METODOLOGIAS RPIDAS E DE BAIXO CUSTO PARA TRATAMENTO E RECUPERAO DE ALGUNS SOLVENTES ORGNICOS UTILIZADOS EM SEPARAES CROMATOGRFICAS Joo Oiano-Neto1*;

Andressa Moreira de Souza1; Manuela Cristina Pessanha de Araujo Santiago1; Marcelly Cristina da Silva Santos1; Sidney Pacheco1
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Embrapa Agroindstria de Alimentos. Avenida das Amricas 29.501, Guaratiba, CEP: 23.020-470, Rio de Janeiro - RJ. *E-mail: oiano@ctaa.embrapa.br

ABSTRACT Many laboratories of chromatographic analysis use different solvents as acetonitrile, hexane, chloroform, etc. which generate high quantities of residues during the analyses or by storing solvents out of validity. In both cases, such waste must be disposed safely to avoid environmental contamination. In this study some methodologies were developed for treatment and recovery of acetonitrile, hexane and chloroform in few steps and with low consumption of reagents. All solvents were obtained in high yields and with adequate purity for application in separations by column chromatography and HPLC. Palavras-chave: acetonitrila, cromatografia, clorofrmio, hexano, solventes orgnicos. 1. INTRODUO 1.1. CLOROFRMIO O clorofrmio um solvente no inflamvel, altamente voltil e amplamente utilizado em vrias reas de pesquisa como fitoqumica, bioqumica, biologia molecular, etc. (WINDHOLZ et al., 1983). Decompe-se na presena de luz, agentes oxidantes, cidos e bases fortes, magnsio e sdio metlicos produzindo gs cloro, fosgnio (COCl2) e cido clordrico (HCl). comercializado em frasco mbar e estabilizado com 0,5-1% de etanol ou 100-300ppm de amileno (WINDHOLZ et al., 1983). O fosgnio presente no clorofrmio eliminado pela agitao com soluo alcalina. No entanto, devido alta reatividade do clorofrmio luz e ao oxignio, a eliminao completa do fosgnio no obtida (MORITA & ASSUMPO, 2001). Um processo simples de purificao do clorofrmio comercial envolve as etapas de lavagem com gua, secagem com CaCl2, refluxo sob P2O5, agitao com H2SO4, lavagem com gua, secagem com CaCl2, filtrao e destilao (PERRIN & ARMAREGO, 1988). 1.2. ACETONITRILA A acetonitrila um subproduto da produo da acrilonitrila aplicada na fabricao de fibras txteis. utilizada quando se necessita de um solvente orgnico com grande constante dieltrica, em reaes que requerem ionizao ou como solvente em titulaes no aquosas (WINDHOLZ et al., 1983). um solvente com ampla aplicao em laboratrios que utilizam a CLAE com colunas de fase reversa (NH2, C8 e C18). Na anlise de acares com colunas amino e detector de ndice de refrao o solvente de escolha e "transparente" na deteco por UV-vis. (SNYDER et al., 1997). No auge da crise econmica, o valor da acetonitrila grau HPLC apresentou uma alta de 960% e sendo comercializada a R$ 2.650,00/4L. Os processos de purificao da acetonitrila comercial podem envolver vrias destilaes sob P2O5 ou agitao com NaOH aquoso, sucessivas lavagens com gua, adio de Na2SO4 anidro e destilao sob P2O5 (PERRIN & ARMAREGO, 1988). 1.3. n-HEXANO O n-hexano um hidrocarboneto inflamvel e incompatvel com oxidantes fortes (WINDHOLZ et al., 1983). o principal componente do ter de petrleo e um solvente muito
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utilizado em separaes cromatogrficas em fase normal e na purificao de extratos vegetais para eliminao de lipdios. Os mtodos de purificao de hexano envolvem a destilao azeotrpica, adsoro em slica gel, adsoro em alumina bsica, purificao com cido clorosulfnico (MORITA & ASSUMPO, 2001). A agitao com H2SO4 realizada at o cido permanecer incolor, seguido de neutralizao com NaOH, lavagem com gua, secagem com CaCl2 e destilao. O solvente destilado ento seco com sdio metlico, P2O5, passado atravs de coluna de slica ou peneira molecular e submetido destilao fracionada. A agitao com cido permite a eliminao de impurezas aromticas, graxas e ftalatos (MORITA & ASSUMPO, 2001; PERRIN & ARMAREGO, 1988). 2. MATRIAS E MTODOS 2.1. AMOSTRAS Frascos de clorofrmio, acetonitrila e hexano grau P. A. fora do prazo de validade foram utilizados no processo de purificao. Em outra metodologia de recuperao da acetonitrila, utilizou-se um frasco de 4L contendo a fase mvel da anlise de acares. 2.2. PURIFICAO DO CLOROFRMIO A medida do pH do clorofrmio, para verificar a presena de cido clordrico, foi feita por partio com gua ultrapura (pH 6) 1:1 (v/v) e medindo-se o pH da fase aquosa, cujo valor (pH 1) indicou a presena de HCl. Em seguida, o clorofrmio foi filtrado presso reduzida em leito com 7,0cm de espessura e 410g de alumina neutra Merck 90 (63-200 m) ativada a 110oC por 24h. O objetivo da filtrao foi remover possveis contaminantes mais polares, assim como o fosgnio. Depois de filtrado, o clorofrmio foi agitado com lentilhas de NaOH durante a noite para neutralizao do cido, lavado com gua ultrapura (1:1 v/v) sucessivamente at obter-se pH da fase de 5 a 6. Em seguida, o solvente foi armazenado em frasco mbar contendo Na2SO4 anidro como secante e submetido destilao fracionada. A lavagem com gua elimina os resduos de fosgnio e lcali presentes e neutraliza o diclorocarbeno (:CCl2) formado durante a etapa de neutralizao. Ao final o clorofrmio foi armazenado em frasco mbar com 1% (v/v) de etanol grau HPLC como agente estabilizante. 2.3. PURIFICAO DA ACETONITRILA Na primeira metodologia, a acetonitrila foi filtrada sob leito de alumina neutra, como no tratamento do clorofrmio, para remover contaminantes mais polares como fenis (PERRIN & ARMAREGO (1988). Aps a filtrao, a acetonitrila foi armazenada em frasco mbar com Na2SO4 anidro como secante e submetida destilao fracionada. Na segunda metodologia, quatro litros da fase mvel utilizada na anlise de acares por CLAE (75:25 CH3CN:H2O v/v) foram coletados na sada do detector e mantidos em freezer a -18oC at ocorrer a separao das fase orgnica e aquosa. A acetonitrila (fase orgnica) foi recuperada e armazenada em frasco mbar contendo 30g de Na2SO4 anidro como secante. 2.4. PURIFICAO DO HEXANO O hexano foi agitado com H2SO4 concentrado por 24h com uma razo de 60:1 hexano:H2SO4 (v/v). Ao final deste tempo o cido foi removido, o hexano lavado duas vezes com soluo saturada de CaCO3 1:1 (v/v), lavado em seguida com gua ultrapura com a mesma razo volumtrica, armazenado em frasco mbar contendo Na2SO4 anidro como secante e submetido destilao fracionada. 2.5. PURIFICAO DA ALUMINA NEUTRA

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Aps a etapa de filtrao dos solventes, a alumina foi recuperada, para posterior reutilizao, mediante filtrao com 300mL de metanol grau HPLC e 500mL de gua ultrapura sob vcuo. Em seguida, a alumina foi ativada a 110oC em estufa por 24h. Esta etapa foi realizada aps a filtrao de aproximadamente seis litros de cada solvente. 2.6. DESTILAO FRACIONADA A destilao foi realizada em sistema de destilao fracionada semi automatizado modelo NGW equipado com controle digital de temperatura, razo de refluxo de 0,75 descartando-se a frao inicial (cabea) e final (cauda). No caso do clorofrmio, o solvente foi armazenado em frasco mbar contendo 1% (v/v) de etanol grau HPLC como agente. 2.7. ANLISES POR CG-EM Utilizou-se um cromatgrafo a gs modelo Agilent 6890, detector de massas Agilent 5973N com fonte de impacto eletrnico (EI) a 70eV, coluna da J&W Scientific HP5 (30mx0,25mmx0,25 m), injeo de 1 L em splitless, Tinj. 250oC, Tini. 40oC, gradiente de temperatura 40-150oC a 5oC/min., 150-240oC a 10oC/min., hlio como gs de arraste a vazo de 1,0mL/min. 3. RESULTADOS E DISCUSSO Em estudos de separao de extratos vegetais em colunas de slica gel, a presena de cido no solvente pode gerar artefatos dos metablitos oriundos do metabolismo secundrio do vegetal. Os teores de fosgnio, diclorometano e tetracloreto de carbono presentes no clorofrmio sem tratamento foram 1,23%, 21,79% e 6,77%, respectivamente. A anlise do clorofrmio, aps a destilao, indicou a eliminao dos contaminantes, do cido clordrico e do fosgnio presentes no clorofrmio sem tratamento (FIGURAS 1 e 2).
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CLOROFRMIO SEM TRATAMENTO

1. Fosgnio 2. Diclorometano 3. Clorofrmio 4. Tetracloreto de carbono

CLOROFRMIO APS DESTILAO FRACIONADA

compostos no identificados

FIGURA 1. Cromatograma da anlise do clorofrmio sem tratamento.

FIGURA 2. Cromatograma da anlise do clorofrmio aps tratamento, onde (1) CH2Cl2, (2) CHCl3 e (3) CCl4.

A destilao fracionada no removeu completamente o CH2Cl2 e o CCl4 presentes no clorofrmio, porm reduziu em 48% o teor de CCl4 em relao ao solvente no tratado. O hexano, submetido agitao com H2SO4, indicou a presena de contaminantes em funo da colorao alaranjada do cido (FIGURA 3), sendo submetido ao processo de purificao descrito. O hexano e o clorofrmio obtidos foram testados, separadamente, como fase mvel na anlise de uma mistura de limonides por cromatoplacas de slica e o perfil cromatogrfico foi comparado ao obtido utilizando-se fase mvel preparada com hexano e clorofrmio grau HPLC. Em ambos os casos, o solventes tratados apresentaram o mesmo perfil cromatogrfico (nmero de componentes), valores de fator de reteno (Rf) e seletividade ( ), quando comparados com o clorofrmio e o hexano grau HPLC (FIGURA 4). A presena de tetracloreto de carbono e diclorometano no clorofrmio tratado no interferiu na eficincia de separao cromatogrfica, pois, em relao slica gel, o
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tetracloreto de carbono um solvente apolar e o clorofrmio e o diclorometano apresentarem polaridades relativas iguais ( odiclorometano 0.30; oclorofrmio 0.31).
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FIGURA 3. Resduo de cido sulfrico obtido no tratamento do hexano PA.

FIGURA 4. Cromatoplacas de slica das amostras de limonides utilizando CHCl3 tratado (a) e CHCl3 grau HPLC Tedia (b).

Aps a purificao em leito de alumina e destilao fracionada, a acetonitrila tratada apresentou uma pequena frao de propanonitrila (FIGURAS 5 e 6). A acetonitrila obtida por esta metodologia, assim como a obtida pela metodologia que utiliza congelamento na etapa de separao, foram testadas como fase mvel na anlise de acares por CLAE. Em ambos os casos, no foram observadas alteraes nos tempos de reteno e na sensibilidade de resposta para os acares analisados por CLAE com coluna amino, fase mvel 75:25 CH3CN:H2O (V/V) e deteco por ndice de refrao.
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componentes de maior massa molecular

FIGURA 5. Cromatograma da anlise da acetonitrila P.A. sem tratamento, onde (1) acetonitrila, (2) propanonitrila, (3) 1,2-dicloroetano e (4) tolueno.

FIGURA 6. Cromatograma da anlise da acetonitrila P.A. aps tratamento, onde (1) acetonitrila e (2) propanonitrila.

4. CONCLUSES Os mtodos desenvolvidos mostraram-se rpidos e de fcil execuo, permitindo o tratamento e recuperao de grandes quantidades de solvente com qualidade adequada para uso na purificao de extratos vegetais e na anlise de acares por CLAE. A recuperao e reutilizao da alumina no processo de filtrao contribuem para a diminuio dos custos desta metodologia. Alm de contribuir para a reduo dos custos com a compra de solvente, estas metodologias proporcionam uma significativa economia ao reduzir as quantidades de resduos enviados para descarte e incinerao. 5. BIBLIOGRAFIA MORITA, T. & ASSUMPO, R. M. V. (2001). Manual de solues, reagentes e solventes: padronizao, preparao, purificao. 11a ed., Edgard Blcher LTDA, So Paulo, p.466. PERRIN, D. D. & ARMAREGO, W. L. F. (1988). Purification of laboratory chemicals. 3a ed., Pergamon Press, New York, p.369. SNYDER, L. R.; KIRKLAND, J. J. & GLAJCH, J. L. (1997). Practical HPLC method development. 2a ed., John Wiley & Sons Inc., New York, 765p. WINDHOLZ, M.; BUDAVARI, S.; BLUMETTI, R. F. & OTTERBEIN, E. S. (1983). The Merck Index. 10a ed., Merck & Co., New Jersey, p.10.
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