Acosta Canales Aldo Cano Romero Gustavo Raziel Clavellina Andrade Luis Enrique Martnez Lpez Ricardo Grupo:

605 Fecha de entrega: 23 de Noviembre de 2010

REACCIN ENZIMTICA CATALASA-PEROXIDO DE HIDROGENO BIBLIOGRAFIA Stryer, L. (1995), Bioqumica, Barcelona, cuarta edicin, pp 181-188. Edemal, J (1998), Bioqumica bsica, Mxico, pp 41-47. Bender, M. (1977), Catlisis y accin enzimtica, Barcelona, pp. 110-117.

Resumen La catalasa es una enzima que est presente en los tejidos de animales y vegetales; y tiene una funcin muy importante en sus organismos, ya que protege a la clula del agua oxigenada, que es resultante de los procesos metabolicos que en ella se dan, descomponindola en agua y oxigeno. El objetivo de la prctica fue determinar la cantidad de oxgeno liberada por los diferentes tipos de hgado utilizados al reaccionar con el agua oxigenada; y as mismo tratar de corroborar si efectivamente los tres tipos de tejido heptico desalojan la misma cantidad de oxgeno. Se colocaron varios tipos de tejido heptico en un tubo de ensaye, y posteriormente se desarrollo un dispositivo con un tubo de ensaye, dos vasos de precipitado, una probeta graduada, jeringas y una manguera de latex; cuya finalidad tena la de reproducir la reaccin dada en los organismos entre la enzima catalasa y el agua oxgenada, y a su vez recolectar el volumen de oxgenado liberado en la misma reaccin. Se observ que al llevarse a cabo la reaccin durante los primeros segundos de sta, se libero una gran cantidad de oxgeno, y conforme fue aumentando el tiempo, el oxgeno liberado por segundo fue disminuyendo, dejando as ver el volumen total liberado de este gas. En algunos casos aunque el volumen total de oxgeno es muy parecido, la reaccin dada fue muy diferente, ya que algunos tejidos alcanzaban su mximo volumen de oxigeno liberado en los primeros intervalos de tiempo, mientras que otros alcanzaban este mismo punto intervalos despus. En base a los datos recabados, se concluy que el volumen de oxgeno liberado en las reacciones de cada tipo de tejido heptico era diferente.

Acosta Canales Aldo Cano Romero Gustavo Raziel Clavellina Andrade Luis Enrique Martnez Lpez Ricardo Grupo: 605 Fecha de entrega: 23 de Noviembre de 2010

REACCIN ENZIMTICA CATALASA-PEROXIDO DE HIDROGENO BIBLIOGRAFIA Stryer, L. (1995), Bioqumica, Barcelona, cuarta edicin, pp 181-188. Edemal, J (1998), Bioqumica bsica, Mxico, pp 41-47. Bender, M. (1977), Catlisis y accin enzimtica, Barcelona, pp. 110-117.

Introduccin Las enzimas, catalizadores de los sistemas biolgicos, son molculas que determinan la pauta de las transformaciones qumicas. Tambin intervienen en la transformacin de diferentes tipos de energa. Las caractersticas ms sobresalientes de las enzimas son su poder cataltico y especificidad. Adems, la actividad de muchas enzimas est regulada. Casi todas las enzimas conocidas son protenas, por ello son destruidas (desnaturalizadas) por el calor fuerte, por cidos fuertes o por lcalis fuertes. Las protenas son una clase de macromolculas muy eficaces en catalizar diferentes reacciones qumicas debido a su capacidad para unirse especficamente a un gran nmero de molculas. Utilizando el completo repertorio de fuerzas intermoleculares, las enzimas acercan los sustratos con una orientacin ptima, siendo esto el preludio para establecer o romper enlaces qumicos. En esencia, al estabilizar los estados de transicin, catalizan la reaccin de la especie qumica de mayor energa. Las enzimas tambin pueden actuar como interruptores moleculares que regulan la actividad cataltica transformando energa debido a su capacidad para acoplar la actividad de centros de unin separados. Las enzimas aceleran las reacciones multiplicando su velocidad por un milln de veces e incluso ms.

De hecho, la mayora de las reacciones en los sistemas biolgicos no tienen lugar a velocidades perceptibles en ausencia de enzimas. Una reaccin tan sencilla como la hidratacin del dixido de carbono viene catalizada por una enzima denominada anhidrasa carbnica. Las enzimas son altamente especificas tanto en la reaccin que catalizan como en la seleccin de las sustancias reaccionantes denominadas sustratos. Una enzima cataliza normalmente una sola reaccin qumica o un grupo de reacciones estrechamente relacionadas. En muchas reacciones bioqumicas la energa de las sustancias reaccionantes se convierten en una forma de energa diferente con una eficiencia muy elevada. Un ejemplo de esto seria en la fotosntesis, la energa lumnica se convierte en energa qumica de enlace. En las mitocondrias la energa libre contenida en molculas pequeas derivadas de los alimentos se convierte en un tipo diferente de energa, la de la adhenosina trifosfato (ATP). Las enzimas son afectadas por las condiciones donde se encuentran, tales como: temperatura, pH, concentracin de sustrato. Podemos encontrar cmo reacciona una enzima en presencia de estos factores midiendo los cambios en la actividad enzimtica cuando cambian los factores. Pero la actividad enzimtica es difcil de medir en tejido vivo ya que interfieren muchas otras enzimas y compuestos. Las enzimas se extraen de los tejidos y se purifican de modo que pueda medirse la actividad de la enzima aislada, en condiciones reguladas. Como sucede con cualquier otro compuesto, la cantidad de una enzima puede medirse en moles. Pero no sabemos la masa molecular exacta de la mayora de las enzimas, por lo que usualmente se miden en peso. Las enzimas no reaccionan qumicamente con las sustancias sobre las que actan, es decir el sustrato, ni alteran el equilibrio de la reaccin, solamente aumentan la velocidad con que estas se producen, actuando como catalizadores. La catalasa se encuentra en las clulas de tejidos animales y vegetales y su funcin en estos es necesaria ya que una molcula, la cual es el perxido de hidrogeno H2O2 (agua oxigenada), que es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos, pero dada su toxicidad debe transformarse rpidamente en compuestos menos peligrosos, para ello se usa con frecuencia esta enzima que cataliza su descomposicin en agua y oxgeno La reaccin de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente: 2 H2O2 + C a t a l a s a 2 H2O + O2

El H2O2 es catalizado enzimticamente en organismos anaerobios por la catalasa y otras peroxidasas. En animales, el perxido de hidrogeno se destoxifica mediante las actividades de la catalasa y la glutatin peroxidasa. La catalasa no es esencial para algunos tipos de clulas en condiciones normales, tiene un importante papel en la adquisicin de tolerancia al estrs oxidativa en la respuesta adaptativa de las clulas. La catalasa captura el agua oxigenada de que pueda escapar de la clula y lo convierte en oxigeno molecular. Fue una de las primeras enzimas purificadas ms suficientes con una velocidad de 200000 transformaciones/segundo/subunidad. Es una enzima tetra mtrica, con cuatro subunidades idnticas de 60 KDa, contiene cuatro grupos de ferroprotoporfirina por molcula y no puede ser saturada por H2O2 a ninguna concentracin, catalizando su conversin en agua y oxigeno, para proteger a la clula de agua oxigenada. La catalasa se usa en la industria textil para la eliminacin del perxido de hidrgeno, as como en menor medida se emplea en la limpieza de lentes de contacto que se han esterilizado en una solucin de perxido de hidrgeno. Esta enzima puede actuar como una peroxidasa para muchas sustancias orgnicas, especialmente para el etanol que acta como donante de hidrgeno. Las enzimas de muchos microorganismos, como el Penicillium simplicissimum, que exhiben actividad de catalasa y peroxidasa, son frecuentemente llamadas catalasas-peroxidasas. Objetivo El objetivo de esta prctica es determinar la cantidad de oxgeno liberado durante cada repeticin de la reaccin al cambiar el tipo de tejido heptico utilizado. Hiptesis Si se cambia el tipo de tejido heptico usado en cada repeticin del experimento, ser igual la cantidad de volumen de oxgeno liberado.

Material y mtodos Se consiguieron y se molieron distintos tejidos hepticos, en este caso de pollo, res y cerdo, procurando conservarlos lo ms frescos posibles.

Se cubri la mesa con franelas, para as prevenir cualquier eventual derrame, as mismo como otra medida preventiva se hizo uso de una bata por cada integrante del equipo y guantes para el manejo del perxido. Se colocaron 3 ml de hgado molido en un tubo de ensaye, el cual se encontraba dentro de un vaso de precipitado de 400 ml con agua, posteriormente el tubo de ensaye fue cerrado con un tapn de corcho el cual tena dos orificios, uno mediante el cual se inyectara 3 ml de agua oxigenada con ayuda de una jeringa de vidrio de 5 ml; y en el otro orificio se introdujo una manguera, la cual conectaba con una probeta que se encontraba inmersa en vaso de precipitado de 600 ml con 400 ml de agua (100 de la probeta y 300 del vaso de precipitado), procurando que no quedara aire al interior. Una vez que el dispositivo se encontr listo, se procedi a inyectar el agua oxigenada al interior del tubo de ensaye, para que al reaccionar el oxigeno liberado fuese conducido a travs de la manguera hacia el interior de la probeta, desalojando as un determinado volumen de agua y quedando en su lugar el oxgeno. A partir de la inyeccin de perxido se tomaron lecturas en intervalos de tiempo de 5 segundos, para facilitar la medicin e interpretacin de los datos obtenidos. Al terminar la reaccin cataltica se procedi a desalojar el tubo de ensaye de su contenido, y posteriormente se lavo. De igual forma la probeta con aire se volvi a llenar de agua para llevar a cabo este proceso con los distintos tejidos hepticos. Se realizaron tres repeticiones con cada tipo de hgado. Al trmino de estas se procedi a lavar el material utilizado y dejarlo en su sitio correspondiente.

Resultados En esta tabla que es la referente al lote testigo se puede apreciar que la enzima catalasa es muy especializada, ya que no reaccion con el agua normal teniendo as un volumen desalojado de agua igual a cero.

Lote experimental

En las tres tablas anteriores pdenos observar que conforme transcurra el tiempo el volumen total desalojado de oxigeno era cada vez mayor, pero la cantidad por tiempo cada vez se reduca, lo que nos indica que la velocidad de reaccin iba disminuyendo.

Comparativo de los promedios de tiempo vs volumen de oxigeno liberado al hacer reaccionar 3ml de higado de diferente tipo con 3ml de agua oxigenada.
50 40 Volumen de O2 desalojado (ml)30 20 10 0 0 5 10 15 20 25 30 Res Cerdo Pollo

Tiempo de reaccin (s)

46 44 42 Volumen total 40 de O2 desalojado (ml) 38 36 34 32 Tipo de Hgado

En el

estas que de

tablas ms

podemos observar que hgado cantidad oxigeno

libero al reaccionar con el agua oxigenada fue el

Pollo Res Cerdo

de cerdo. Tomando en cuenta los promedios de oxigeno liberado en los intervalos de tiempo, podemos comentar que algunos tejidos reaccionan ms rpido

en presencia del agua oxigenada alcanzando el volumen final de oxigeno liberado en menor tiempo que los dems. Discusin y conclusiones Tomando en cuenta los datos obtenidos tales como la produccin de oxgeno total, pareciera en principio que los tres tipos de hgado reaccionan de la misma forma, sin embargo esto no es as, tal y como se demuestra en la grfica de tiempo vs volumen, en donde se aprecia que las tomas de res y cerdo y pollo presentan diferentes valores de oxigeno liberado por segundo. La velocidad de reaccin tal vez pudo variar dependiendo de la concentracin con que se hallaba presente la enzima. Por lo tanto podemos concluir que aunque la cantidad de oxgeno total es bastante parecida, la forma en que se da no lo es tanto, ya que unos alcanzaban su mximo valor de este gas antes que otros, dejando claro que el volumen de gas obtenido por la reaccin es siempre diferente.