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CO2 + R-CH2-CH2-NH2
NH3
R-CH2-COOH
(algunos son voltiles y arrastrables por agua)
Enzimas
+ 2 O=N(CH3)3
microbianas
2 N(CH3)3 +
bsico voltil
Se sabe que se produce la HN(CH3)2 pero no se conoce el precursor. Reactivos: MgO puro Agente antiespumante (puede ser alcohol octlico o un antiespumante siliconado) Acido brico 2% Indicador Mortimer: 0,016% rojo de metilo, 0,083% verde de bromocresol en etanol H2SO4 0,02N "standarizado" (preparado por dilucin de H2SO4 0,1 N) Determinacin: Colocar en un baln Kjeldahl 10 a 15 g de muestra preparada exactamente pesada y agregar 2 g de MgO, 300 ml de agua destilada, unas gotas de antiespumante y unos trozos de porcelana porosa o piedra pmez. Instalar el baln en el aparato de destilacin. Poner en un erlenmeyer de 500 ml, 50 ml de solucin de cido brico al 2% y 4 gotas de indicador. Conectar el aparato y colocar el erlenmeyer de manera que el extremo del refrigerante quede sumergido en la solucin de cido brico. Calentar el baln Kjeldahl de modo tal que el lquido contenido entre en ebullicin en exactamente 10 min. Destilar durante 25 min exactos, manteniendo la misma intensidad de calentamiento. Enjuagar el refrigerante con agua destilada recogiendo tambin en el erlenmeyer. Titular el destilado con H2SO4 0,02 N. Expresar el resultado como mg de nitrgeno bsico voltil por 100 g de muestra. Determinacin de Nitrgeno no proteico Pesar con exactitud 0,5-1 gr de muestra y dispersarla en 10 ml de agua destilada. Agregar 10 ml de cido tricloroactico 24%, homogeneizar y centrifugar. Tomar una alcuota de sobrenadante lmpido y determinar N por el mtodo de Kjeldahl.
Determinacin de Nitrgeno lcali lbil: Mtodo de Kofranyi (1950. Milchwissenschafts, 5154 Vol. 2). Determinacin de protenas en leche por destilacin directa.
Fundamento: Es un mtodo rpido basado en la liberacin de amonaco cuando la leche es calentada a ebullicin en solucin alcalina. La mayor parte del amonaco liberado proviene de la rpida hidrlisis de glutamina y asparagina. Determinacin: colocar en un baln Kjeldahl 10 ml de leche, 20 ml de BaCl 2 10 % (usar propipeta) y 70 ml de NaOH 32%. Destilar durante 6 min (exactamente medidos a partir del inicio de la ebullicin), recogiendo sobre 100 ml de BO3H3 2 %. Titular el destilado con SO4H2 0.1N, usando como indicador 6 a 8 gotas de una solucin 0.016 % de rojo de metilo y 0.083 % de verde de bromocresol en alcohol. Calcular el porcentaje de protena (p/p) utilizando una curva de calibracin que relaciona el % protenas con los ml de SO4H2 0.1N gastados. Curva de calibracin: se obtiene siguiendo el procedimiento anterior pero con muestras de leche con contenidos de protena conocidos. Para obtener las distintas muestras de leche se parte de una leche entera a la que se le midi el % de protenas por el mtodo de Kjeldhal; con esta leche se hacen diluciones o se agrega casena para obtener las concentraciones proteicas deseadas. El contenido de protenas que cubra el rango de la curva de calibracin, debe ser de 1 a 4 % (p/v).
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