIVO

Maye Bernal Rivera

Introduccin El cultivo de la orina Urocultivo se solicita para determinar el agente etiolgico de infeccin urinaria. El urocultivo de rutina nicamente est orientado para identificar bacterias gram negativas y gram positivas. Si sospecha etiologa por Mycobacterium tuberculosis u otras bacterias decrecimiento exigente debe especificarse en la orden de solicitud ya que tanto la toma de la muestra como el procedimiento en el laboratorio son diferentes

PRACTICA DE LABORATORIO
Objetivo Proporcionar al estudiante el conocimiento cientfico y las habilidades prcticas de los mtodos y tcnicas utilizados en Microbiologa Mdica para el aislamiento e identificacin del agente etiolgico implicado en los procesos de infeccin urinaria

PARTE I. Siembra y lectura del sedimento urinario

Objetivos especficos Conocer las diferentes metodologas para el aislamiento e identificacin del agente etiolgico en infeccin urinaria Aislar el posible agente etiolgico del paciente asignado Realizar la lectura e interpretacin del sedimento urinario

Materiales Muestra: Orina del paciente (Ver anexo para instrucciones de la toma de la muestra) Medios de cultivo: - Tcnica No. 1 - Microcultivo de Kass: Agar Cled y Mac Conkey - Tcnica No. 2 - Hoeprich: Agar sangre y Mac Conkey Tubo de centrfuga, lminas y microscopio Micropipeta, asas bacteriolgicas, mechero Incubadora a 37C

Procedimiento

Tcnica No. 1 Microcultivo de Kass - Identificar adecuadamente el cilindro que contiene la paleta con los medios de cultivo - Mezclar la muestra de orina y destapar el frasco - Introducir la paleta en la orina de manera que la orina cubra completamente la superficie de los medios - Cerrar el cilindro hermticamente - Incubar a 37C por 24 horas - Centrifugar 10 ml de orina a 2500 rpm por 5 minutos - Leer el sedimento urinario en 40X y anotar los resultados Tcnica No. 2 Mtodo del asa calibrada o Hoeprich - Identificar correctamente los medios de cultivo (A. sangre y Mc Conkey) - Mezclar la muestra de orina y destapar el frasco - Medir con la micropipeta 100 ul de orina y colocarlos sobre la superficie de cada uno de los medios - En agar sangre sembrar en cuadrcula para hacer el recuento de UFC - En Mac Conkey sembrar por agotamiento para aislar el microorganismo - Incubar a 37C por 24 horas - Centrifugar 10 ml de orina a 2500 rpm por 5 minutos - Leer el sedimento urinario en 40X y anotar los resultados Actividad 1. Escriba los agentes etiolgicos gram negativos urinarios ms frecuentes en nuestro medio 2. Escriba los agentes etiolgicos gram positivos urinarios ms frecuentes en nuestro medio 3. Investigue que es el examen fraccionado de orina y su utilidad 4. Realice la orden de solicitud para el laboratorio clnico

PARTE II. Lectura e interpretacin de los cultivos. Identificacin del agente etiolgico.
Materiales Cultivos bacterianos Reactivos y medios para las diferentes pruebas bioqumicas

Procedimiento Tcnica No. 1 Microcultivo de Kass Observar si hubo o no crecimiento en el medio de kled y si hubo crecimiento determinar si es puro o mixto y hacer el recuento de unidades formadoras de colonias (UFC) haciendo la comparacin con la tabla de lectura que trae el kit

Observar si hubo o no crecimiento en el medio de Mac Conkey y si hubo crecimiento determinar si es puro o mixto. Si el crecimiento es positivo realizar a partir de una colonia de este medio las pruebas bioqumicas para la identificacin del germen aislado

Tcnica No. 2 Mtodo del asa calibrada o Hoeprich - Observar si hubo o no crecimiento en el medio de agar sangre y si hubo crecimiento determinar si es puro o mixto - Hacer el recuento de UFC, contando las colonias y multiplicando por cien - Observar si hubo o no crecimiento en el medio de Mac Conkey y si hubo crecimiento determinar si es puro o mixto. Si el crecimiento es positivo realizar a partir de una de las colonias de este medio las pruebas bioqumicas para la identificacin del germen aislado Pruebas Bioqumicas para agentes gram negativos

OXIDASA
Principio Materiales - Cepa a estudiar - Reactivo: diclorhidrato de tetrametil para-fenilen-diamino Procedimiento 1. Con un palillo de madera, transferir parte del centro de una colonia a la superficie del papel 2. Agregar una gota del reactivo y observar la formacin inmediata de un compuesto coloreado azul-morado Resultados - Positiva: Una prueba positiva esta dada por la aparicin de un complejo azulmorado - Negativa: la coloracin queda igual a la de la colonia en estudio - Falsas Positivas: El oxgeno atmosfrico y la luz oxidan el reactivo, por lo que la lectura debe hacerse ante de 30 segundos

BATERIA: TSI LIA SIMONS CITRATO UREA SIM MR/VP OF GLUCOSA

Actividad 1. Realice un flujograma para la identificacin de la bacteria que le fue asignada

PARTE III. Lectura e interpretacin de las pruebas bioqumicas

Objetivos especficos Leer e interpretar las diferentes pruebas bioqumicas Conocer las tablas de identificacin bacteriana Identificar gnero y especie del agente etiolgico

Materiales Cultivos bacterianos Pruebas bioqumicas Reactivos especficos cuando fuere necesario Tabla de identificacin

Procedimiento 1. Leer las pruebas bioqumicas 2. Con base en los resultados obtenidos buscar en la tabla de identificacin 3. Identificar e informar el agente etiolgico Interpretacin de resultados Si hay crecimiento en ambos medios: agar Kled o (Agar sangre) y en Mac Conkey, quiere decir que el microorganismo aislado es un gram negativo Si hay crecimiento nicamente en agar Kled (o agar sangre), quiere decir que se aisl un gram positivo Para que el resultado de laboratorio y el recuento de UFC tenga valides, adems de hacer correlacin clnica debe hacerse correlacin con el sedimento urinario de la muestra procesada. Si se amerita hacer identificacin y antibiograma si se aisla ms de un tipo de microorganismos solicitar nueva muestra para confirmar el hallazgo

Informe al mdico Negativo: Negativo en 48 horas de incubacin Positivo: Microorganismo aislado, recuento de UFC y antibiograma

Actividad 1. Escriba las diferentes patologa urinarias que puede causar el agente aislado 2. Escriba los antimicrobianos que deben probarse frente a este agente etiolgico 3. Realice el informe de laboratorio dirigido al mdico tratante