PROTENAS I - PARTE I. OBJETIVOS: Realizar pruebas experimentales de las propiedades fsicas y qumicas de las protenas II.

. PRINCIPIOS TEORICOS Las protenas son biomolculas formadas por cadenas lineales de aminocidos. El nombre protena proviene de la palabra griega ("proteios"), que significa "primario" o del dios Proteo, por la cantidad de formas que pueden tomar. Por sus propiedades fsico-qumicas, las protenas se pueden clasificar en protenas simples (holoproteidos), que por hidrlisis dan solo aminocidos o sus derivados; protenas conjugadas (heteroproteidos), que por hidrlisis dan aminocidos acompaados de sustancias diversas, y protenas derivadas, sustancias formadas por desnaturalizacin y desdoblamiento de las anteriores. Las protenas son indispensables para la vida, sobre todo por su funcin plstica (constituyen el 80% del protoplasma deshidratado de toda clula), pero tambin por sus funciones biorreguladora (forma parte de las enzimas) y de defensa (los anticuerpos son protenas).1 III. MATERIALES EQUIPOS Y REACTIVOS 3.1 Reactivos Agua destilada Acido sulfrico concentrado Acido Nitrico concentrado Solucin saturada de cloruro de sodio Cloruro de mercurio (II) al 10 % Acetato de plomo al 10 % Ferrocianuro de potasio al 10 % Solucin de sulfato de cobre (II) al 0,05 % Solucin ninhidrina al 0,1 % Solucin de Millon Acido actico Reactivo de Biuret Acido clorhdrico concentrado Hidrxido de sodio al 25 % Hidrxido de sodio al 10 % Acido sulfrico concentrado Reactivo de Schweitzer Solucin de cloruro de sodio al 10 % 3.2 Materiales y equipos 20 Tubos de ensayo 8 tubos de ensayo Varilla de vidrio 3 Probetas de 10 ml , 5 ml y 50 ml Mechero de Bunsen

Termmetro escala 0-100C Rejilla de asbesto Cocina elctrica Esptula Pipetas graduadas 2 Vasos de precipitado de 100 ml 2 Vasos de precipitado de 250 ml 3 pinzas para tubos de ensayo luna de reloj Gradilla Goteros Soporte universal

IV. PARTE EXPERIMENTAL I. SOLUBILIDAD a) Marcamos 4 tubos de ensayo como : A, B, C, D. vertimos a cada tubo 1 ml de la clara de huevo fresco ( para ello se hizo un pequeo agujero en un huevo y separamos la clara de la yema en un vaso de 100 ml ). b) Luego se aadi a cada tubo por separado 4 ml de : agua fra , agua caliente, suero fisiolgico, y solucin de NaOH al 25 %. Agitamos los tubos.Observamos y tomamos nota de la solubilidad de la albmina del huevo en los cuatro disolventes diferentes. El tubo A fue soluble en agua fra , el tubo B fue insoluble, el tubo C fue soluble y el tubo D fue insoluble. c) Con un tenedor y un plato , se bati lo que qued de la clara del huevo , hasta punto de nieve ( merengue ).En un vaso de 100 ml, se puso 15 ml de agua destilada y se aadi el tenedor del merengue .

La albmina, perdi sus solubilidad d) En un vaso de 100 ml se verti 10 ml de clara de huevo y aadimos 40 ml de agua destilada, agitamos y filtramos en un embudo poniendo una gasa doblada que actu como material filtrante.El filtrado le denominamos Solucin A solucin madre.

II. DESNATURALIZACIN 2.1 EFECTO DEL ALCOHOL En un tubo de ensayo mediano pusimos 3 ml de la solucin A, al cual le aadimos 5 ml de alcohol etlico comercial ms 2 gotas de solucin de NaCl al 10 % , agitamos bien y observamos.

La albmina precipita. 2.2 EFECTO DE CIDOS MINERALES En tres tubos de ensayo colocamos 1 ml de HCl (c) , H2SO4 (c) y HNO3 .A cada tubo de ensayo se le aadi 1 ml de la disolucin de la clara de huevo, resbalando por la pared y sin agitar , de tal manera que formaron dos fases. En la interfase aparece el precipitado en forma de anillo blanco. Procedimos a Homogenizar con cuidado y observamos. Con el HCl (c) se form una suspensin blanca , que se homogeniza al agitar. Con el H2SO4 (c) se form una suspensin blanca , el tubo libero calor al agitarlo. Con el HNO3 se form un coagulo blanco amarillento que cuando se lo agit no se homogeniz.

2.3 EFECTO DEL CALOR En un tubo de ensayo se verti 3 ml de la solucin A y se lo puso en un vaso de 250 ml que contenga agua de cao .Introducimos un termmetro y procedimos a calentar lentamente en la cocina elctrica.

Se observa que a la temperatura de 75 C , coagula , tornandose de color blanco. 2.4 EFECTO DE SALES METALICAS a. Se enumer 8 tubos de ensayo pequeos, y vertimos a cada uno de ellos 2 ml de la solucin A. b. A los tubos con nmeros impares se le aadi 25 gotas de acido actico hasta que el medio sea ligeramente cido y se prob con papel indicador , al papel tornasol azul lo hizo virar a color rojo. c. A los tubos 1 y 2 se aadi 10 gotas de solucin saturada de cloruro de Sodio; A los tubos 3 y 4 aadimos 2 gotas de cloruro de mercurio (II) al 10 % ; a los tubos 5 y 6 aadimos 2 gotas de acetato de plomo al 10 % y a los tubos 7 y 8 aadimos 2 gotas de ferrocianuro de potasio al 10%.

III. REACCIONES DE LAS PROTEINAS 3.1 REACCIN DE BIURET: Para reconocer enlaces peptdicos. En un tubo de ensayo pequeo pusimos 1 ml de la solucin A y se aadi 1 ml de hidrxido de Sodio al 10 % y 3 gotas de solucin de sulfato de cobre (II) al

0,05 %, hasta que se observ cambios. Se observ el color violeta , la prueba fue positiva por la presencia de enlaces peptdicos.

3.2 REACCIN NINHIDRINA: Para reconocer aminocidos. En un tubo de ensayo mediano se verti 3 ml de la solucin A , luego se le aadi 5 gotas de solucin de Ninhidrina al 0,1 % , calentamos hasta ebullicin y luego lo enfriamos .

la prueba es positiva la protena efectivamente tiene enlaces - aminocidos . Se observ un color lila . 3.3 REACCIN XANTOPROTEICA: Para reconocer aminocidos en protenas con anillos bencnicos que posean grupos amino o hidroxilo. a. En un tubo de ensayo pequeo pusimos 2 ml de solucin A , le aadimos 3 gotas de HNO3 (c) .Agitamos y observamos la presencia de un color blanco. b. Cogiendo el tubo con una pinza calentamos suavemente y observamos . c. Luego se le aadi 4 gotas de hidrxido de Sodio al 10 % hasta que la solucin se volvi bsica . la reaccin fue negativa , no tiene Tirosina

3.4 REACCIN DE MILLON: Para reconocer en las protenas anillos fenlicos como la Tirosina. En un tubo de ensayo pequeo se puso 2 ml de solucin A, al cual se le aadi unas 3 gotas de solucin de Millon . Se form un precipitado , luego cuando se calent con el mechero de Bunsen , se observ un color anaranjado, la reaccin fue positiva , si tiene tirosina.

3.5 PRUEBA DEL ANILLO DE HELLER En un tubo de ensayo pequeo pequeo se verti 2 ml de HCl (c), por las paredes del tubo en forma inclinada , aadimos gota a gota la solucin A y la reaccin fue positiva , se form el anillo de Heller de color blanquecino.

IV. CUESTIONARIO 1. Exponga sus observaciones sobre la solubilidad de las protenas en los disolventes empleados. El tubo A que contena a la clara del huevo con agua fra fue soluble, el tubo B que contena clara de huevo con agua caliente no fue soluble, el tubo C que contena clara de huevo con Suero fisiolgico fue soluble y el tubo D que contena clara de huevo con la solucin de NaOH al 25 % fue insoluble form cogulos 2. Qu se demuestra con la experiencia del merengue? Qu pasa con sus propiedades? No se disolvi en agua, perdi su solubilidad , se coagul 3. Qu otras funciones cumplen las protenas? Son el componente nitrogenado mayoritario de la dieta y el organismo, tienen una funcin meramente estructural o plstica, esto quiere decir que nos ayudan a construir y regenerar nuestros tejidos, no pudiendo ser reemplazadas por los carbohidratos o las grasas por no contener nitrgeno. No obstante, adems de esta funcin, tambin se caracterizan por: Funciones reguladoras, Son materia prima para la formacin de los jugos digestivos, hormonas, protenas plasmticas, hemoglobina, vitaminas y enzimas que llevan a cabo las reacciones qumicas que se realizan en el organismo. Las protenas son defensivas, en la formacin de anticuerpos y factores de regulacin que actan contra infecciones o agentes extraos. De transporte, protenas transportadoras de oxgeno en sangre como la hemoglobina. En caso de necesidad tambin cumplen una funcin energtica aportando 4 kcal. por gramo de energa al organismo. Funcionan como amortiguadores, ayudando a mantener la reaccin de diversos medios como el plasma. Las protenas actan como catalizadores biolgicos: son enzimas que aceleran la velocidad de las reacciones qumicas del metabolismo. La contraccin muscular se realiza a travs de la miosina y actina, protenas contrctiles que permiten el movimiento celular. Funcin de resistencia. Formacin de la estructura del organismo y de tejidos de sostn y relleno como el conjuntivo, colgeno, elastina y reticulina 4. Qu otros componentes tiene la clara de huevo? La mayor parte de las protenas de la clara corresponde a la ovoalbmina. Otra fraccin proteica de inters en la clara de huevo es la conalbmina (13% del total); esta albmina tambin coagula por aumento de la temperatura (como la ovoalbmina) y tiene gran importancia ya que es transportadora de hierro, hecho que le confiere propiedades antibacterianas al competir por l con bacterias que lo requieren para su desarrollo. 5. Explique lo que sucedi en la experiencia del alcohol , los cidos minerales, el calor y las sales metlicas.Que efectos tuvieron sobre la protena? El alcohol precipita a la albmina del huevo a un color blanco, los cidos de igual manera

El la experiencia del calor, a la temperatura de 75 C se coagul la clara.En el efecto de las sales metlicas la protena precipita 6. De acuerdo al experimento 2.3, explique lo que ocurre durante el cocimiento del huevo. Cuando la temperatura es elevada aumenta la energa cintica de las molculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las protenas, y se desnaturalizan. Asimismo, un aumento de la temperatura destruye las interacciones dbiles y desorganiza la estructura de la protena, de forma que el interior hidrfobo interacciona con el medio acuoso y se produce la agregacin y precipitacin de la protena desnaturalizada. 7. Se puede filtrar la clara de huevo en papel filtro? Por qu? No por que el papel filtro posee agujeros muy finos que no permiten el paso de la clara , en cambio con la gasa si se pudo filtrar por que esta presenta agujeros mas grandes. 8. La solubilidad de la protena depende del pH? Si , la Solubilidad se mantiene siempre y cuando los enlaces fuertes y dbiles estn presentes. Si se aumenta la temperatura y el pH, se pierde la solubilidad. 9. Qu protenas contiene la clara del huevo?,Cmo se llaman?,a qu clase de protenas corresponden? La mayor parte de las protenas de la clara corresponde a la ovoalbmina . Otra fraccin proteica de inters en la clara de huevo es la conalbmina (13% del total); 10. Cuando casualmente existe contacto del cido ntrico concentrado con la piel, Cul de las reacciones efectuadas se produce?, Por qu? La reaccin Xantoproteica , por que la piel contiene la protena Queratina. CONCLUSIONES: V. BIBLIOGRAFA o Gua de practica de laboratorio PROTENAS I - PARTE proporcionada por el profesor Mgr.Raul Paredes Medina.