Capitulo 15 BIOCEL

CAPITULO
15
Seales celulares: comunicacin entre clulas y su ambiente

15-1 Algunas caractersticas bsicas de los sistemas de seales celulares 15-2 Receptores acoplados a protena G y segundos mensajeros La perspectiva humana: Trastornos relacionados con receptores acoplados a protena G 15-3 Receptor de tirosincinasas {RTK}: un segundo tipo principal de sistemas de seales 15-4 Convergencia, divergencia e interferencia entre diferentes sistemas de seales 15-5 Otros sistemas de seales La va experimental: Descubrimiento y caracterizacin de las protenas enlazadas a GTP
l poeta ingls John Donne expres su conviccin respecto de la interdependencia del ser humano en la frase: "Ningn hombre es una isla." Lo mismo se puede decir de las clulas. Es evidente que las clulas dependen de su ambiente para obtener las materias primas necesarias que sostienen su vida. En el captulo 4 vimos que la membrana plasmtica de la clula contiene varios canales diferentes y transportadores que permiten a las clulas introducir selectivamente las sustancias inorgnicas y orgnicas necesarias para mantenerse y para liberar productos de desperdicio. Para su supervivencia tambin es esencial que las clulas se comuniquen con sus vecinas, vigilar las condiciones de su ambiente y responder de manera apropiada a diversos tipos de estmulos que inciden sobre su superficie. Las clulas llevan a cabo estas interacciones mediante un fenmeno conocido como emisin de seales celulares, en el cual se pasa informacin a travs de la membrana plasmtica al interior de la clula y con frecuencia al ncleo celular (g.> 15-1). En la mayor parte de los sistemas las seales celulares incluyen:
FIGURA 15-A. Corte a travs del ojo compuesto de la mosca de la fruta teido con anticuerpos fluorescentes para mostrar la distribucin de la protema calmodulina enlazada a calcio. (Cortesa de Jeffrey A. Porter y Craig Montdl, Tlie Johns Hopkins Universty.)
Reconocimiento del estmulo en la superficie externa de la membrana plasmtica mediante un receptor especfico integrado a la membrana. Transferencia de una seal a travs de la membrana plasmtica hacia la superficie citoplsmica de la misma.
627
628
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente Ligando extracelular
Sitio de contacto clula-clula
Activacin de la actividad de la enzima Cambios en la organizacin del citoesqueleto Cambio en la permeabilidad a iones Activacin de la sntesis de DNA Activacin de la sntesis de RNA
Matriz extracelular FIGURA 1 5 - 1 . Perspectiva de algunas formas como se pueden iniciar las seales intercelulares y los tipos de respuesta que pueden generar. La membrana plasmtica de una clula contiene receptores que se enlazan especficamente a ligandos solubles, matrices extraceiulares y componentes de la superficie de otras clulas. La estimulacin que se origina a partir de estos contactos se puede convertir (transducir) por la membrana celular en seales ntracelulares transmitidas a lo largo de diversas vas. Finalmente, estas seales pueden producir la activacin de enzimas, cambios en la organizacin del citoesqueleto, cambios en la permeabilidad inica, inicio de la sntesis de DNA, o la activacin o represin de la expresin de genes.
plasmtica en vez de actuar a nivel de la superficie celular. Tambin hay casos en los cuales las sustancias que se enlazan a los receptores de la superficie celular evocan una respuesta directa sin iniciar la emisin de seales dentro de la clula. El neurotransmisor acetilcolma acta por un mecanismo de este tipo cuando se enlaza a su receptor sobre la clula del msculo esqueltico, abriendo un canal inico situado entre el propio receptor (pg. 163). La emisin de seales puede afectar casi a todos los aspectos de la estructura y funcin celulares, y sta es una de las principales razones por las cuales este captulo aparece casi al final del libro. Por otra parte, el tema de la emisin de seales celulares puede servir para vincular varias actividades celulares, al parecer independientes. Ningn otro tema parece ilustrar el hecho de que las partes de una clula son elementos interdependientes e incapaces de funcionar en aislamiento. La emisin de seales celulares tambin est ntimamente relacionada con el proceso mediante el cual las clulas regulan su crecimiento y funcin, y este hecho confiere al estudio de las seales celulares importancia especial para comprender de qu manera una clula puede perder el control de su crecimiento y convertirse en tumor maligno.
15-1 Algunas caractersticas bsicas de los sistemas de seales celulares

El trmino "emisin de seales celulares" lleva implcito el concepto de que la clula responde a un estmulo de su ambiente transmitiendo informacin al compartimiento interno de la clula. En la mayor parte de los casos, el estmulo es una molcula secretada en el espacio extracelular por otra clula, pero el estmulo tambin se origina como resultado del contacto con otra clula o con un sustrato no celular (fg. 15-1). Cualquiera que sea su naturaleza, el agente que se enlaza al receptor en la superficie externa de la clula se conoce como ligando. A diferencia de la captacin de nutrientes o de iones, las seales celulares no incluyen la transferencia del agente estimulante a travs de la membrana; todo lo que se transmite a travs de dicha membrana es la seal de que se ha recibido un estmulo. Otro trmino comnmente empleado en relacin con este proceso es transduccin de seales, que indica que la naturaleza del estmulo recibido por el receptor de la superficie celular es totalmente diferente a la seal liberada en el interior de la clula. Como pronto veremos, la transduccin de seales es un proceso complejo que implica el paso de informacin a lo largo de vas de transduccin de seales, en general constituidas por una serie de diversas protenas. En ciertos aspectos, el paso de informacin a travs de la clula es anlogo al paso de electrones a lo largo de una cadena de transporte de electrones. En ambos casos, cada componente de la va es alterado por el elemento "antecedente" en ella, y a su vez altera al elemento "subsecuente" en dicha va. En vez de pasar electrones o alguna otra sustancia especfica, las protenas de una va de transduccin de seales por lo general actan alterando la conformacin de la siguiente protena en la serie, acontecimiento que activa o inhibe a dicha protena (fig. 15-2).
Transmisin de la seal a las molculas efectoras especficas sobre la superficie interna de la membrana o dentro del citoplasma que desencadenan la respuesta celular, la cual puede implicar un cambio en la expresin de genes, alteracin de la actividad en enzimas metablicas, reconfiguracin del citoesqueleto, cambio de permeabilidad a iones, activacin de la sntesis de DNA o incluso la muerte de la clula. Cese de la respuesta como resultado de la destruccin o inactivacin de la molcula emisora de seales combinada con disminucin del grado de estmulo extracelular. Antes de examinar estos pasos con mayor detalle debemos hacer notar que no toda la informacin se transmite desde el espacio extracelular al interior de la clula por medio de un receptor situado en la superficie de la misma. Por ejemplo, en el captulo 12 vimos que las hormonas esferoides actan sobre clulas especficas que atraviesan la membrana plasmtica por difusin e interactan con una protena receptora dentro de la clula, a la cual convierten en factor de transcripcin activo. En el presente captulo describiremos otro ejemplo donde un mensajero intercelular, denominado xido ntrico (NO), atraviesa la membrana
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas \j su ambiente
629
Proteincinasa 3 inactiva
Fosfato Proteincinasa 3 activa Fosfato
RESPUESTA
Proteinfosfatasa 3
Proteincinasa 1 inactiva
Fosfato Proteincinasa Sustrato de protena 1 activa inactivo (p. ej., factor de transmisin)
Sustrato de protena activa (p, ej., capaz de enlazar a la secuencia promotora en el DNA)
FIGURA 15-2, Las vas para transduccin de seales constan principalmente de proteincinasas y proteinfosfatasas cuya accin cataltica cambia la conformacin, y por lo tanto la actividad, de las protenas que modifican. En el ejemplo aqu mostrado, la proteincinasa 1 es activada por la proteincinasa 2. Una vez activada, la proteincinasa 1 fosforila a la proteincinasa 3 activando la enzima. En seguida, la proteincinasa 3 fosforiia un factor de transcripcin incrementando su afinidad por un sitio sobre el DNA que provoca la respuesta. Cada una de estas etapas de activacin puede ser invertida por una fosfatasa.
No es sorprendente, luego de leer otros temas de biologa celular, que los mecanismos ms importantes para que una protena de una va de transduccin de seales altere la actividad de la protena siguiente en la serie sea aadir o eliminar grupos fosfato (fig. 15-2). Como veremos, la va de transduccin de seales de ordinario contiene proteincinasas y fosfatasas, que parecen ser los agentes favoritos para provocar cambios reversibles rpidos en la actividad celular. Algunas de estas cinasas y fosfatasas son protenas citoplsmicas solubles; otras son protenas integrales de membrana. Algunas de estas enzimas poseen gran nmero de protenas como sustratos, en tanto que otras slo fosforilan o desfosforilan un sustrato de protena nico. Gran parte de los sustratos de estas enzimas son otras enzimas, pero los sustratos de protena pueden incluir canales inicos, factores de transcripcin y varios tipos de subunidades reguladoras. En general, aadir o eliminar grupos fosfato a partir del sustrato desencadena un cambio de conformacin en la protena que estimula o inhibe su actividad, y por lo tanto conduce a una respuesta especfica. Otra caracterstica prominente de las vas de seales celulares compartida por otros procesos celulares es el uso de protenas enlazadas a GTP como interruptores que inician o concluyen la actividad. Las protenas enlazadas a GTP se estudiaron en relacin con el trfico de vesculas en el captulo 6, la dinmica de microtbulos y microfilamentos en el captulo 9, y la sntesis de protenas en el captulo 11. En el presente captulo exploraremos su papel en la transmisin de mensajes a lo largo de "circuitos de informacin celular". El anlisis de la emisin de seales celulares en este captulo se centrar en dos tipos contrastantes de vas de transduccin de seales (fig. 15-3). En uno de los tipos de vas, la fijacin de un ligando a un receptor en la superficie celular se indica a travs de la activacin de una protena enlazada a GTP (protena G), en tanto que en el otro tipo de
respuesta, el enlace de ligandos se seala mediante activacin directa de la actividad enzimtica relacionada con el receptor.
Estmulo (ligando)
Receptor
Efector
Efector activado
Estmulo Receptor Receptor (ligando) cinasa activado (inactivo) FIGURA 15-3. Los dos tipos alternativos de vas para la transduccin de seales. En la va 1, el ligando enlazado activa una protena G, que activa un efector, liberando una seal. En la va 2, el ligando' enlazado activa una accin enzimtica (cinasa) del receptor, que activa un efector liberando una seal.
630
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente
L5-2 Receptores acoplados a protena G y segundos mensajeros

La oxidacin de la glucosa por la va catablica de la gluclisis y del ciclo de Krebs suministra a la mayor parte de las clulas su fuente primaria de energa. Dada la importancia de la glucosa en el metabolismo, la comprensin del mecanismo que controla el aprovechamiento de este azcar ha sido un objetivo importante de los bioqumicos y fisilogos por ms de 100 aos. Como se estudi en el captulo 3, la glucosa en los animales se almacena como glucgeno, un polmero insoluble de glucosa. La desintegracin del glucgeno en subunidades ricas en energa es controlada en vertebrados por algunas hormonas, ms notablemente el glucagon, secretado por el pncreas, y la epinefrina, secretada por la mdula suprarrenal. Cada una de estas hormonas se enlaza a un receptor que sobresale en la membrana plasmtica de la clula especfica. El enlace inicia una serie de reacciones que estimulan la enzima fosforilasa, la cual cataliza la reaccin para descomponer el glucgeno en glucosa fosfato, primer paso del catabolismo del azcar (fig. 15-4). Al mismo tiempo, el enlace de ambas hormonas inhibe a la enzima glucgeno sintasa, que cataliza la reaccin opuesta para polimerizar glucosa y formar glucgeno. Por lo tanto, los diferentes tipos de estmulo que inciden en la misma clula blanco pueden inducir la misma respuesta. En la siguiente seccin veremos de qu manera es posible esto. Descubrimiento de un segundo mensajero: AMP cclico La conexin entre el enlace de una hormona a la membrana plasmtica y los cambios de actividad de la fosforilasa y la glucgeno sintasa fue dilucidado mediante estudios iniciados a mediados del decenio de 1950 por dos grupos de investigadores: Earl Sutherland y sus colegas, en la Case Western Reserve University, y Edwin Krebs y Edmond
Fischer, en la Universidad de Washington. El objetivo de Sutherland era desarrollar un sistema in vitro en el cual se pudiera lograr la respuesta fisiolgica a una hormona. Luego de grandes esfuerzos, observ que se poda incubar epinefrina o glucagon con una preparacin de clulas despedazadas y demostrar activacin de la fosforilasa. Esta preparacin de clulas despedazadas se poda dividir mediante centrifugacin en una fraccin con partculas y una fraccin soluble. Aunque la fosforilasa slo se encuentra en la fraccin sobrenadante, se requieren las partculas materiales para la respuesta hormonal. Experimentos subsecuentes indicaron que la respuesta ocurre en dos pasos distintos cuando menos. Si se aisla la fraccin de partculas de un homogenado de hgado y se incuba con la hormona, se produce alguna sustancia nueva que cuando se aade a la fraccin sobrenadante puede activar a la molcula fosforilasa soluble. Sutherland identific a la sustancia liberada por las membranas de la fraccin dividida como monofosfato de adenosina cclico (AMP cclico, o simplemente AMPc). Como estudiaremos en detalle, el AMPc estimula la movilizacin de la glucosa al activar una proteincinasa que aade un fosfato a un residuo especfico de serina del polipptido fosforilasa. El AMP cclico es un ejemplo de segundo mensajero, sustancia liberada dentro de la clula como resultado del enlace de un primer mensajero, una hormona u otro ligando, a un receptor situado en la superficie externa de la clula. Subsecuentes trabajos efectuados por otros investigadores demostraron que el AMP cclico slo es uno de un gran nmero de sustancias que actan como segundos mensajeros en clulas eucariotas. En tanto que el primer mensajero se enlaza exclusivamente a una sola especie de receptor, el segundo mensajero generado en el citoplasma a menudo puede activar varias actividades celulares. Como resultado, el uso de segundos mensajeros permite a las clulas mostrar una respuesta coordinada a gran escala luego de la estimulacin por un solo ligando extracelular. En un momento retornaremos al mecanismo mediante el cual la seal del ligando enlazado se transmite a travs de la membrana,
CH2OH
CH2OH H]TvH
CH2OH HJ--~t\ Fosforilsa
CH^OH H/ \ {GlucosaJn _ Glucgeno
OH
OH
OH
P(
PP;
OH
Glucgeno
(glucosa),,
Glucgeno sintetasa UDP-glucosa (Glucosa)n -
Glucosa 1-fosfato
UTP
\a 6-fosfato
/ \a Glucosa
FIGURA 15-4. Reacciones que conducen al almacenamiento o movilizacin de la glucosa. En estas reacciones, la actividad de dos enzimas claves, fosforilasa y glucgeno sintetasa, estn controladas por hormonas que actan a travs de vas para la transduccin de seales. 6-fosfato Gluclisis i [\ Sangre I
631
que es uno de los principales pasos en el proceso de emisin de seales, pero primero ilustraremos el mecanismo de accin de los sistemas con segundo mensajero para describir de qu manera se sintetiza el AMP cclico y cmo puede desencadenar la movilizacin de glucosa. Movilizacin de glucosa: ejemplo de respuesta inducida por AMPc Una protena integral de membrana sintetiza el AMPc. Esta protena se denomina adenililciclasa y su dominio cataltico reside en la superficie interna de la membrana plasmtica (fig. 15-5). Puesto que provoca la respuesta celular (efectos) mediante la sntesis de AMPc, la adenilciclasa se denomina ef ector. El enlace de glucagon o de epinefrma a la superficie externa de una clula heptica provoca un cambio de conformacin del receptor que es transmitido a travs de la membrana plasmtica y, segn se describe ms adelante, activa la adenililciclasa en la superficie interna de la membrana. Una vez activada la adenililciclasa, cataliza la conversin de ATP en molculas de AMPc que pueden difundir rpidamente al interior del citoplasma (fig. 15-5). El AMPc provoca su respuesta iniciando una cadena de reacciones, varias de las cuales incluyen modificacin por enlaces covalentes de una enzima por otra. Esta reaccin en cascada se ilustra en la figura 15-6. Ya se describi el primer
COOH
paso en la cascada de reacciones que ocurre a medida que la hormona se enlaza al receptor y estimula la sntesis de AMPc (pasos 1 y 2, fig. 15-6). Cada molcula de AMPc puede entonces enlazarse a un sitio alostrico sobre la subunidad reguladora de una proteincinasa especfica dependiente de AMPc, denominada proteincinasa A (PKA) (paso 3). Las subunidades reguladoras normalmente inhiben la actividad enzimtica de las subunidades catalticas de la enzima. El enlace del AMPc provoca disociacin de las subunidades inhibidoras liberando las subunidades catalticas en su forma activa. Los sustratos especficos de PKA de una clula heptica incluyen dos enzimas que desempean un papel crucial en el metabolismo de la glucosa, la glucgeno sintasa y la fosforilasa cinasa (pasos 4 y 5). La fosforilacin de la glucgeno sintasa inhibe su actividad cataltica y por lo tanto evita la conversin de glucosa a glucgeno. Por lo contrario, la fosforilacin de la fosforilasa cinasa activa la enzima para catalizar la transferencia de grupos fosfato a molculas de fosforilasa (paso 6). Krebsy Fischer descubrieron que la adicin de un solo grupo fosfato a un residuo serina especfico en la molcula de fosforilasa activa a esta enzima y estimula el desdoblamiento de glucgeno (paso 7). La glucosa 1-fosfato formada en la reaccin de la fosforilasa se convierte a glucosa, que difunde al interior de la sangre y alcanza los tejidos del cuerpo (paso 8). Uno de los grandes valores de la reaccin en cascada, como la mostrada en la figura 15-6, es que amplifica ampliamente el mensaje original (indicado por las flechas azules en la figura 15-6). En la sangre, la concentracin de hormonas por lo general es muy baja: menos de 10~8 M. Considerando el volumen de sangre en el cuerpo de un vertebrado, esta concentracin baja constituye una seal de comunicacin muy econmica. El enlace de una sola molcula de hormona en la superficie de la clula puede activar varias molculas de adenililciclasa, cada una de las cuales produce numerosos mensajeros AMPc en un breve periodo. Por lo tanto, la produccin del segundo mensajero representa un importante paso de amplificacin en el proceso. Cada molcula de AMPc puede entonces activar una sola molcula de PKA, que puede fosforilar a un gran nmero de molculas de PKA, las cuales a su vez pueden fosforilar un nmero an mayor de molculas de fosforilasa, que por su parte catalizan la formacin de un nmero mucho mayor de fosfatos de glucosa. As, lo que comienza como un estmulo apenas perceptible en la superficie de la clula, rpidamente se transforma en una gran movilizacin de glucosa dentro de ella. Otros aspectos de la va de transduccin de seales del AMPc Aunque los efectos ms rpidos y mejor estudiados de la produccin de AMPc se observan en el citoplasma, el ncleo y sus genes tambin participan en la respuesta. La mayor parte de las molculas PKA activadas permanecen en el citoplasma, pero una fraccin de ellas se transloca al interior del ncleo donde fosforilan protenas nucleares clave (paso 9, fig. 15-6), en particular un factor de transcripcin denominado CREB (siglas en ingls que significan elementa enlazado a protenas que responde al AMPc). La versin fosforilada del CREB se enlaza a diferentes sitios sobre el
0 0 0 ""^N II II II "OPOPOPOCH-j I I I 0~0~0
(T
^C.
H' OH
VH
H/H -C
OH
OH
I-'IGURA 15-5. La formacin de AMP cclico a partir de ATP es catalizada por adenililciclasa, una protena integral de membrana cuyo sitio activo se localiza en la superficie interna de la membrana. La actividad de la enzima es regulada por protenas enlazadas a GTP, segn se estudia ms adelante en el texto y se ilustra en la figura 15-11. La desintegracin del AMPc (no mostrado) se logra gracias a una fosfodiesterasa, que convierte el nucletido cclico a 5' monofosfato.
632
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente Glucagon, epinefrina, otros
Adenililciclasa
Citoplasma
!
Ncleo
x^^ Inactiva
w Activa
Glucgenosintasa
Fosfodiesterasa
Proteincinasa A Inactiva
,j-^ Activa Fosforilasa
O
Activa .
-
Activa ^
Fosfatas a
A s
(0
Fosforilasa cinasa
-.^
/""*!? "f A
Inactiva
Inactiva
Fosfatas a
CH,OPOf O
Activa
O
Glucosa
O
Torrente sanguneo
i)
Glucosa 1 -fosfato Glucgeno
Glucosa 6-fosfato
FIGURA 15-6. Respuesta de una clula heptica a glucagon o epinefrina. Etapas de la respuesta al estmulo hormonal que conducen a la movilizacin de la glucosa, segn se describe en el texto. Muchos de los pasos de la reaccin en cascada se acompaan de una amplificacin espectacular de la seal. Los pasos que conducen a [a amplificacin se indican por flechas azules.
Membrana plasmtica
DNA (paso 10) que contienen una secuencia particular de nucletidos (TGACGTCA) conocida como amplificador regulado de AMPc (ARA). De la pgina 518, recordemos que los amplificadores son sitios en el DNA donde los factores de transcripcin enlazados actan para incrementar la velocidad de inicio de la transcripcin. Se cree que los factores de transcripcin enlazados a los amplificadores actan al enlazarse a las protenas presentes en el complejo preinicial cerca del sitio de comienzo (fig. 12-36). Los amplificadores regulados de AMPc se localizan especficamente en regiones reguladoras del DNA que controlan la expresin de genes que desempean un papel en la respuesta al AMPc. En las clulas del hgado, por ejemplo, varias de las enzimas que participan en la gluconeognesis, va por la cual se forma la glucosa a partir de los intermediarios de la gluclisis (fig. 3-29), son codificadas por genes que contienen ARA cercanos. Por lo tanto, epinefrina y glucagon no slo activan enzimas catablicas participantes en el desdoblamiento de glucgeno, sino tambin conducen a la sntesis de enzimas anablicas necesarias para formar glucosa a partir de precursores ms pequeos. Como sera de esperar, debe haber un mecanismo para revertir los pasos mostrados en la figura 15-6; de otra manera, la clula permanecera en estado activado a partir de ese
momento. Las clulas hepticas contienen varias fosfatasas que catalizan la eliminacin de los grupos fosfato aadidos por las cinasas. La ms importante de estas enzimas, la fosfatasa-1, puede eliminar fosfatos de todas las enzimas fosforilables de la figura 15-6: fosforilasa cinasa, glucgeno sintasa y fosforilasa. Otra ventaja de una reaccin en cascada, adems de la amplificacin, es que cada una de las enzimas a lo largo de la cadena, sea cinasa o f osfatasa, es un sitio potencial donde la clula puede regular la respuesta celular. Por ejemplo, Ja tasa de actividad de fosfatasa-1 es controlada por una protena denominada nhibidor-1, que tambin sufre un ciclo de activacin y desactivacin por fosforilacin y desfosforilacin, respectivamente (fig. 15-7). La fosforilacin del inhibidor-1 es catalizada por la proteincinasa A, la misma cinasa dependiente de AMPc mencionada anteriormente. La activacin de esta cinasa asegura que cuando los niveles de AMPc se elevan, la fosfatasa-1 se inhibe. Sin embargo, tan pronto como desciende la concentracin de AMPc, el inhibidor se desfosforila y por lo tanto activa a la fosfatasa-1, que elimina el fosfato de la fosforilasa y detiene la descomposicin adicional de glucgeno. El AMPc se produce en muchas clulas diferentes en respuesta a una gran variedad de ligandos diferentes (es
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente Hormona
633
AMPc Forma inactiva del inhibidor-1
Forma activa del inhibidor-1
Incremento del *
nivel de fosforilacin de protena }
Disminucin del nivel de fosforilacin de protena FIGURA 15-7. Papel como fosforilador y desfosforilador del inhibidor-1 en la accin hormonal. La formacin de AMPc y la activacin subsecuente de la proteincinasa dependiente de AMPc (PKA) provoca: 1) aumento del nivel de la fosforilacin de protena y 2) fosforilacin y activacin del inhbidor-l, que a su vez provoca inactivacin de la fosfatasa-1, por lo que mantiene as el mayor nivel de fosforilacin de protena. Un descenso en la sntesis de AMPc conduce a la inversin de este estado.
decir, primeros mensajeros). En el cuadro 15-1 se presentan algunas respuestas mediadas por AMPc en clulas de mamferos. En invertebrados tambin se emplea el AMPc como segundo mensajero, segn se ilustra por la elevacin espectacular de la concentracin de AMPc que ocurre en ciertas clulas nerviosas de la liebre marina en respuesta al neurotransmisor serotonina (fig. 15-8). Puesto que el AMPc ejerce su efecto por activacin de PKA, el curso de los acontecimientos que ocurren en una clula dada en respuesta al AMPc ser determinado por las protenas especficas fosforiladas por dicha enzima (fig. 15-9 y cuadro 15-2). Aunque la activacin del PKA en una clula heptica en respuesta a la epinefrina produce descomposicin de glucgeno, la activacin de esta enzima en una clula del tbulo renal en respuesta a vasopresina provoca reduccin de la permeabilidad de la membrana al agua, y en las clulas tiroideas en respuesta a TSH provoca la secrecin de hormona tiroidea. La misma hormona tambin puede producir respuestas muy diferentes en distintas clulas, aun cuando se enlace al mismo receptor. Por ejemplo, la epinefrina se enlaza a un receptor /?-adrenrgico similar en las clulas hepticas, clulas adiposas y clulas del msculo liso del intestino, provocando la sntesis de AMPc en los tres tipos de clulas. Sin embargo, las respuestas son muy diferentes: en la clula heptica se desintegra glucgeno, en las clulas adiposas se desintegran tracilgliceroles, y las clulas del msculo Us se relajan. En todos los casos citados antes, la produccin de AMPc contina slo si se mantiene alta la concentracin del mensajero primario en el espacio extracelular. Cuando la concentracin desciende y estas molculas se disocian de los receptores de membrana de las clulas blanco, se desactiva la adenililciclasa y la sntesis de AMPc desciende de manera aguda (segn se ilustra en la ultima fotografa de la secuencia en la figura 15-8). Las molculas de AMPc ya presentes en el citoplasma se degradan por accin de una enzima, la fosfodiesterasa de nucletido cclica, que concluye la respuesta.
CUADRO 15-1. Ejemplos de respuestas inducidas por hormonas mediadas por AMPc Tejido Hgado Hormona Epinefrina y glucagon Respuesta Hidrlisis de glucgeno, sntesis de glucosa (gluconeognesis), inhibicin de la sntesis de glucgeno Hidrlisis de glucgeno, inhibicin de la sntesis de glucgeno Incremento de la contractilidad Catabolismo del triacilglicerol Incremento de la permeabilidad de las clulas epiteliales al agua Secrecin de hormona tiroidea Incremento de la resorcin de calcio Incremento de la secrecin de hormonas esteroides Incremento de a secrecin de glucocorticoide
Msculo esqueltico Msculo cardiaco Adiposo Renal Tiroideo Hueso Ovario Corteza suprarrenal
Epinefrina Epinefrina Epinefrina, ACTH y glucagon Vasopresina (ADH)

TSH Hormona paratiroidea LH
ACTH
634
FIGUliA 15-8. Demostracin experimental de la sntesis de AMPc en respuesta a estimulacin especfica. Esta serie de fotografas muestran una clula nerviosa sensorial de la liebre marina Aplysia. La concentracin de AMPc libre (indicada en /M por la barra de color en el lado derecho de la ilustracin) se midi por mcroinyeccin de una molcula fluorescente cuyo espectro de emisin es sensible a la concentracin de AMPc. La imagen superior izquierda muestra la concentracin intracelular de AMPc en la neurona no estimulada, y las siguientes cuatro imgenes muestran los efectos de la estimulacin por el neurotransmisor serotonina (5-hidroxitriptamina) en los tiempos indicados. Cuando las clulas se lavan para liberarlas de serotonina, la concentracin de AMPc retorna a las cifras presentes cuando no hay estimulacin. (Reimpreso con permiso de Bran }. Backsai y cois., Science 260:223, 7993; copyright 1993 American Association for the Advancement of Science.)
Estructura y funcin de receptores acoplados a protena G El glucagon es una pequea protena de 29 aminocidos; la epinefrina es una pequea amina hdrfila
H H C-CH2-N-H
cin, una protena G heterotrimrica (fig. 15-10), cuyo descubrimiento y caracterizacin se analizan en La va experimental, al final del captulo. Estas protenas se conocen como protenas G porque se enlazan al nucletido de guanina, sea GDP o GTP. Se describen como heterotrimricas porque
Membrana plasmtica (transporte)
OH
XCH3
Microtbulos (ensamblado/ ^ desensamblado)
sintetizada a partir del aminocido rosina. Estas dos molculas prcticamente no tienen nada en comn desde el punto de vista estructural, pero ambas activan al mismo efector (adenililciclasa), que conduce a la sntesis de AMPc y la subsecuente fosforilacin de la fosforilasa. La similitud de la respuesta al enlace de estas dos hormonas se puede atribuir a la semejanza de sus mecanismos de accin. Los receptores de estos dos ligandos muy diferentes son miembros de la misma familia de protenas integrales de membrana, caracterizadas por siete hlices a que atraviesan la membrana (fig. 15-10). Los segmentos transmembrana estn conectados entre s por asas extracelulares cortas sobre la superficie externa de la membrana, y asas intracelulares cortas sobre la superficie interna de la misma. Los dos receptores difieren entre s sobre todo en la estructura de la bolsa que se enlaza al ligando sobre la superficie extracelular del receptor, que es especfica para una u otra hormona. No slo los dos receptores son muy similares en cuanto a estructura; tambin lo son las protenas que transmiten la seal del receptor enlazado al ligando al efector de adenililciclasa. La transmisin de la seal del receptor al efector se logra mediante un tercer elemento del sistema de transduc-
\o
Lipasa de triglicridc (sntesis de lpidos Glucgeno sintasa (sntesis de glucgeno) Fosforilase cinasa
endoplsmico (sntesis de Cinasa\)
Fosforilasa (desintegracin del glucgeno] Ncleo (sntesis de DNA, diferenciacin, sntesis de RNA)
FIGURA 15-'. Ilustracin esquemtica de los diferentes procesos que se pueden afectar por los cambios de concentracin del AMPc. Todos estos efectos son mediados por la activacin de una o varias proteincinasas.
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente CUADRO 15-2. Muestra de sustratos PKA conocidos Glucgeno sintasa muscular (la). Fosforilasa cinasa a Proteinfosfatasa-1 Piruvatocinasa CREE Tirosina hidroxilasa heptica Receptor 6 de acetilcolina Inhibidor-1 de la proteinfosfatasa Protena ribosmica S6 Troponina de corazn de conejo Hormona sensible a lipasa Fosfofructocinasa Miosincinasa de cadena ligera Fructosa bisfosfatasa Fosforilasa cinasa /3 Sintasa de glucgeno muscular Acetil CoA carboxilasa FUENTE: D.A. Walsh y S.M. van Patten, FASEB /. 8:1234, 1994.
635
y adelante entre dos estados que dependen de las condiciones prevalecientes. La conexin funcional entre un receptor transmembrana de siete hlices y una protena G heterotrimrica parece ser un mecanismo universal mediante el cual un estmulo extracelular inicia la movilizacin de un segundo mensajero en clulas eucariotas. Se han identificado ms de 100 diferentes receptores acoplados a protena G en organismos que van desde levaduras hasta plantas y animales evolutivamente elevadas. Estos receptores responden a una variada disposicin de hormonas, neurotransmsores, f eromonas (sustancias qumicas transmitidas de un miembro a otro de una especie), odorantes (molculas detectadas por receptores olfatorios que despiertan el sentido del olfato), y fotones (los receptores de la retina que detectan la luz son miembros de esta misma familia de molculas receptoras). En el cuadro 15-3 se presenta una lista de algunos ligandos que operan por medio de esta va y los efectores a travs de los cuales actan. En todos los casos examinados hasta la fecha, la estimulacin de receptores acoplados a protenas G sigue una secuencia similar de elementos, segn se indica en la figura 15-11 y se describe a continuacin. 1. Activacin de la protena G por el receptor. El enlace de los ligandos a su receptor especfico provoca un cambio de conformacin del receptor que aumenta su actividad por la protena G. Esta es la nica funcin del ligando extracelular. Como resultado del cambio de conformacin, el receptor enlazado al ligando se enlaza a la protena G sobre la superficie interna de la membrana formando un complejo de protena G-receptor (paso 1, fig. 15-11). La interaccin entre el receptor y la protena G es mediada por varias asas intracelulares en la superficie interna del receptor. La interaccin con el receptor provoca que la subunidad a de la protena G libere su GDP enlazado y se enlace a un sustituto de GTP (paso 2), que cambia a la protena G para llevarla a su estado activo (fig. 15-12). Mientras se encuentre en su estado activado, un solo receptor puede activar a varias molculas sucesivas de protena G, lo que suministra el primer paso en la amplificacin de la va. 2., Transmisin de la seal de la protena G al efector. El intercambio de nucletidos de guanina modifica la conformacin de la subunidad Ga, lo que provoca su disociacin del receptor y de las otras dos subunidades de la protena G, las cuales permanecen juntas como un complejo G^ (paso 3, fig. 15-11). Cada subunidad Ga disociada (con su GTP fijo) est libre para activar una molcula efectora, como la adenililciclasa, que pone en operacin al sistema del segundo mensajero (paso 4).1 En tanto el complejo Ga-GTP permanezca enlazado a una molcula de adenililciclasa (de ordinario en cuestin de segundos), la enzima contina produciendo
todas ellas constan de tres subunidades distintas de polipptido, denominadas a,$jy. Esta propiedad las distingue de otro tipo de protena G que estudiaremos ms adelante en este captulo y que consta de una sola subunidad. Cada protena G puede existir en dos estados: un estado activo en el cual la subunidad a de la protena G se enlaza a una molcula de GTP o un estado inactivo en el cual la subunidad a se enlaza a una molcula de GDP. Como veremos en breve, las protenas heterotrimricas G alternan hacia atrs
Ligando Receptor |
N.H2
Protena G FIGURA 15-10. Mecanismo enlazado a la membrana para la transduccin de seales por medio de un receptor transmembrana de siete hlices y la protena G heterotrimrica. Los receptores de este tipo, incluyendo los que se enlazan a epinefrina y glucagon, contienen siete hlices que atraviesan la membrana. Cuando se enlaza a su ligando, el receptor interacta con una protena G trimrica que a su vez sirve para activar a un efector, como la adenililciclasa.
1 Se conocen ejemplos en los cuales la subunidad a de la protena G inhibe la actividad del efector en vez de estimularla, pero estos casos no sern analizados.
636
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente CUADRO 15-3. Ejemplo de procesos fisiolgicos mediados por protena G Estmulo Epinefrina Serotonina Luz Complejos IgE-antgeno Pptido f-Met Acetilcolina Receptor Receptor /-adrenrgico Receptor a serotonna Rodopsina Receptor IgE de clulas cebadas Receptor quimiotctico Receptor muscarnico Efector Adenilil ciclasa Adeniiil ciclasa Fosfodiesterasa GMPc Fosfolipasa C Fosfolipasa C Canal de potasio Respuesta fisiolgica Desdoblamiento de glucgeno Conducta de sensibilizacin y aprendizaje en Aplisia Excitacin visual Secrecin Quimiotaxia Enlentecimiento de la actividad de marcapaso
Adaptado de L. Srryery H.R. Bourne, reproducido con permiso de Tlie Annual Reviews ofCell Biology, vol. 2, 1986 por Annual Reviews Inc.
molculas de AMPc (paso 5). Se cree que la subunidad formada por el complejo G^y acta independientemente de Ga activando otros efectores subsecuentes, y suministrando una va para transmitir seales adicionales hacia una clula especfica. 3. Las seales se retroalimentan a travs de la membrana. En algunos casos cuando menos, la disociacin de la subunidad Ga del receptor modifica la conformacin del mismo de modo que pierde su afinidad por el ligando, el cual se disocia de su sitio de enlace. Por lo tanto, el receptor no slo transmite una seal al interior del ligando de la protena G, sino que tambin recibe una seal que pasa hacia afuera de la protena G activada. 4. Fin de la respuesta. La subunidad Ga disociada tiene su propia actividad cataltica; acta como GTPasa, que hidroliza la GTP enlazada formando GDP enlazada (paso 6, fig. 15-11). Puesto que la hidrlisis del GTP suprime la capacidad de la subunidad para activar molculas efectoras adicionales, la subunidad a es por lo tanto capaz de inactivarse a s misma. Una vez que la GTP se hidroliza, el complejo Ga-GDP puede reasociarse a las subunidades G/y para reconstituir el complejo trimrico y retornar el sistema al estado de reposo (paso 7). La toxina del clera (producida por la bacteria Vibrio cholerae) ejerce su efecto modificando la subunidad Ga e inhibiendo su actividad GTPasa en las clulas del epitelio intestinal. Como resultado, las molculas de adenililciclasa permanecen en la modalidad activada, batiendo el AMPc, lo que provoca la secrecin de grandes volmenes de lquido intestinal al interior de la luz del intestino. La prdida de agua relacionada con esta respuesta inapropiada casi siempre provoca la muerte a causa de deshidratacin. En La perspectiva humana de este captulo se analizan los efectos de ciertas mutaciones en la funcin de receptores acoplados a protena G.
Especificidad de las respuestas acopladas a protena G
Es evidente que una gran variedad de agentes, incluyendo hormonas, neurotransmisores y estmulos sensoriales, pueden usar mecanismos similares para transmitir informacin
a travs de la membrana plasmtica y desencadenar una gran diversidad de respuestas celulares. Por ejemplo, el AMP cclico puede producir respuestas totalmente diferentes en distintas clulas debido a que este segundo mensajero activa una proteincinasa capaz de fosforilar varios conjuntos de protenas presentes en distintos tipos de clulas. Tambin puede haber considerable especificidad en el "extremo delantero" de la va respecto de diferentes receptores y protenas G. Puede haber un receptor para un ligando determinado en diferentes versiones (soformas) que se cree tienen distinta afinidad con el ligando y tambin afinidad diversa para una protena G particular. Por ejemplo, los investigadores han identificado nueve isoformas del receptor adrenrgico (el receptor que enlaza epinefrina) y 15 isoformas del receptor para serotonina, un neurotransmisor potente liberado por las clulas nerviosas en determinadas porciones del cerebro que gobiernan las emociones. Las isoformas de un receptor pueden coexistir en la misma membrana plasmtica o a veces aparecen en las membranas de diferentes tipos de clulas especficas. Las protenas G heterotrimricas que transmiten seales de receptor a efector tambin pueden existir en mltiples formas. Cuando menos se han identificado 20 subunidades Ga, cinco subunidades G^ y siete subunidades Gy diferentes. Se supone que diversas combinaciones de subunidades especficas sirven para construir protenas G que muestran diferentes propiedades en sus reacciones, tanto con receptores como con efectores. Se puede demostrar, por ejemplo, que un solo receptor puede activar rns de una va de seales en la misma clula. El receptor /3-adrenrgico, por ejemplo, puede activar adenililciclasa y estimular la abertura de canales de Ca2+, lo que conduce a un estado fisiolgico en el cual se pueden producir respuestas por AMPc y Ca2+ activados. Como se mencion en la nota al pie de la pgina 635, algunas protenas G actan inhibiendo a sus efectores. Que una protena G sea estimuladora (protena Gs) o inhibidora (protena G) depende de la naturaleza de la subunidad alfa. El mismo estmulo puede activar una protena G en una clula y una protena Gs en otra clula. Por ejemplo, cuando la epinefrina se enlaza a un receptor /-adrenrgico sobre una clula heptica, activa una protena Gs, que est-
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre as clulas y su ambiente -Ligando
637
FIGURA 15-11. Mecanismo de activacin (o inhibicin) mediado por receptor de los efectores a travs de protenas G heterotrimricas. En el paso 1, el ligando se enlaza al receptor alterando su conformacin e incrementando su afinidad por la protena G a la cual se enlaza. En el paso 2, la subunidad G intercambia GDP por GTP. En el paso 3, la subunidad G(, se disocia del complejo G^y. En el paso 4, la subunidad Ga se enlaza a! efector {en este caso, la adenililciclasa) activando el efector. En el paso 5, la adenlilciclasa produce AMPc. En el paso 6, la actividad GTPasa de Ga hidroliza el GTP enlazado, desactivando a Ga. En el paso 7, Ga se vuelve a asociar a G^, reconstituyendo la protena G trimrica, y el efector cesa su actividad.
mua la produccin de AMPc. Por lo contrario, cuando la epinefrina se enlaza a un receptor c-adrenrgico sobre una clula de msculo liso, se activa una protena G que inhibe la produccin de AMPc. Otros segundos mensajeros El AMPc fue el primer segundo mensajero que se descubri, y todava se estn descubriendo las respuestas que desencadena. Algunas otras vas para transduccin de seales pueden ser activadas por receptores acoplados a protena G. En las siguientes secciones exploraremos unos pocos ejemplos. Fosfatidilinositol derivado de segundos mensajeros Cuando el neurotransmisor acetilcolina se enlaza a superficies de una clula de msculo liso que reviste un vaso sanguneo, estimula a dicha clula muscular a contraerse estrechando el dimetro del vaso. Cuando un antgeno extrao se enlaza a la superficie de una clula cebada, estimula a la clula a secretar histamina, una sustancia que puede desen-
GDP
FIGURA 15-12. Modelo para el cambio de conformacin de una protena G que estimula el intercambio GDP-GTP. En este modelo, el enlace del receptor a la subunidad a tic la protena G afloja la red solidaria de enlaces hidrgeno (crculos amarillos), provocando que el dominio helicoidal (verde) gire alejndose del sitio de enlace del nucletido guanina y permitiendo el libre intercambio de GDP por GTP. (Segn H.R. Bourne, reimpreso con permiso de Nature vol. 366, p, 628, 1993, copyright 1993, MacmiHan Magazines Limited.)
638
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre ias clulas y su ambiente
LA PERSPECTIVA
HUMANA
Trastornos relacionados con receptores acoplados a protena G

Algunos de los mensajeros qumicos ms importantes del cuerpo, como epinefrina, hormona adrenocorticotrpica (ACTH) y las gonadotropinas, hacen sentir su presencia en el cuerpo al enlazarse a receptores que transmiten seales por medio de protenas G heterotrimricas. Algunos de los componentes en la va de sealamiento, como el propio receptor, slo participan en la respuesta a esta hormona particular, en tanto que otros componentes de la cadena, como la adenilciclasa, tal vez participen en las respuestas de clulas a muchos diferentes estmulos extracelulares. Por consiguiente, las mutaciones que afectan gravemente la actividad de las protenas, como la adenililciclasa, sera de esperar que sus efectos se propaguen ampliamente sobre las funciones corporales, efectos que pueden producir la muerte durante el desarrollo embrionario fetal. Por lo contrario/ las mutaciones que producen receptores defectuosos causaran trastornos con una gama ms estrecha de anomalas. En los ltimos aos, algunas enfermedades hereditarias se han atribuido a defectos en receptores de la superficie celular (fig. PH15-1) o def ectos en sus protenas G (cuadro PH 15-1). La diabetes inspida nefrgena congnita (DINC) es una rara enfermedad hereditaria en la cual los lactantes sufren deshidratacin grave como resultado de la incapacidad de sus riones para producir orina concentrada. Si no se diagnostica oportunamente, la deshidratacin crnica puede producir retraso mental, desarrollo inadecuado e incluso la muerte. La enfermedad se debe a la incapacidad de las clulas del rion para responder a la hormona vasopresina (hormona antidiurtica). Numerosos estudios en lactantes con esta enfermedad indican que se puede originar a partir de anomalas en los receptores de vasopresina. En la mayor parte de estos casos, el polipptido es anormalmente corto como resultado de una mutacin que introduce un codn para detener la sntesis de polipptido en el RNAm provocando la terminacin prematura de dicha sntesis (pg. 475). Una de las mutaciones estudiadas provoca cambio de un aminocidos situado en la unin entre el tercer segmento transmembrana y la segunda asa intracelular del receptor de siete hlices (sitio 4, fig. PH 15-1). Aunque este receptor todava puede enlazarse a la vasopresina en la superficie externa, la superficie interna del receptor es incapaz de activar la protena G y por lo tanto no puede pasar la seal hacia el efector. Una mutacin que provoca prcticamente el efecto opuesto sobre la interaccin entre receptor y protena G causa un tumor tiroideo benigno llamado adenoma. A diferencia de las clulas normales de tiroides que secretan hormona tiroidea slo en respuesta a la estimulacin por la hormona hipofisaria TSH, las clulas de estos adenomas tiroideos secretan grandes cantidades de hormona tiroidea sin ser estimuladas por TSH (se dice que el receptor acta constitutivamente). Los estudios indican que en el receptor de TSH de estas clulas hay sustitucin
NHc
Extra celular
COOH FIGURA PH 15-1. Representacin bidimensional de siete receptores transmembrana "compuestos" que muestran los sitios aproximados de varias mutaciones causantes de enfermedades humanas. La mayor parte de las mutaciones (nmeros 1, 2, 5, 6, 7 y 8) dan como resultado la estimulacin constitutiva del efector, pero otras (3 y 4) bloquean la capacidad del receptor para estimular el efector. Las mutaciones en los sitios 1 y 2 se observan en el receptor de MSH (hormona estimuladora de melanoctos), sitio 3 en el receptor de ACTH, sitio 4 en el receptor de vasopresina, 5 y 6 en el receptor de TSH (hormona estimuladora de tiroides), 7 en el receptor de LH (hormona luteinizante) y 8 en la rodopsina, el pigmento fotosensible de la retina.
639
de aminocidos que afectan la estructura de la tercera asa de la protena (fig. PH 15-1, mutaciones en el sitio 5 o 6). Como resultado de la mutacin, el receptor de TSH activa constitutivamente una protena G en su superficie interna y enva una seal continua a travs de la va que no slo provoca secrecin excesiva de hormona tiroidea, sino tambin crecimiento y divisin excesiva de la clula que causa el tumor. Esta conclusin se comprob introduciendo el gen mutante en clulas cultivadas que normalmente carecen de este receptor y demostrando que la sntesis de la protena mutante y su incorporacin a la membrana plasmtica conduce a la produccin continua de AMPc en clulas manipuladas genticamente. La mutacin que provoca los adenomas tiroideos no se observa en la
porcin normal de la glndula tiroides del paciente, sino slo en el sitio tumoral, lo que indica que la mutacin no es hereditaria sino que se origin en alguna clula tiroidea, la cual prolifera para dar lugar al tumor. Una mutacin en una clula del cuerpo, como una clula tiroidea, se denomina mutacin somtica, para distinguirla de una mutacin hereditaria que ocurre en todas las clulas individuales. Como veremos en el captulo 16, las mutaciones somticas son causa primaria de cncer humano. En el cuadro PH 15-1 se hace notar que las mutaciones en genes que codifican las subunidades de las protenas G heterotrimricas tambin pueden conducir a trastornos hereditarios, como se ilustra en un trabajo recientemente publicado acerca de dos pacientes varones afectados de una combinacin rara
CUADRO PH 15-1. Enfermedades humanas vinculadas con la va de la protena G

Enfermedad Protena G defectuosa"
Osteodistrofia hereditaria de Albright y seudohipoparatiroidismo Sndrome de McCune-Albright Tumores hpofisarios y tiroideos (encogen gsp) Tumores ovricos adrenocorticales {oncogen gip) Pubertad precoz mixta y seudohipoparatiroidismo
Enfermedad Receptor de protena C defectuoso
Hipercalcemia hipocalcirica familiar Hiperparatiroidismo grave neonatal Hipertiroidismo (adenoma tiroideo) Pubertad precoz masculina familiar Diabetes nefrgena inspida vinculada al cromosoma X Retinitis pigmentaria Ceguera a los colores, variaciones en la sensibilidad al espectro de luz Deficiencia familiar de glucocorticoides y deficiencia aisiada de glucocorticoides
Receptor humano anlogo de BoPCARl Receptor humano anlogo de BoPCARl (homocigoto) Receptor de tirotropina Receptor de hormona luteinizante (LH) Receptor de vasopresina V2 Receptor de rodopsina Receptor de opsina fusiforme Receptor de hormona adrenocorticotrpica (ACTH)
* Segn se describe en el texto, una protena G con G^ acta para estimular el efector, en tanto que una protena G con una G\ inhibe al efector. FUENTE: D.E. Clapham, reimpreso con permiso de Nature, vol. 371, p. 109, 1994. Copyright 1994 por Macmillan Magazines Limited.
de enfermedad endocrina: pubertad precoz e hipoparatiroidismo. Se observ que ambos pacientes tienen una sola sustitucin de un aminocido en una de las isoformas Ga. La alteracin en la secuencia de aminocidos caus dos efectos en la protena G de la cual forman parte. A temperaturas por debajo de la temperatura normal del cuerpo, la protena G mutante permaneci en estado activo, aun en ausencia de un ligando enlazado. En contraste, a la temperatura normal del cuerpo, la protena G mutante se mostr inactiva, tanto en presencia como en ausencia de un ligando enlazado. Los testculos, que se encuentran alojados fuera del centro del cuerpo, tienen temperatura menor que los rganos viscerales del cuerpo (33C en comparacin a 37C). En condiciones normales, las clulas endocrinas de los testculos inician la produccin de testosterona en el momento de la pubertad como respuesta a la hormona'hipofisaria LH, que se comienza a producir en ese momento. La LH circulante se enlaza a los receptores LH situados en la superficie de las clulas testiculares, y desencadena la sntesis de AMPc y la produccin subsecuente de la hormona sexual masculina. Las clulas testiculares del paciente portadoras de la mutacin de la protena G fueron estimuladas para sintetizar AMPc en ausencia del ligando LH, provocando la sntesis prematura de testosterona y pubertad precoz. En contraste, la mutacin en la subunidad Ga de las clulas de las glndulas paratiroides, que funcionan a una temperatura de 37C, inactivo a la protena G. Como resultado, las clulas de la glndula paratiroides no respondieron a los estmulos que normalmente causaran la secrecin de hormona paratiroidea, lo que condujo a la enfermedad hipoparatiroidismo. El hecho de que la mayor parte de los rganos del cuerpo funcionan de manera normal sugiere que esta subunidad Ga particular no es esencial en la actividad de la mayor parte de las otras clulas.
640
cadenar los sntomas de un ataque de alergia. Ambas respuestas, una que produce secrecin y la otra contraccin, son desencadenadas por el mismo mensajero celular, una sustancia derivada del compuesto fosfatidilinositol. Recordemos del captulo 4 que el fosfatidilinositol (PI) es uno de los componentes menores de la membrana celular (fig. 4-22). El fosfatidilinositol no slo es un componente estructural de la bicapa de lpidos, sino tambin es precursor de algunas molculas reguladoras claves cuyas estructuras se muestran en la figura 15-13. La adicin de un solo grupo fosfato al inositol del azcar de PI genera PI 4-fosfato (PIP), que se puede fosforilar una segunda vez para formar PI 4,5-difosfato (PIPz) (pasos 1 y 2, fig. 15-13). Cuando la acetilcolina se enlaza a una clula de msculo liso o un antgeno se enlaza a una clula cebada, el receptor enlazado activa una protena G heterotrimrica (paso 3), que a su vez activa al receptor fosfolipasa C, el cual (igual que la adenililciclasa) se sita en la superficie interna de la membrana (fig. 15-13).2 La fosfolipasa C es una enzima que cataliza una reaccin para separar PI?2 en dos molculas, inositol 1,4,5-trfosfato (IP^) y diacilglicerol (DAG) (paso 4); ambas reacciones desempean papeles importantes como segundos mensajeros en las seales celulares. Examinaremos cada uno de estos segundos mensajeros por separado.
2 La fosfolipasa C activada por las protenas G se identifica como PLQ3, para distinguirla de una isoforma llamada PLCy, activada por un receptor de tirosincinasa (pg. 672). Ambas formas catalizan la misma reaccin pero muestran diferentes propiedades.
Diacilglicerol (DAG). El diacilglicerol (fig. 15-13) es una molcula lpida que permanece en la membrana plasmtica despus de ser sintetizada por fosfolipasa C. All activa a un efector, llamado proteincinasa C (fig. 15-14), que fosforila residuos de serina y treonina sobre las protenas especficas. La proteincinasa C es en realidad miembro de una familia de enzimas relacionadas, algunas de las cuales son activadas slo por segundos mensajeros lpidos, como el DAG, en tanto que otras requieren la presencia simultnea de iones Ca2+ (de all la C en el nombre de la enzima) como coactivador. Igual que la proteincinasa A (la enzima activada por el AMPc), la proteincinasa C es una cinasa multifuncional, y serina y treonina son capaces de fosforilar a una gran variedad de protenas. La proteincinasa C tiene varios papeles importantes en el crecimiento y diferenciacin celular, el metabolismo celular y la activacin de transcripcin, la mayor parte de las cuales todava no son bien comprendidas (cuadro 15-4). En clulas hepticas, la proteincinasa C acta de manera sinrgica con la proteincinasa A; ambas cinasas fosforilan la glucgeno sintasa inhibiendo la actividad de esta enzima polimerizadora de glucosa. En mioblastos, o sea, clulas embrionarias que darn lugar a clulas musculares, la activacin de la proteincinasa C conduce a la fosforilacin de la protena miogenina, factor de transcripcin que desempea un papel clave en la diferenciacin de la clula muscular (fig. 12-41). La fosforilacin de miogenina inhibe su capacidad para enlazarse a DNA, y por lo tanto impide la diferenciacin de las clulas en fibras musculares. La aparente importancia de la proteincinasa C en el control del crecimiento se observa en estudios con un grupo de compuestos potentes de plantas llamados esteres deforbol.
Ligando
DAG
F1GUKA 15-13. Generacin de segundos mensajeros como resultado de la desintegracin inducida por ligando del osfatidilinocitol (PI) en la bicapa de lpidos. En los pasos 1 y 2 se aaden grupos osto al osfatidilinocitol (PI) para formar PIPj. Cuando el receptor recibe un estmulo, el receptor enlazado al gando activa una protena G heterotrimrica (paso 3), que activa la enzima fosfolipasa C fPLC), que cataliza la reaccin en la cual PI?2 se separa en diacilglicerol (DAG) y 1,4,5-trifosfato de inositol (1P3) (paso 4}. El 1P3 difunde al interior del citoplasma (paso 5) donde se enlaza a un receptor IPj en la membrana del retculo endoplsmico liso (paso 6), que tambin es un canal de Ca2+. El enlace de IP^ a su receptor conduce a la liberacin de iones calcio dentro del citoplasma (paso 7). En la siguiente figura se muestra la accin de diacilglicerol.
Receptor IP3
RE liso
o o
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre as clulas y su ambiente
641
Inactiva
Membrana Sustrato
Activa FIGURA 15-14. Modelo de la activacin de una proteincinasa C (PKC). En este modelo, la molcula PKC consta de varios dominios, incluyendo un dominio cataltico (C), un dominio regulador (R), una bolsa para enlazar sustrato (S) que constituye el sitio activo, y un motivo seudosustrato (P) que consta de una parte de la protena que puede adaptarse sobre el sitio activo. En la parte de arriba se muestra la molcula PKC en el estado inactivo, en el cual P se une a S, impidiendo el acceso al verdadero sustrato. Cuando DAG es activado por lpidos, Ca2+ o ambos, la molcula sufre un cambio de conformacin (abajo) que permite el acceso al sustrato del sitio activo de la enzima. (Segn L.V. Dekkery P.J. Parker, Trends in Biochem. Sci. 19:73, 1994.)
tran un fenotipo maligno permanente en cultivo de clulas y son capaces de producir tumores en ratones susceptibles. 1,4,5-trifosfato de inositol (IP3). El 1,4,5-trifosfato de inositol (IPs) es un azcar fosfato, una pequea molcula hidrosoluble capaz de difundir con rapidez. Las molculas I?3 formadas en la membrana difunden hacia el interior del citoplasma (paso 5, fig. 15-13) y se enlazan a un receptor IPa especfico localizado en la superficie del retculo endoplsmico Uso (paso 6, fig. 15-13). En la pgina 281, se hizo notar que el REL es un sitio de almacenamiento de calcio en varias clulas. Su receptor IPs es ms que un receptor; tambin es un canal tetramrico de Ca2+. El enlace de IP3 abre el canal y permite difundir a los iones Ca2+ hacia el citoplasma (paso 7, fig. 15-13). Los iones Ca2+ tambin se pueden considerar como mensajeros celulares, puesto que difunden al citoplasma y se enlazan a diferentes molculas especficas desencadenando respuestas especficas. En los dos ejemplos mencionados antes, tanto la contraccin de una clula de msculo liso como la exocitoss de granulos secretorios que contienen histamina en una clula cebada son desencadenados por concentracin elevada de calcio. Igual es la respuesta de una clula heptica a la hormona vasopresina (la misma hormona con actividad antidiurtica en el rion). La vasopresina se-une a su receptor a nivel de la superficie celular y genera una serie de descargas de liberacin de Ca2+ mediada por IPs, que aparecen como oscilaciones de la concentracin de calcio libre ert el registro mostrado en la figura 15-15. El efecto de IPs de ordinario es transitorio debido a su rpida inactivacin por medio de enzimas. En el cuadro 15-5 se presenta una lista de algunas respuestas mediadas por TP$.
Ms acerca del calcio
Estos compuestos activan la proteincinasa C en varias clulas normales cultivadas, lo que provoca prdida de control del crecimiento y comportamiento transitorio como clulas malignas. Cuando se elimina el ster de forbol del medio, las clulas recuperan sus propiedades de crecimiento normal. En contraste, las clulas manipuladas genticamente para expresar en forma constitutiva la proteincinasa C mues-
CUAURO 1 5-4. Ejemplos de respuesta mediada por proteincinasa C Tejido Plaquetas sanguneas Clulas cebadas Mdula suprarrenal Pncreas Clulas de la hipfisis Tiroides Testculos Neuronas Msculo liso Hgado Tejido adiposo Respuesta Liberacin de serotonina Liberacin de histamina Secrecin de epinefrina Secrecin de insulina Secrecin de GH y LH Secrecin de calcitonina Sntesis de testosterona Liberacin de dopa mina Incremento de la contractilidad Hidrlisis de glucgeno Sntesis de grasa
FUENTE: U. Kikkawa y Y. Nishzuka, reproducido con permiso de Amiital Review ofCell Biology, vol 2, 1986 por Annual Revicws Inc.
Los iones calcio desempean un papel clave en una notable variedad de actividades celulares importantes, incluyendo divisin celular, secrecin, endocitosis, fertilizacin, transmisin sinptica, metabolismo y movimiento celular. Se han desarrollado tcnicas de imgenes computadorizadas que emplean colorantes fluorescentes que se enlazan a calcio para revelar la concentracin de iones libres de calcio en diferentes partes de una clula en distintos momentos. Estas tcnicas suministran imgenes espectaculares de los cambios de concentracin del calcio citoplsmico libre que ocurre en respuesta a diferentes tipos de estmulo. Dependiendo del tipo de clula, un estmulo particular puede inducir oscilaciones en la concentracin de iones libres de calcio, segn se muestra en la figura 15-15, producir una onda de liberacin de Ca2+ que se puede propagar desde un extremo de la clula al otro, o desencadenar liberacin transitoria localizada de Ca2+ en una parte de la clula. La figura 15-16 muestra el espectacular incremento transitorio de la concentracin de iones calcio en ciertas partes de una clula fagocitaria sangunea cuando se pone en contacto con un objeto en su ambiente y se mueve para engullirlo. El incremento de [Ca2+] en el fagocito tal vez refleje su papel en la regulacin de los cambios en la actividad del citoesqueleto necesarios para la fagocitosis. Aunque el ion calcio es muy diferente en estructura a un nucletido cclico o un fosfato de inositol y no es una sustancia sintetizada enzimticamente, comparte una propiedad importante con estos otros mensajeros citoplsmi-
642
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente 0.4 nM de vasopresina (a)
600
400
(C)
200
10
20
30
Tiempo (minutos) FIGURA 15-15. Demostracin experimental de cambios en la concentracin de calcio libre en respuesta a la estimulacin hormonal. A una clula heptica se le inyect aecuorina, protena extrada de ciertas medusas que muestran luminiscencia cuando se enlazan a iones calcio. La intensidad de la luminiscencia es proporcional a la concentracin de iones calcio libres. La exposicin de la clula a vasopresina provoca varias ondas de calcio libre a intervalos peridicos. Esta respuesta se obtuvo en una clula expuesta a 0.4 nM de vasopresina, que se encuentra en el extremo inferior del lmite fisiolgico. Esta clula previamente se haba expuesto a 0.2 nM de vasopresina y no hubo respuesta. (Segn NM. Woods, K.S. Cuthbertson y P.H. Cobboid. Reimpreso con permiso de Nature, val 366, p. 628, 1986. Copyright 1986, Macmilan Magazines Limited.)
(e)
5jin FIGURA 15-16. Demostracin experimental de los cambios transitorios en la concentracin de calcio intracelular en un macrfago durante la fagocitosis de una sola esterilla recubierta de IgG. Los macrfagos fueron cargados previamente con un colorante fluorescente sensible a calcio y luego incubados con las esfrulas recubiertas de IgG. a) Se muestra un macrfago en una imagen de campo brillante luego de enlazarse a una sola esfrula, y b) la correspondiente imagen con fluorescencia revela la [Ca2+] en diferentes regiones de la clula. Luego de 66.6 segundos, la esfrula enlazada permanece en el mismo sitio y el mismo foco (c), pero la [Ca2+] se eleva hasta un valor mximo (d); la [Ca2+] retorna posteriormente a un nivel cercano a la basal (/) y las esfrulas se mueven al interior de las clulas. La flecha indica el sitio de la esfrula. (Segn Takashi Hishikawa y cois. ]. Cell Biol. 115:62, 1991; con permiso de Rockefeller University Press.)
eos; a saber, su concentracin en el citoplasma es determinada por acontecimientos que ocurren dentro de una membrana. En circunstancias normales, la concentracin de Ca2+~ se mantiene a niveles muy bajos dentro del citoplasma, tpicamente alrededor de 10~7 M. En contraste, la concentracin de este ion en el espacio extracelular o entre ciertos organelos citoplsmicos, como el REL o las mitocondrias, puede ser
CUADRO 15-5. Resumen de respuestas celulares producidas por adicin de IPs a clulas permeabilizadas o ntegras Tipo de clula Msculo liso vascular Msculo liso del estmago Msculo esqueltico Moho del fango Plaquetas sanguneas Bastoncillos de salamandra Gocitos de Xenopus Huevos de erizo de mar Glndula lagrimal Respuesta Contraccin Contraccin Contraccin Formacin de GMP cclico, polimerizacin de actina Cambio de forma, agregacin Modulacin de la respuesta a la luz Movilizacin de calcio, despolarizacin de la membrana Despolarizacin de la membrana, reaccin cortical Incremento de la corriente de potasio
Adaptado de MJ. Berridge, reproducido con permiso de Annua! Rcview of Biochemistry, vol. 56, 1987 por Annual Reviews Inc.
ms de 10 000 veces mayor. La concentracin citoplsmica de calcio se mantiene muy baja debido a la relativa impermeabilidad de las membranas a este ion y gracias a la presencia en la membrana plasmtica y las membranas celulares de un sistema de transporte que bombea calcio hacia afuera del citoplasma. Muchos estmulos diferentes, que van desde un espermatozoide fertilizante hasta un impulso nervioso que llega a la clula muscular, inducen su respuesta en una clula especfica, lo que provoca un incremento sbito de la concentracin de Ca2+ er el citoplasma. En el cuadro 15-6 se muestran algunos objetivos especficos del [Ca2+] elevado. Algunas de las respuestas inducidas por calcio son mediadas por el segundo mensajero IPs, pero se conocen diversos factores que abren transitoriamente los canales de calcio en el REL o en la membrana plasmtica.
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente CUADRO 15-6. Ejemplos de protenas de mamfero desencadenadas por Ca2+
Protena Funcin de a protena
643
Troponina C Calmodulina Calretinina, retinina, vicinina Calcineurina B Calpain PLC especfica de inositol fosfolpido cr-Actinina Anexina Fosfolipasa A2 Proteincinasa C Gelsolina Receptor I?3 Receptor de rianodina Intercambiador de Na+Ca 2+ Ca2+ ATPasa Antiportadores de Ca2+ Caldesmon Vilina Arrestina Calsecuestrina
Modulador de la contraccin muscular Modulador ubicuo de proteincinasas y otras enzimas (MLCK, CaM cinasa I!, adenilciclasa I) Activador de guanililciclasa Fosfatasa Proteasa Generador de IPs y diacilglicerol Protena formadora de haces de actina Implicada en endocitosis y exocitosis, inhibicin de PLA^ canal inico? Productor de cido araquidnico Proteincinasa ubicua Protena seccionadora de actina Efector de liberacin de Ca2+ intracelular Efector de liberacin de Ca2+ intracelular Efector del intercambio de Ca2+ para Na2+ a travs de la membrana plasmtica Bombeo de Ca2+ a travs de las membranas Intercambiador de Ca2+ para iones monovalentes Regulador de la contraccin muscular Organizador de actina Finalizador de la respuesta fotorreceptora Amortiguador Ca2+
Adaptado de D.E. Clapham, CeU. 80:260, 1995, con permiso de Cell Press.
Los receptores lP- pertenecen a uno de dos tipos principales de canales intracelulares para Ca2+; a los otros se les denomina receptores de rianodina porque son sensibles al alcaloide vegetal rianodina. Los receptores de rianodina se observan principalmente en clulas excitables y son mejor estudiados en clulas de msculo esqueltico, donde se encargan de la liberacin de Ca2+ del retculo sarcoplsmico luego de la llegada de un potencial de accin a lo largo del tbulo T (pg. 365). Segn el tipo de clula, una variedad de agentes puede abrir los receptores de rianodina, pero al parecer no por IPs- Entre los agentes que pueden abrir los canales de Ca2+ de rianodina se encuentra el propio calcio. El flujo hacia adentro de una cantidad limitada de calcio a travs de los canales en la membrana plasmtica induce la abertura de los receptores de rianodina en el REL, lo que provoca la liberacin de Ca2+ hacia el citoplasma (fig. 15-17). Este fenmeno, denominado liberacin de calcio inducida por calcio, puede generar con rapidez una onda transitoria de iones calcio que se propaga a travs del citoplasma.
FIGURA 15-17. Liberacin de calcio inducida por calcio, la cual ocurre en clulas excitables como las del msculo cardiaco. Un cambio del voltaje de la membrana provoca la abertura de los canales de calcio gobernados por voltaje en la membrana plasmtica, lo que permite la entrada de una pequea cantidad de Ca2+ (paso 1). Los iones calcio se enlazan al receptor de rianodina en la membrana de! REL (paso 2), provocando la liberacin del calcio almacenado (paso 3). A continuacin los iones calcio se liberan del citoplasma por accin de una bomba de Ca2+ localizada en la membrana del REL (paso 4). (Segn MJ. Berridge, reimpreso con permiso de Nature, vol. 361, p. 317, 1993. Copyright 1993, Macmillan Magazines Limited.)
Canal Ca+ controlado por voltaje
Receptor de rianodina o o
Bomba de Ca2+
644
La elevacin de la concentracin del ion calcio es transitoria porque los iones rpidamente son bombeados hacia afuera del citoplasma y regresan al REL o al exterior de la clula en el espacio extracelular. Una de las ondas ms espectaculares de Ca2+ ocurre antes del primer minuto, aproximadamente, despus de la fertilizacin y es indicada por el contacto del espermatozoide con la membrana plasmtica del vulo (fig. 15-18). La sbita elevacin de la concentracin de calcio en el citoplasma es un importante factor desencadenante para iniciar procesos del desarrollo embrionario temprano, incluyendo activacin de cinasas dependiente de ciclinas (pg. 583) que impulsan al huevo fertilizado hacia su primera divisin mittica. Se cree que esta onda de calcio se inicia por la sntesis en la superficie interna de la membrana celular de un segundo mensajero denominado ADPRc (ribosa de difosfato de adenosina cclica, figura 15-19, a). Las molculas ADPRc se difunden al citoplasma donde provocan la abertura de los canales de Ca2+ receptores de rianodina en la membrana del retculo endoplsmico Uso. La inyeccin de cantidades muy pequeas de ADPRc a un huevo no fertilizado de erizo de mar puede desencadenar la liberacin de Ca2+ de los almacenes de la membrana (fig. 15-19, b) con activacin completa del vulo. Se ha considerado al ADPRc como un segundo mensajero que abre los canales de Ca2+ de rianodina en una gran variedad de clulas, incluyendo clulas beta pancreticas, donde produce secrecin de la hormona insulina en respuesta a la elevacin de la concentracin de glucosa en sangre. A diferencia de los nucletidos cclicos, cuya accin invariablemente es mediada por estimulacin de una pro-
teincinasa, el calcio puede afectar a diversos tipos de efectores celulares, entre ellos a proteincinasas dependientes de calcio. Segn la clula, la concentracin elevada de calcio puede producir activacin o inhibicin de varias enzimas y sistemas de transporte, cambios en la permeabilidad inica de membranas, fusin de membranas y alteraciones en la funcin contrctil del citoesqueleto. En estado inico libre, el calcio de ordinario no acta sobre estos diferentes efectores, sino que se enlaza a un pequeo nmero de protenas que se enlazan a calcio, que a su vez despiertan la respuesta celular. Slo una de estas protenas que se enlazan a calcio est extensamente distribuida; es la calmodulina, un pequeo polipptido descubierto en tejido cerebral a finales de los aos 1960. Cada molcula de calmodulina (fig. 15-20, a) contiene cuatro sitios de enlace para calcio; el enlace de uno o ms iones Ca2+ modifica la conformacin de la protena incrementando su afinidad por muchas otras protenas. Segn la clula, el complejo calcio-calmodulina puede unirse a una proteincinasa, una nucletido fosfodiesterasa cclica, o incluso al sistema de transporte de calcio de la membrana plasmtica. En este ltimo caso, la concentracin elevada de calcio activa al sistema encargado de desembarazar a la clula de cantidades excesivas de este ion, constituyendo as un mecanismo autorregulador para conservar baja la concentracin de calcio intracelular. La calmodulina se encuentra en todas las plantas, animales y microorganismos eucarotas, y prcticamente tiene la misma secuencia de aminocidos en toda la gama de eucariotes. En la figura 15-20, b, se muestra la distribucin de calmodulina en el ojo compuesto de la mosca de la fruta.
FIGURA 15-18. Onda de calcio en el vulo de una estrella de mar inducida por un espermatozoide fertilizante. Se inyect un colorante fluorescente sensible a calcio en el vulo no fertilizado y en el vulo fertilizado, y se tomaron fotografas cada cinco segundos con un microscopio confocal. La liberacin de Caz+ se propaga desde el punto de entrada del espermatozoide (flecha) a travs de todo el vulo. El color azul indica concentracin baja [Ca2+] libre, en tanto que el color rojo indica concentracin elevada de calcio. (Cortesa de Stephen A. Stricker.)
15 nm
645
ADP-ribosil cJclasa
HO NAD
OH
w
HO
OH
(a)
ADP-rbosa cclica
(b)
FIGURA 15-19. La ADP-ribosa cclica tal vez sea un segundo mensajero para despertar la respuesta de fertilizacin, a) Formacin de ADPRc a partir de NAD + . b) Este huevo de erizo de mar fue cargado previamente con colorante sensible a calcio y luego se le aplic una microinyeccin de una solucin de ADPRc. El cambio de color dentro del huevo refleja elevacin de la concentracin de calcio intracelular desde 100 nM (azul y verde) hasta 900 nM (rojo y amarillo) luego de la inyeccin, (b: Reimpreso con permiso de Antony Galione, Science 259:325, 1993; copyright 1993 American Association for the Aduancement of Science.)
Regulacin de la concentracin de calcio en clulas vegetales Se cree que los iones calcio (que actan junto con la calmodulina) son segundos mensajeros importantes para desen-
C terminal
cadenar respuestas en clulas vegetales. La concentracin de calcio citoplsmico cambia de manera espectacular en ciertas clulas vegetales en respuesta a varios estmulos, incluyendo cambios de la iluminacin, presin, gravedad y la concentracin de hormonas de la planta, como el cido abscsico. La concentracin de Ca2+ en el citoplasma es regulada por la permeabilidad de los canales de Ca2+ localizados en la membrana plasmtica y tambin por la disponibilidad del Ca2+ almacenado en la vacuola. Se cree que la membrana (tonoplasto) que rodea la vacuola posee canales de Ca2+ que, igual que en las clulas animales, son abiertos por molculas de trifosfato de inositol (IPs) producidas por una fosfolipasa C enlazada a la membrana plasmtica. El papel de la concentracin cambiante de Ca2+ citoplsmico se puede observar ms claramente en las clulas de defensa, cuya funcin es regular el dimetro de los poros microscpicos (estomas) a travs de los cuales el C2 atmosfrico alcanza las clulas de las hojas que contienen cloroplastos (fig. 15-21, a). Como se analiza en la pgina 228, los estomas son la va principal para perder agua, y se debe controjar su dimetro de abertura para evitar la desecacin.
.* f
- ' -/^
- --
-1*
FIGURA 15-2D Calmodulina. a) Diagrama de la calmodulina en forma de listn con cuatro iones calcio enlazados, b) El ojo compuesto de Drosophila consta de cientos de fotounidades individuales llamadas ommatidia. Cada ommatidia contiene ocho clulas fotorreceptoras. Seis de las ocho clulas fotorreceptoras se extienden a toda la profundidad de la ommatidia, en tanto que las otras dos ocupan las porciones superior o inferior de una ommatidia; por consiguiente, slo siete clulas fotorreceptoras estn presentes en cualquier seccin transversal determinada (izquierda). La distribucin espacial de la protena calmodulina enlazada a calcio es revelada por inmunofluorescencia (derecha) y se observa que ocupa una parte de cada uno de los fotorreceptores. (b: Reimpreso con permiso de feffrey A. Portcr y cois., cortesa de Craig Montell, Science 262:1039, 1993; copyright 1993 American Association for the Advancement of Science.)
646
CAPITULO 15 Seaks celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente
Clula guardin A
HjO
H?0
Cierre del poro del estoma

HjO
H,0
Membrana plasmtica
ABA
\l de flujo
Canal de flujo hacia adentro de K+ (cerrado)
hacia afuera de K+ (abierto)
Tonoplasto
Vacuola FIGURA 15-21. Papel del calcio como segundo mensajero en el cierre de las clulas guardianes, a) Fotografa de los poros estomquicos, cada uno flanqueado por un par de clulas guardin. Los estomas se conservan abiertos en tanto la presin por turgencia se mantenga elevada entre las clulas guardianes, provocando que sobresalgan hacia afuera, como se observa aqu, b) Uno de los factores que controla el tamao del poro de los estomas es la hormona cido abscsico (ABA). Cuando la concentracin de ABA se eleva, los canales de ion calcio en la membrana plasmtica se abren, permitiendo el ingreso de Ca2+ (paso 1), que desencadena la liberacin de Ca2+ de los almacenes internos (paso 2). La subsecuente elevacin de [Ca2+] intracelular provoca el cierre de los canales de flujo hacia adentro de K+ (paso 3a) y la abertura de Jos canales de flujo hacia afuera de K + (paso 3b), lo que conduce a un descenso de la concentracin interna del soluto y la prdida de agua por osmosis (paso 4). (a: Jeremy Burgess/Photo Researchers.)
Condiciones adversas, como temperaturas altas y escasa humedad, estimulan la liberacin de cido abscsico, que acta sobre las clulas protectoras para incrementar la permeabilidad de los canales de calcio en la membrana plasmtica (fig. 15-21, b). El flujo hacia adentro de Ca2+ desencadena la liberacin de Ca2+ adicional procedente de los almacenes intracelulares que actan para cerrar los canales de ingreso de K+ en la membrana plasmtica, en tanto que abre los canales de salida de K + . Estos cambios inducen flujo neto hacia afuera de iones potasio y disminucin de la presin de lquido (turgencia) dentro de la clula, lo que a su vez disminuye la abertura de los estomas.
15-3 Receptor de tirosincinasas (RTK): un segundo tipo principal de sistemas de seales

Iniciamos el anlisis de la transduccin de seales con el mecanismo de accin de glucagon y epinefrina, dos hormonas que actan para poner la glucosa a disponibilidad de los tejidos. La hormona insulina acta sobre clulas hepticas y musculares para iniciar una serie de reacciones opuestas en
las cuales la glucosa se elimina del torrente sanguneo y se polimeriza para formar glucgeno. Adems de sus efectos sobre la captacin y metabolismo de la glucosa, la insulina tambin es un potente estimulante de la sntesis de lpidos (en las clulas adiposas), sntesis de protenas, as como del crecimiento y proliferacin de las clulas. El mecanismo mediante el cual la insulina estimula estas diferentes respuestas ha eludido los esfuerzos de los investigadores durante muchos aos. Pero en el ltimo decenio se hicieron grandes avances para aclarar el mecanismo mediante el cual interacta la insulina con la superficie externa de clulas especficas e indica su presencia a varios efectores dentro de la clula. La insulina acta por medio de una va de seales diferente en muchos aspectos de la empleada por glucagon y epinefrina.
Mecanismo de accin de la insulina! seales por un RTK

Las clulas capaces de responder a la insulina poseen un receptor para insulina en su superficie, El receptor para insulina es algo ms que una simple protena que se enlaza a un ligando; tambin es una enzima: una proteincinasa de
647
tirosina, enzima que aade el grupo fosfato a residuos de tirosina especficos de otras protenas. La tirosincinasa forma parte de una superfamilia distinta de la cinasas de serina y treonina que operan en la reaccin en cascada analizada anteriormente en relacin con la movilizacin de glucosa (fig. 15-6), aunque un pequeo nmero de tirosincinasas poseen una doble especificidad y tambin son capaces de fosforilar residuos de serina y treonina (un ejemplo es la PAMKK de la figura 15-27). Las tirosincinasas participan principalmente en el control del crecimiento y la diferenciacin celular, ms bien que en el control del metabolismo intermediario. Puesto que el receptor para insulina tiene esta actividad enzimtica, se le conoce como receptor de tirosincinasa (o RTK). Se han identificado ms de 50 diferentes RTK y su nmero aumenta con rapidez. A diferencia de los receptores acoplados a protena G, que tienen siete segmentos transmembrana, cada monmero de RTK atraviesa la membrana una sola vez. El receptor de insulina es una protena tetramrica compuesta de dos cadenas de polipptido a y dos cadenas de polipptido/?. Las cadenas a residen en la superficie extracelular de la membrana y contienen los sitios para enlazar insulina, en tanto que las cadenas/ atraviesan la membrana y transmiten la seal a travs de la misma hasta su superficie interna (fig. 15-22). En ausencia de insulina enlazada, la funcin de la tirosincinasa del receptor es inactiva. El enlace de insulina cambia la conformacin del receptor activando su tirosincinasa, la cual entonces aade fosfatos a: 1) residuos especficos de tirosina de la otra subunidad /? del complejo, reaccin llamada autofosforilacin, y 2) una docena o ms de residuos de tirosina localizados estratgicamente en cuando menos dos sustratos de protena llamados sustratos receptores de insulina (SRI) (fig. 15-22). Al parecer, los SRI fosforados slo tienen una funcin, que es la de enlazar y activar a varios efectores "subsecuentes". Para comprender cmo ocurre esto se necesita un parntesis en este momento. El receptor de tirosincinasa no fosforita toda la tirosina en una protena del sustrato; slo fosforila a las que estn presentes en cierta secuencia de aminocidos conocidas como " motivos de f osf otirosina". Estudios recientes han revelado que varias protenas implicadas en las seales celulares contienen dominios, llamados dominios SH2, con sitios de elevada afinidad para enlazarse a "motivos de fosfotirosna" (fig. 15-23).3 Los dominios SH2 presentan afinidad escasa o ausente para protenas cuyos residuos de tirosina no estn fosforilados. Slo despus que una SRI ha sido fosforilada por el receptor de insulina puede actuar como "imn" para enlazar protenas que posean dominios SH2 con estructura apropiada. El enlace a un motivo de fosfotirosina puede tener efectos diferentes, dependiendo de la protena particular que contenga el SH2. La interaccin puede poner en marcha una actividad enzimtica de la protena, cambiar la conformacin de la misma provocando su enlace a otras protenas, o causar la translocacin de la protena a una parte diferente de la clula.
Sitio de enjace
para insulina
FIGURA 15-22. Respuesta del receptor de insulina para enlace de un ligando. El receptor de insulina es un tetrmero que consta de dos subunidades a y dos 5, Cuando la insulina se enlaza a la subunidad a se produce un cambio de conformacin en las subunidades j$, que activa la accin de tirosincinasa de las subunidades /J, lo que a su vez cataliza la transferencia de grupos fosfato hacia residuos de tirosina localizados en el dominio citopismico del receptor y tambin a varios sustratos del receptor de insulina (SRI),
3 Dominio SH2 es un acrnimo de dominio Src de homologa, lo que denota que este dominio que se enlaza a fosfotirosina fue identificado por primera vez en la protena codificada por el oncogen src.
Aunque operan por mecanismos diferentes, hay gran paralelismo entre la protena G y las vas de sealamiento del receptor de tirosincinasa. En las vas de la protena G, los cambios de conformacin de una protena G constituyen el interruptor molecular que transmite la seal al interior de la clula, en tanto que en la va del RTK, la fosforilacin de la tirosina ejecuta una funcin similar. Las protenas con dominios SH2 se pueden considerar los efectores de RTK, as como la adenciclasa o la fosf olipasa C son efectores para los receptores acoplados a protena G. Puesto que diferentes clulas pueden contener distintos efectores con dominios SH2 similares, el mismo ligando puede desencadenar respuestas muy diferentes en diversas clulas especficas. Retornemos a la respuesta de insulina. Una vez activado el receptor de insulina, las protenas SRI fosforiladas sirven como "atracaderos" para numerosas protenas con dominios SH2, cada una de las cuales puede activar una va separada para transmisin de seales (fig. 15-24). Como resultado, el mensaje de que se ha enlazado insulina a la
648
Seal
Seal
Fosfato FIGURA 15-23. Interaccin entre un dominio SH2 de una protena y un pptido que contiene un residuo de f osf otirosina. Se muestra el dominio SH2 de un corte con la superficie accesible representada por puntos rojos y el esqueleto del polipptido como un listn de color prpura. El heptapptido que contiene fosfotirosina (Pro-Asn-pTirGlu-GIu-Ile-Pro) se muestra como un modelo de espacio lleno cuyas cadenas laterales se presentan en color verde y ?1 esqueleto en color amarillo. El grupo fosfato se muestra en color blanco. El residuo de tirosina fosforilado y el residuo de isoleucina (+3) se proyectan dentro de bolsas sobre la superficie del dominio SH2, creando una interaccin firmemente adaptada, pero slo cuando el residuo de tirosina clave est fosforilado. (Segn Gabriel Wakstnan y cois., cortesa de John Kuriyan, Cell 72:783, 1993; con permiso de Cell Press.)
PK41-P, PI(4,5)-P2
PI(3,4)-P2, PI(3,4,5>-P3
Seal Seal
Seal
superficie de la clula puede propagarse hasta el interior celular a lo largo de varias vas independientes. As, una va puede estimular la sntesis de DNA y la divisin celular, otra el movimiento de transportadores de glucosa hacia la membrana celular donde pueden introducir molculas adicionales de glucosa (pg. 147), otra puede activar factores de transcripcin encargados de expresar un conjunto de genes especficos de insulina, y aun otra va ms puede conducir a la activacin de la sntesis de protenas (pg. 651). Uno de los efectores mejor estudiados con un dominio SH2 que se sabe se enlaza a SRI fosforilado es la enzima fosfatidilinositol 3-hidroxicinasa [o PI(3) K]. La PI(3)K cataliza una reaccin en la cual se aade un grupo fosfato a la posicin 3' del anillo de azcar del fosfatidilinositol (PI). Los productos de la enzima, que incluyen 3,4-dfosfato PI y 3,4,5-trifosfato PI (fig. 15-24), sirven como precursores para algunos mensajeros celulares que contienen inositol con diversas funciones en las clulas. De mayor importancia es que la concentracin de estos PI fosforilados se relaciona estrechamente con los cambios en el estado de crecimiento de las clulas especficas, y se ha demostrado que son parte de la va mediante la cual la insulina puede estimular el crecimiento y la proliferacin celulares. En la siguiente seccin hablaremos an ms de las vas para estimular el crecimiento.
FIGURA 15-2J. Papel de los SRI fosforilados de tirosina para activar varias vas de emisin de seales. Se sabe que la fosforilacin de SRI por el receptor activado de insulina activa las vas PI(3)K, proteincinasa C y Ras, todas analizadas en el captulo. Otras vas menos bien definidas tambin son activadas por sustratos receptores de insulina.
Papel del RTK en otras actividades celulares Una gran variedad de agentes extracelulares interactan como con los RTK sobre la superficie de clulas especficas y regulan diversas funciones, incluyendo crecimiento y proliferacin celulares, curso de la diferenciacin celular, captacin de partculas extraas por fagocitosis, y supervivencia de la clula. Entre estos agentes, los mejor estudiados son hormonas como la insulina y la hormona del crecimiento; factores de crecimiento de origen sanguneo, como el factor de crecimiento epidrmico (FCE), el factor de crecimiento derivado de plaquetas (FCDP) y el factor de crecimiento de fibroblastos (FCF); y las atocinas, que son agentes secretados por un tipo de clula inmunolgica que induce una respuesta en otro tipo de clula inmunolgica, incluyendo, por ejemplo, interferones (INF) e interleucinas (IL). Todos estos agentes actan por vas para transduccin de seales que se inician con la activacin de un receptor de tirosincinasa.
649
A diferencia del receptor de insulina descrito antes, la mayor parte de los RTK se presentan como monmeros en una clula no estimulada. Slo despus que un ligando se une al RTK, los monmeros interactan entre s para formar dmeros (fig. 15-25). La dimerizacin de los polipptidos RTK activa su funcin de tirosincinasa y entonces una subunidad del dmero fosforila algunos residuos de tirosina situados en el dominio citoplsmico de la otra subunidad del dmero. La fosforilacin de grupos RTK pone en movimiento una cadena de reacciones que recuerda la reac-
cin en cascada descrita en relacin con la respuesta de una clula heptica al enlace de glucagon o de epinefrina. Un elemento clave de muchas reacciones RTK en cascada es la protena Ras. Importancia de la protena Ras La protena Ras se descubri originalmente como un oncogen viral, o sea, un gen presente en ciertos virus tumorales que es capaz de malignizar clulas normales. Investigaciones subsecuentes demostraron que, igual que otros oncogenes, ras siempre est presente como parte del genoma normal de animales y del hombre. A principios del decenio de 1980 se observ que el DNA extrado de varios tumores humanos contena una versin mutante de ras. Cuando se introdujo en ciertas clulas cultivadas, se not que esta versin mutada del gen ras transforma las clulas en clulas tumorales malignas, lo que sugiere que las alteraciones en este gen causan en la clula la prdida de control del crecimiento normal. Estudios subsecuentes han demostrado que una versin alterada del gen ras se encuentra en 30 a 40% de todos los tumores humanos. Dada la importancia de este gen en el desarrollo del cncer humano, gran nmero de investigadores han enfocado su atencin a dilucidar el mecanismo de operacin del producto del gen ras, y slo en los ltimos aos se ha logrado este objetivo. Ras es una pequea protena G monmera que reside en la superficie interna de la membrana plasmtica, donde desempea un papel clave en varias vas internas para transmisin de seales. Igual que otras protenas G, Ras muestra ciclos entre una forma inactiva enlazada a GDP y una forma activa enlazada a GTP. En su forma activa Ras estimula efectores situados hacia adelante en la va de transmisin de seales. Como otras protenas G, Ras tiene actividad GTPasa intrnseca que hidroliza la GTP enlazada para formar GDP enlazada, actuado as como interruptor que desactiva la protena.4 Las mutaciones en el gen ras que conducen a la formacin del tumor generalmente son aquellas que evitan que la protena hidrolice la GTP enlazada para retornar a la forma GDP. Como resultado, la versin mutante de Ras permanece en la posicin "activada", enviando un mensaje continuo hacia adelante a lo largo de la va de transmisin de seales que mantienen a la clula en la modalidad proliferativa. Se han descubierto otras versiones, mutantes de Ras que previenen el enlace de GTP y por lo tanto impiden la divisin celular. Se cree que Ras participa en varias vas diferentes para transmisin de seales, actuando quiz como uno de los puntos focales a partir del cual irradian varias vas (fig. 15-31). En su papel mejor estudiado, Ras es un elemento clave dentro de una va que se extiende a travs de la clula desde la superficie externa de la membrana plasmtica hasta el material gentico que reside en el ncleo. Los hecho?, se
-Ligandt
Monmeros inactivos
Dmeros activos
Trans autofosforilacin
.o
Seal de transmisin
Domini SH2
ommio SH2
FIGURA 15-2.i Pasos en la activacin generalizada de un receptor de tirosincinasa (RTK). En el estado no activado los receptores estn presentes en la membrana como monmeros. El enlace del ligando conduce a la dimerizacin del receptor y activacin de su actividad cinasa, aadiendo grupos fosfato al dominio citoplsmico del receptor. Los residuos de fosfotirosina recin formados del receptor sirven como sitios de enlace para protenas especficas que contienen dominios SH2, activados como consecuencia de su interaccin con el receptor. (Segn J. Schlessinger y A. Ulrich, Neuron 9:384, 1992, con permiso de Cell Press.)
4 La actividad GTPasa intrnseca de Ras es relativamente dbil comparada con la de la subunidad a de las protenas G heterotrimricas analizadas anteriormente. En la clula, la actividad GTPasa de Ras es estimulada por algunas protenas activadoras de GTPasa (PAG), que desempean un papel importante para concluir la respuesta.
650
inician con el enlace de varios factores de crecimiento, como FCE o FCDP, al dominio extracelular de su respectivo receptor (corno en la figura 15-25). La. cascada de proteincinasa activada por mitogao En las figuras 15-26 y 15-27 se muestra la secuencia de sucesos que ocurren en la va Ras para transmitir seales luego del enlace del factor de crecimiento al receptor de tirosincinasa,
Receptores inactivos
Ras inactivo
Activacin n del receptor W
En breve, las fosfotirosinas generadas en el dominio citoplsmico del RTK por autofosforilacin actan como sitios de enlace para una protena SH2 especfica llamada Grb2, que se enlaza a la superficie interna de la membrana junto con otra protena denominada Sos (fig. 15-26, a).5 En este punto es donde Ras entra en la descripcin. En la clula no estimulada, Ras permanece enlazada a GDP. Cuando un ligando se enlaza a RTK y recluta a Grb2-Sos en la superficie interna de la membrana, la protena Sos se enlaza a Ras, causando la prdida de su GDP, que es reemplazada por GTP, activando de esta manera a Ras (fig. 15-26, i?). La funcin primaria, y quiz la nica, de Ras-GTP es reclutar otra protena, llamada Raf, en la membrana plasmtica (fig. 15-26, c). Una vez localizada en la membrana plasmtica, Raf se convierte en una proteincinasa activa que inicia una cadena ordenada de reacciones de fosforilacin denominada cascada de proteincinasa activada por mitgeno (cPAM),6 detallada en la figura 15-27. La cascada cPAM es similar a la de reacciones desencadenadas por AMPc durante la movilizacin de la glucosa (g. 15-6), pero incluso ms complicada (fig. 15-28).7 La ltima proteincinasa en la cascada (cPAM) entra al ncleo y fosforila factores de transcripcin especficos. Estos factores de transcripcin se enlazan a sitios sobre el DNA que contiene secuencias de nucletidos conocidas como elementos sricos de respuesta (ESR), porque son activados por seales provenientes de factores de crecimiento presentes en el suero. Varios de los genes expresados codifican protenas que se cree que participan en la activacin del ciclo celular, que finalmente conduce a! inicio de la sntesis de DNA y despus a la divisin celular. Al parecer, el ncleo no es el nico objetivo de la cascada de proteincinasas activadas por mitgeno. Estudios recientes indican que otro objetivo es una protena citoplsmica denominada PHAS-I (fig. 15-29). En estado no fosforilado, PHAS-I al parecer se enlaza a uno de los factores clave de inicio (eFI4E) requerido en clulas eucariotas para permitir que el ribosoma se fije al RNAm e inicie la traduccin (pg. 472). En tanto PHAS-I permanezca enlazado al factor de inicio, dicho factor no puede realizar su papel en la sntesis de protenas. En estado activado, cPAM aade un fosfato a PHAS-I, cambiando su conformacin para desprenderlo de eF4E, que a su vez permite al factor de inicio rea-
FIGURA 15-26. Etapas en la activacin de Ras por RTK. Algunos receptores diferentes, incluyendo los que se enlazan al factor de crecimiento epidrmico (FCE) y el factor de crecimiento derivado de plaquetas (FCDP), actan como se indica en esta figura, a) En el estado inactivo, los receptores se presentan como monmeros y Ras se combina con GDP, y por lo tanto es inactivo. V) El enlace de un ligando desencadena la dimerizacin del receptor, lo que conduce a la~ autofosforilacin de los dominios citoplsmicos del dmero receptor. Los residuos de fosfotirosina recin formados actan como sitios para el enlace de Grb2-Sos, que inducen la sustitucin de GTP por GDP sobre Ras. c) El Gtp-Ras activado acta como sitio de enlace para Raf, localizando as a esta protena en la membrana plasmtica donde desencadena la cascada cPAM detallada en la siguiente figura.
5 Grb2 es un acrnimo en ingls para receptor de factor de crecimiento que se enlaza a proteina, y Sos corresponde a son of sevenless, donde sevenless es un gen identificado en Drosophila que participa en la diferenciacin de fotorreceptores. 6 cPAM (en ingls MAP kinase) es un acrnimo para proteincinasa activada por mitgeno, porque es una cinasa activada por factores de crecimiento que estimulan la mitosis {o sea, mitgenos). No debe confundirse con las cinasas que fosforilan protenas relacionadas con microtbulos, que se denominan PRM y que en ingls tambin aparecen como MAP. 7 En realidad, el cuadro es mucho ms complejo de lo que se indica. Las clulas pueden tener varias vas cPAM distintas que constan de variantes en los diferentes elementos que constituyen la cascada. Por ejemplo, las clulas de levadura tienen cuando menos tres distintas vas cPAM que controlan la construccin de la pared celular, la respuesta al estrs osmtico y la respuesta a feromonas de apareamiento.
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente Factor de crecimiento
651
PAMKKK (Ra) 0
FIGURA 15-27. Etapas de la cascada cPAM. El enlace del factor de crecimiento a su receptor (1) conduce a la autofosforilacin de los residuos de tirosina del receptor (2) y el subsecuente reclutamiento de las protenas Grb2-Sos (3). Este complejo activado provoca el intercambio GTP-GDP de Ras (4), que recluta a la protena Raf en la membrana activando su funcin serina-proteincinasa (5). Raf tambin se conoce como PAMKKK (PAM cinasa cinasa cinasa) porque fosforila a PAMKK (PAM cinasa cinasa, tambin conocida como MEK), activando por lo tanto su funcin cinasa (6). PAMKK es una cinasa de doble especificidad, trmino que significa que es capaz de fosforilar residuos de tirosina y tambin residuos de serina y treonina. Como su nombre implica, PAMKK fosforila a PAMK (cPAM) activando su funcin cinasa de serina y treonina (7). Se cree que cPAM activado fosforila cuando menos dos tipos de sustrato de protena: factores de transcripcin (FT, paso 8) y otra cinasa llamada Rsk (o p90rsk) (paso 8a), que a continuacin fosforila a un factor de transcripcin (8b). La fosforilacin de los factores de transcripcin incrementa su afinidad por sitios reguladores sobre el DNA, provocando un incremento de los genes especficos de transcripcin que participan en !a respuesta de crecimiento (paso 9). Uno de los genes cuya expresin se estimula codifica una cPAM fosfatasa (MKP-1) (paso 10). Se cree que esta jnzima elimina grupos fosfato de cPAM (11), y por lo tanto inactiva la :uncin cinasa de cPAM y detiene una mayor actividad de emisin de seales a lo largo de la va. (Segn H. Sun y N.K. Tonks, Trends Biochem. 3ci. 19:484, 1994.)
Transcripcin
MKP-1
lizar su papel en la traduccin. A partir de estos datos parecera que la cascada cPAM desempea un papel clave en la regulacin de la transcripcin y la traduccin en la clula especfica. Generalidad de la cascada cPAM. En todos los eucariotes investigados, desde levaduras hasta moscas y de nematodos a mamferos, se observa la misma va bsica desde RTK a travs de Ras para la activacin de los factores de transcripcin. La evolucin adapt la va para satisfacer muchos fines diferentes. Por ejemplo, en las levaduras, la cascada cPAM es necesaria para conservar la forma de la clula y responder a feromonas de apareamiento, en tanto que en la mosca de la fruta la va se utiliza durante la diferenciacin de los receptores en el ojo compuesto. Como se analiza en el siguiente captulo, los oncogenes pueden identificarse gracias a su capacidad para convertir a las clulas en clulas cancerosas cuando el gen sufre mu-
tacin o activacin anormal. Cuando se descubrieron los oncogenes se pronostic que codifican protenas cuyas contrapartes normales participan en el control del crecimiento celular. Esta prediccin se ha confirmado repetidas veces. Por ejemplo, muchos de los elementos de la va Ras para transmisin de seales son protenas codificadas por genes descubiertos por primera vez como oncogenes causantes de cncer. Esto incluye Ras, Raf y algunos factores de transcripcin activados al final de la va (p. ej., c-fos). Los genes de varios RTK situados al principio de la va, incluyendo receptores para FCE y FCDP, tambin se identifican entre las diferentes docenas de genes conocidos como oncogenes. De todos los oncogenes, Ras parece desempear el papel ms importante en el desarrollo del cncer humano. El hecho de que tantas protenas de esta va sean codificadas por genes que pueden provocar cncer cuando sufren mutacin subraya la importancia de la va en el control del crecimiento y proliferacin celulares. Se espera que los conocimientos recientes en el papel de Ras en las actividades normales de la clula conduzcan a una mejor comprensin de los mecanismos encargados de la prdida de control del crecimiento en las clulas cancerosas que contienen genes ras alterados y al desarrollo de mejores estrategias para el tratamiento del cncer.
15-4 Convergencia, divergencia e interferencia entre diferentes sistemas de seales

La va para la transmisin de seales mitgenas descrita antes e ilustrada esquemticamente en la figura 15-27 es una va lineal que conduce directo desde un receptor en la superficie celular al DNA en el ncleo de la clula. Aunque esta es la nica va en la cual se ha identificado cada eslabn de la cadena, no es la nica va disponible para transmitir
652
FIGURA 15-28. (Di!M;o por Tony Bramley, Trends Biochem Sci. 19:469, I994.J
seales desde la superficie celular por medio de un RTK activado. Los datos de estudios recientes indican que los circuitos de informacin dentro de la clula son complejos; por ejemplo:
Seales procedentes de varios factores de crecimiento no relacionados, cada uno enlazado a su propio receptor, pueden converger para activar a un efector comn, como Ras o proteincinasa activada por mitgeno.
Factores de crecimiento, por ejemplo: FCE, FCDP
RNAm
Sntesis de protenas
FIGURA 15-29. Papel de la cascada cPAM para controlar la traduccin. La activacin de la actividad cinasa de cPAM conduce a la fosforilacin de la protena PHAS-1, lo cual causa que se disocie del factor de inicio de traduccin eFI4E, activando al factor y estimulando la sntesis de protena.
653
Seales del mismo ligando, como FCE o insulina, pueden divergir para activar varios efectores diferentes, lo que provoca respuestas celulares diversas. Pueden pasar seales hacia atrs y hacia delante en diferentes vas, fenmeno conocido como interferencia. Estas caractersticas de las vas para transmisin de seales se ilustran esquemticamente en la figura 15-30. A partir de la figura 15-27 es evidente que la va Ras desempea un papel central para dirigir la informacin a travs de la clula, de manera parecida a la orientacin de la informacin en el sistema nervioso central desde los diferentes rganos del cuerpo y hacia ellos. El sistema nervioso central recoge informacin acerca del ambiente a travs de los diferentes rganos de los sentidos, en tanto que la clula recibe informacin acerca de su ambiente a travs de la estimulacin de diferentes receptores en su superficie. Igual que los rganos de los sentidos sensibles a formas especficas de estmulos (p. ej., luz, presin u ondas sonoras), los receptores de la superficie celular slo pueden enlazarse a ligandos especficos y no son afectados por la presencia de una gran variedad de molculas no relacionadas. Una sola clula puede tener docenas de receptores diferentes capaces de enviar seales simultneas al interior de la clula. Se cree que muchas de las seales que llegan a travs de estos receptores lo hacen a travs de la va Ras. Las seales que abandonan la va Ras pueden entonces canalizarse hacia vas orientadas "hacia afuera" que pueden provocar que la clula se divida, cambie de forma, active una va metablica
particular o incluso causen el suicidio de la clula, como se analizar en la siguiente seccin. De esta manera, la clula al parecer es capaz de integrar la informacin que llega de diferentes fuentes y elaborar una respuesta integral apropiada.
Ejemplos de vas convergentes para transmisin de seales

Uno de los ejemplos ms interesantes de convergencia de vas para la transduccin de seales surgi recientemente de estudios acerca de la respuesta a insulina. En la pgina 648 se hizo notar que la insulina se enlaza a un receptor para insulina desencadenando la fosforilacin de un sustrato del receptor para insulina y la activacin de PI(3)K (fig. 15-24). La insulina tambin desencadena otras respuestas celulares, incluyendo activacin de la sntesis de protenas y estimulacin del crecimiento. En la figura 15-31 se muestra la va donde ocurre esto. La fosforilacin del sustrato del receptor de insulina genera un sitio de estacionamiento para Grb2, la misma protena SH2 que se une al FCE fosforilado o al receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas. Por lo tanto, las vas para transmisin de seales iniciadas por el enlace de estos tres ligandos (FCE, FCDP e insulina) convergen para activar a Ras y a la cascada cPAM, lo que provoca la transcripcin y traduccin de un grupo similar de genes promotores de crecimiento en la clula especfica.
Receptores unidos a protena G

Acetilcolma, histomina NA, 5-HT, ATP, FAP, TXA;, Glutamato, Angiotensina II, Vasopresina, Bradicinina, Sustancia P, Bombesina, Neuropptido Y, Trombina, Colecistocinina, Endotelina, Neuromedina, TRH, GnRH, PTH Odorantes, Luz
"
i " y* \G -* T PKC i
Receptores unidos a tirosincinasa
<^\
Actividad
FCDP, FCE, etc.
PI(3)K
PIP_
celular V mitognesis
I
KI<;URA 15-30. Ejemplos de convergencia, divergencia e interferencia entre diferentes sistemas de transduccin de seales. Este dibujo muestra un esquema de las vas para transduccin de seales iniciadas por receptores que actan a travs de protenas G hcterotrimricas y receptores de tirosincinasa. La dos vas convergen por activacin de diferentes isoformas fosfolipasa C, y en ambas se producen los mismos segundos mensajeros (IPs y DAG). La activacin del receptor de tirosincinasa por el FCDP o por el FCE conduce a la transmisin de seales a lo largo de tres vas diferentes, un ejemplo de divergencia. La interferencia entre los dos tipos de vas se ilustra por los iones calcio liberados del REL por IPs y que entonces pueden actuar sobre diferentes protenas, incluyendo proteincinasa C (PKC) cuya actividad tambin es estimulada por diacilglicerol. (Segn M.]. Berridge, reimpreso con permiso de Nature, val 363, p. 315, 1993. Copyright 1993 por Macmillan Magazines Limited.)
654
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente Factores de crecimiento, p. ej.: FCE, FCDP
Insulina
\rv x^fe
Sustratos
DAG
Cascada cPAM
FIGURA 15-32. Las seales transmitidas desde el receptor del factor de crecimiento epidrmico pueden divergir hacia distintas vas.
FIGURA 15-31. Las seales transmitidas desde el receptor de insulina y el receptor FCE o FCDP convergen sobre Ras y a continuacin se transmiten a lo largo de la cascada de proteincinasa activada por mitgeno.
Ejemplos de vas divergentes para transmisin de seales

En la seccin previa vimos que el enlace del FCE o del FCDP a sus correspondientes receptores conduce a la autofosforilacin del receptor y al reclutamiento de la protena Grb2 SH2en la membrana plasmtica (fig. 15-26). Grb2 no es la nica protena que contiene un dominio SH2 que se enlaza a fosfotirosina capaz de enlazarse a un receptor FCE fosforilado o a un factor de crecimiento derivado de plaquetas. Cuando menos otras dos protenas SH2, PI(3)K y fosfolipasa C, tambin se pueden enlazar a estos receptores (fig. 15-32) y activarse como resultado de esta interaccin. Ambas enzimas fueron estudiadas anteriormente en relacin con otro tipo de estmulo. PI(3)K se describi como enzima que fosforila al fosfatidilinositol (pg. 648), y la fosfolipasa C como enzima que desdobla el fosfatidilinositol fosforilado en IPs y DAG, ambos segundos mensajeros (pg. 639). Estas dos enzimas permanecen a la cabeza de sus propias vas para transmisin de seales, y por lo tanto el enlace de FCE o FCDP con sus correspondientes receptores no slo enva una seal a lo largo de la va Ras-cPAM, sino tambin a lo largo de vas separadas generadas por la fosforilacin del inositol (fig. 15-32). El trmino "Ras" se usa en dos contextos diferentes. Por una parte, Ras es una protena especfica, producto del gen ras. Por la otra, el trmino "Ras" se usa para describir una superfamilia de pequeas protenas homologas enlazadas a GTP codificadas por cuando menos 50 genes diferentes. Las protenas codificadas por varios de estos genes (princi-
plmente miembros de la subfamilia Rho) son elementos clave de las vas que transmiten seales desde los receptores de la membrana plasmtica al citoesqueleto, provocando cambios en la disposicin de los filamentos de actina que afectan la forma, la motilidad y las propiedades de adherencia de la clula. Los efectos de la inyeccin de una protena Rho sobre la configuracin del citoesqueleto de un fibroblasto activado se muestra en la figura 15-33.
Interferencia entre las vas para transmisin de seales

En las secciones previas examinamos algunas vas para transmisin de seales como si funcionaran de manera independiente siguiendo una cadena de sucesos lineales. En realidad, los circuitos de informacin que operan en las clulas probablemente recuerden ms una red interconectada en la cual les elementos producidos en una va pueden participar en lo que ocurre en otras vas. Cuanto ms se conoce acerca de la informacin transmitida en las clulas, ms se descubre acerca de interferencias entre las vas para transmitir seales. En vez de tratar de clasificar las vas que pasan informacin en una y otra direccin dentro de la clula, consideraremos un par de ejemplos que implican al AMPc para ilustrar la importancia en este tipo de interferencia. El AMP cclico se estudi en la pgina 631 como iniciador de una reaccin en cascada que conduce a la movilizacin de la glucosa. Datos recientes indican que el AMPc tambin puede inhibir el crecimiento de varias clulas, incluyendo fibroblastos y adipositos, por bloqueo de las seales transmitidas a travs de la cascada de la proteincinasa activada por rnitgeno. Se cree que el AMP cclico realiza esto activando la cinasa dependiente de AMPc (PKA) capaz de fosforilar e inhibir a Raf, la protena que permanece a la
655
FIGURA 15-33. Resultados de un experimento en el cual se inyecta protena de la familia Rho a un cultivo de fibroblastos. Las clulas no inyectadas se muestran en a y c, las clulas inyectadas con Rho se muestran en b y d. El aspecto de cada una de estas clulas en el microscopio de contraste de fases se muestra a la izquierda y la imagen inmunofluorescente de la clula correspondiente se muestra a la derecha. El espectacular efecto sobre la forma de estas clulas se observa comparando las micrografas del contraste de fases a y b o de c y d. Los correspondientes efectos sobre el dtoesqueleto se observan comparando las imgenes por inmunofluorescencia. Las clulas en a y b fueron teidas con faloidina fluorescente para revelar la distribucin de filamentos de actina, en tanto que las clulas en c y d se tieron con anticuerpos fluorescentes contra tubulina para revelar la distribucin de los microtbulos. (Segin Hugh F. Pctterson y cois. J. Cell Biol. 111:1005, 1990; con permiso de Rockefeller Unversty Press.)
cabeza de la cascada cPAM (fig. 15-34). En secciones previas se hizo notar en otro ejemplo que tanto Ca2+ como AMPc son segundos mensajeros que evocan respuestas distintas en clulas especficas. Pero estos dos mensajeros pueden tener efectos profundos sobre otras vas. Por ejemplo, Ca2+ (junto con calmodulina) puede activar a la adenilcclasa {que sintetiza AMPc) y la AMPc fosfodiesterasa (que descompone a AMPc). Inversamente, la proteincinasa dependiente de AMPc puede fosforilar los canales del ion calcio alterando su capacidad para liberar Ca2+ hacia el citoplasma. Adems, varias protenas, incluyendo el factor de transcripcin CREB (pg. 631), la glucgeno sintasa y la fosforilasa cinasa, que desempean papeles importantes en el metabolismo de la glucosa, pueden ser fosforiladas por cinasa dependiente del AMPc y la cinasa dependiente de Ca 2+ -calmodulina. Es evidente que las vas para transmi-
sin de seales de una clula son muy interdependientes, y que descifrar los factores que controlan a las vas de transmisin de informacin a travs de los diferentes tipos de clula todava mantendrn ocupados a los investigadores durante muchos aos.
15-5 Otros sistemas de seales

Las vas mejor estudiadas para transmitir seales se inician por el contacto entre ligandos extracelulares y receptores acoplados a protena G o receptores de tirosincinasa, pero tambin se han identificado muchos otros caminos que conducen desde el medio extracelular hasta el interior de la clula. Algunas de las vas ms importantes se analizan en la siguiente seccin.
656
Receptor Factor de de FCE crecimiento Receptorx Epinefrina I
La desactivacin metablica del NO genera los nitratos que aparecen en la orina de animales cuyos macrfagos participan en actividad fagocitaria extensa durante la inflamacin. El xido ntrico result ser un mensajero en un nmero cada vez mayor de actividades biolgicas. Por ejemplo, las clulas endoteliales que revisten la superficie interna de los vasos sanguneos producen NO en respuesta a la acetilcolina liberada por nervios autnomos que inervan a los vasos (fig. 15-35). El enlace de acetilcolina a la superficie externa de la clula endotelial (paso 1, fig. 15-35) indica elevacin de la concentracin citoplsmica de Ca2+ (paso 2), que activa a la sintasa de xido ntrico (paso 3). El NO formado en las clulas endoteliales difunde a travs de la membrana plasmtica al interior de las clulas de msculo liso adyacentes (paso 4), donde estimula a la guanililciclasa (paso 5), enzima que sintetiza GMP cclico (GMPc), un segundo mensajero importante de estructura similar a AMPc. El GMP cclico desencadena la respuesta que conduce a la relajacin de la clula muscular (paso 6) y la dilatacin subsecuente del vaso sanguneo. El descubrimiento de la dilatacin de vasos sanguneos mediada por NO explica la accin de la nitroglicerina, empleada durante muchos aos para tratar el dolor de la angina de pecho resultante de flujo sanguneo inadecuado al miocardio. La nitroglicerina se desintegra en el cuerpo para formar xido ntrico, que estimula la relaja-
Actividad del gen FIGURA 15-34. Ejemplo de interferencia entre dos vas principales para la emisin de seales. Las pruebas sugieren que el AMP cclico puede actuar en algunas clulas por medio de una PKA cinasa dependiente de AMPc para impedir la transmisin de seales desde Ras a Raf, que tiene el efecto de inhibir la activacin de la cascada de proteincinasa activada por mitgeno.
Clula endotelial
ACh Papel del NO y del CO como mensajeros celulares En 1985 se aisl una cepa muante de ratones cuyos macrfagos carecan de la capacidad habitual para fagocitar clulas anormales o bacterias. Estos ratones tambin mostraron anomalas en el metabolismo del nitrgeno. En tanto la inflamacin resultante de la infeccin bacteriana se acompa de incremento en la excrecin de nitratos en la orina de ratones normales, en los miembros de esta cepa mutante no se observ esta respuesta. En aquel momento la relacin entre inflamacin y excrecin de nitratos era totalmente confusa. Posteriormente se descubri que la actividad fagocitaria en los macrfagos normales en cultivo de clulas dependa de la presencia de arginina en el medio; en ausencia de este aminocido, los macrfagos eran incapaces de engullir materiales extraos. Pronto se descubri que la arginina es un sustrato de una enzima llamada sintasa de xido ntrico, que ibera xido ntrico (NO) como uno de los productos de oxidacin de la arginina. A continuacin el NO acta corno mensajero intracelular que estimula la actividad fagocitaria de la clula. Por lo tanto, la sustancia NO, alguna vez considerada slo como contaminante txico de la atmsfera, result ser un mensajero fisiolgico esencial.
Sintasa de xido ntrico
'Clulas de msculo liso
Fl<;i KA 1 5-33. Va para la transduccin de seales que incluye NO y GMP cclico, que produce dilatacin de los vasos sanguneos. Los pasos ilustrados en la figura se describen en el bexto. (Segm R.G. Kuowes y S. Moneada, Trcnds Biochem Sci. 17:401, 1992.)
CAPITULO 15
657 por protenas dimricas que se encuentran en sitios de clula-sustrato y en contacto clula-clula. Numerosos datos indican que la interaccin entre el dominio extracelular de una integrina con un ligando extracelular, como una molcula de fibronectina de la matriz extracelular, genera seales en la clula que pueden conducir a la liberacin de Ca2+ al interior del citoplasma, a incremento de la sntesis de segundos mensajeros de inositol, a incremento del grado de fosforilacin de tirosina de las protenas celulares y a cambios en la expresin de genes. Uno de los efectores causantes de dichos cambios es una protena tirosincinasa llamada nasa de adherencia foca! (CAF), as denominada porque se concentra en adherencias focales, o sea, sitios especializados en la membrana plasmtica donde las clulas hacen contacto con el sustrato (pg. 249). Se cree que la cinasa de adherencia focal acta como efector en las respuestas mediadas por integrina que requieren reorganizacin del citoesqueleto, lo que puede afectar el curso del desarrollo y la conducta celulares. La figura 15-36 muestra las adherencias focales presentes donde !a superficie subyacente de fibroblastos de rata entran en contacto con el plato de cultivo. Los filamentos de actina aparecen de color verde en la micrografa, en tanto que los residuos de fosfotirosina al parecer generados por CAF se tien de rojo. Las reas de color naranja son sitios donde los microfilamentos y los residuos de fosfotirosina coinciden en la adherencia focal. La cinasa de adherencia focal tambin se considera como un efector que desencadena la agregacin de plaquetas, los elementos no nucleados de la sangre encargados del cierre de las heridas en los vasos sanguneos. La agregacin de plaquetas se estimula por contacto de sus superficies con ciertas protenas sanguneas, como el fibringeno (fig. 7-15). Los datos indican que el enlace de fibringeno al dominio
cin de los msculos lisos que revisten los vasos sanguneos del corazn incrementando el flujo de sangre a ese rgano. Muchos investigadores piensan que la produccin de NO en el cuerpo es el determinante aislado ms importante de la presin arterial de una persona. Las concentraciones ms elevadas de sintasa de xido ntrico se encuentran en las clulas nerviosas localizadas en ciertas partes del cerebro y en los nervios raqudeos que inervan varios rganos perifricos. Se cree que el NO producido en las neuronas acta como neurotransmisor para producir respuestas especficas en clulas blanco, incluyendo las contracciones peristlticas de la capa de msculo liso del intestino y el llenado con sangre del pene durante la ereccin. La investigacin acerca de la NO sintasa condujo a los investigadores a otra enzima, la hem oxigenasa, que cataliza la destruccin del grupo hem de la hemoglobina eliminada de las clulas sanguneas viejas y gastadas. Pero la hem oxigenasa tambin se encuentra en concentraciones relativamente altas en ciertas clulas nerviosas, donde es muy poco probable que participe en la degradacin del hem. El papel de la hem oxigenasa en las clulas nerviosas es ms evidente que cuando se comprueba que uno de los productos de la reaccin que cataliza es el monxido de carbono (CO), el cual, igual que el NO, es un contaminante txico de la atmsfera. Cada vez se acumulan ms pruebas de que el CO acta como mensajero qumico para estimular la produccin de GMPc en clulas especficas. La demostracin de un papel para el CO en la funcin nerviosa proviene del estudio de neuronas olfatorias, que normalmente responden a la presencia de molculas odorantes estimulantes con elevacin de la concentracin de GMPc. Cuando se trata a animales con un frmaco que inhibe la hem oxigenasa, la GMPc ya no se eleva en las neuronas olfatorias.
Seales originadas por contactos en la superficie celular

Todas las seales estudiadas antes se originan por interaccin de la clula con sustancias disueltas en su ambiente. Las clulas tambin pueden responder a contactos que hacen con objetos insolubles en su ambiente, incluyendo sustratos no celulares (como membranas bsales) y las superficies de otras clulas. En el captulo 7 se describi de qu manera las clulas desarrollan contactos altamente especializados con otras clulas y con la matriz extracelular. Tpicamente, estos contactos son sitios donde ciertos tipos de protenas de membrana se agrupan y actan como puentes entre el objeto extracelular con el que hacen contacto y las disposiciones especficas de elementos citoesquelticos situados en la superficie interna de la membrana plasmtica. Se cree que estas protenas de membrana y las regiones especializadas del citoesqueleto actan en conjunto como conductos para transmitir seales desde el medio externo hasta el interior de la clula. De los diversos tipos de protenas de membrana que participan en la transmisin de seales celulares desde "el exterior al interior", las integrinas estn sometidas a mayor investigacin. Como se estudi con detalle en el captulo 7, las integrinas son los receptores de membrana constituidos
FICUEtA 15-36. Demostracin experimental de la presencia de residuos de fosfotirosina en los sitios de adherencia focal en fibroblastos de rata. Los filamentos de actina, que se irradian a partir de las reas de contacto en las adherencias focales, estn teidos con faioidina conjugada a fluorescena (verde). Los residuos de fosfotirosina se localizan mediante un anticuerpo fluorescente rojo. Los sitios de superposicin de los filamentos de actina y residuos de fosfotirosina en las regiones de contacto focal aparecen de color naranja. (Cortesa de Keiti Burridge.)
658
extracelular en la membrana plasmtica de la plaqueta transmite una seal a travs de la membrana que activa las molculas de cinasa de adherencia focal citoplsmicas (fig. 15-37), lo que conduce a la fosforilacin de protenas citoplsmicas necesarias para la agregacin. Esto explicara por qu las plaquetas de pacientes que padecen trombastenia de Glanzmann, quienes carecen de esta integrina particular, no se pueden activar por fibringeno.
Papel de las fos alagas en la transmisin de seales celulares

En este captulo se subraya el papel de las proteincinasas para estimular (e inhibir) la actividad de otras protenas. La fosforilacin de protenas es una modificacin reversible, de modo que cualquier fosfato aadido por una proteincinasa puede eliminarse mediante una proteinfosfatasa. Por lo tanto, las cinasas y las fosfatasas muestran efectos opuestos sobre su sustrato: cuando la fosforilacin activa al sustrato, la desfosforilacin lo inactiva, y viceversa. Igual que las proteincinasas, algunas fosfatasas son multifuncionales y capaces de eliminar fosfatos de varias protenas diferen-
tes, en tanto que otras son muy especficas y slo pueden eliminar fosfatos de uno o dos sustratos. La mayor parte de las fosfatasas, como las cinasas que revierten, pueden extraer fosfatos, sea de residuos de serina y treonina o de residuos de tirosina, pero no de ambos. Sin embargo, se conocen unas pocas fosfatasas con doble especificidad capaces de eliminar fosfatos de los tres tipos de residuos aminocidos. Todas las proteinfosfatasas estudiadas hasta ahora son enzimas citoplsmicas solubles. Recientemente, se descubri una nueva clase de fosfatasas que atraviesan la membrana plasmtica y al parecer actan como receptores de superficie celular que participan en la transmisin de seales celulares y en la adherencia entre clulas. Estas molculas se denominan/os/ftesas parecidas a receptores de proteintirosina (FRPT). El papel de las FRPT como molculas de adherencia celular fue sugerido por experimentos en los cuales un gen de una de estas protenas (FRPTm) se introdujo en clulas de insectos normalmente no adherentes entre s. Luego de captar al gen y expresar el producto en su superficie, estas clulas transfectadas se agregaron para formar grumos (fig. 15-38) asociados por interacciones especficas entre las clulas FRPT con sus vecinas. La porcin extracelular de FRPT contiene dominios similares a los observados en otras molculas para adherencia celular, incluyendo fibronectina (pg. 243), y se cree que suministran un enlace directo entre los procesos de adherencia celular y la transmisin de seales a travs de la membrana.
Vas que conducen a la muerte celular

Consideremos los siguientes acontecimientos, los cuales ocurren durante el desarrollo embrionario: muchas ms neuronas salen del sistema nervioso central en direccin a un rgano especfico que las requeridas para inervar dicho rgano; se producen linfocitos T (clulas inmunolgicas encargadas de destruir clulas anormales o infectadas) que tienen capacidad de atacar a las propias clulas del cuerpo; las formas ms primitivas de la mano del ser humano recuerdan una paleta sin espacio alguno entre los tejidos que se convertirn en los dedos. En cada una de estas situaciones, las clulas que ya no son necesarias (como las neuronas en exceso o las clulas situadas entre los dedos) o que poseen ta capacidad de daar al individuo (como los linfocitos T) sufren un proceso llamado apoptosis. A diferencia de la muerte de las clulas que se produce por lesiones tisulares (suceso denominado necrosis), la apoptosis es un tipo de muerte celular ordenada, o programada, en la cual la clula responde a ciertas seales iniciando una respuesta normal que conduce a su propia muerte. Se cree que la apoptosis requiere la activacin de un conjunto especfico de genes que ha evolucionado para destruir a la clula de manera que su muerte tenga el menor efecto sobre el ambiente que la rodea. La muerte por apoptosis se caracteriza por la compactacin total de la clula y su ncleo (fig. 15-39), la diseccin ordenada de la cromatina en pedazos por accin de una endonucleasa especial que separa DNA, y el rpido engullimiento de la clula muerta por fagocitosis. Como se ilustra en los ejemplos anteriores, la apoptosis es un suceso comn durante el desarrollo embrionario, pero tambin ocu-
Espectrina actinina
CAF
FIGURA 15-37. Activacin de la cinasa de adherencia focal (CAF) en las plaquetas sanguneas. La interaccin del fibringeno en la superficie extracelular de la integrina nbft conduce a la transmisin de una seal a travs de varias protenas relacionadas con la membrana {incluyendo talina y actina) hacia la CAF, activada para fosforilar varias protenas de sustrato incluyendo Src, que es una tirosincinasa. Estas acciones promueven la agregacin de plaquetas. (Segn E.A. Clark, S.J. Shattit y J.S. Bruce, Trends Biochem Sci. 29:467, 1994.)
659
(a)
(b)
FIGURA 15-38. Resultados de un experimento que sugieren que las fosfatasas parecidas a receptores de proteintirosina puede participar en la adherencia clula-clula. a) Las clulas testigo muestran poca tendencia a adherirse entre s. b) Las clulas del mismo tipo mostradas en a fueron manipuladas por ingeniera gentica para expresar una fosfatasa similar a receptor de proteintirosina sobre su superficie. A diferencia de las clulas testigo, las clulas manipuladas genticamente se adhieren entre s formando grumos. (Segn M.artijn Gebbink y Gerben Zondag, Science 261:633, 1993; reimpreso con permiso.)
rre en tejidos adultos y puede ser un arma particularmente importante para la destruccin de clulas que potencialmente pueden desarrollarse para formar tumores malignos (comentado en la seccin 16-3). En este momento se sabe muy poco acerca de las vas para transmitir seales que inducen a una clula a suicidarse, pero esto tal vez cambie en los siguientes aos, puesto
que ahora la investigacin se ha enfocado en la apoptosis. Las pruebas sugieren que la apoptosis puede desencadenarse por algunas condiciones externas, segn el tipo de clula. Muchas clulas cultivadas diferentes son estimuladas a entrar en apoptosis cuando se eliminan factores de crecimiento del medio; quiz la disyuntiva sea crecer y dividirse o morir. Las clulas epiteliales de la prstata entran
FIGURA 15-39. Comparacin de clulas normales y clulas apoptticas. a-b) Micrografas con microscopio de luz de una clula cultivada HL-60 normal (a) y una apopttica (b). El ncleo de la clula apopttica est altamente condensado y fragmentado, c-d) Micrografas electrnicas de una clula T hibridoma normal (c) y apopttica (d). La clula apopttica muestra muchas burbujas en su superficie que brotan desde el interior de la clula. (Segn Seamus J. Martin, Douglas R. Creen y Thomas G. Cotter, Trends Biochem Sci. 19:28, 1994. Micrografa electrnica por Y. Shi y D.R. Creen.)
(b)
660
en apoptosis cuando se suprime la hormona sexual masculina testosterona. Esta es la razn de que el cncer prosttico propagado a otros tejidos se pueda tratar con frmacos que interfieran con la sntesis de testosterona. Cualesquiera que sean las seales externas que desencadenan la apoptosis, al parecer el proceso es mediado principalmente por liberacin de Ca2+ al interior del citoplasma y la activacin de proteincinasas.
Sistemas para transmisin de seales en plantas

La investigacin acerca de las vas para transmitir seales en clulas vegetales ha permanecido muy por detrs de los
estudios en clulas animales, pero se est efectuando un nmero cada vez mayor de estudios en plantas. Los datos de estos estudios indican que las plantas y los animales comparten ciertos mecanismos bsicos para transmitir seales, incluyendo el uso de Ca 2+ (pg. 641) y de mensajeros f osfoinositdicos, pero que ciertas vas son peculiares de cada reino. Por ejemplo, los nucletidos cclicos, que pueden ser el mensajero celular ms ubicuo en animales, al parecer desempean un papel sin importancia, si es que tiene alguno, en la transmisin de seales en clulas vegetales. Por otra parte, como se estudia a continuacin, las plantas contienen un tipo de proteincinasa ausente en clulas animales. Desde hace mucho se sabe que las clulas bacterianas contienen una proteincinasa capaz de fosforilar residuos de histidina y desempea un papel clave en la mediacin de la
LA VIA E X P E R I M E N T A L
Descubrimiento y caracterizacin de las protenas enlazadas a GTP

A finales de los anos 1950 y 1960, Earl Sutherland y sus colegas, en la Case Western Reserve University, descubrieron que ciertas hormonas, como la epinefrina, actan al enlazarse a un receptor especfico en la superficie de la clula que activa a la enzima adenililciclasa sobre el lado interno de la membrana. La activacin de la adenililciclasa induce la produccin de un segundo mensajero, AMP cclico, que se difunde al citoplasma e inicia la respuesta celular, revisado en 1 A finales del decenio de 1960, el concepto de segundo mensajero estaba ya bien establecido, pero poco se saba acerca del mecanismo molecular preciso que permite a una hormona (u otro ligando) enlazada en el exterior de la membrana activar fa adenililcicasa. Una posibilidad era que el sitio activo de la adenililciclasa fuera parte del propio receptor de la hormona. Para conocer ms acerca de la relacin entre receptores hormonales y adenililciclasa, Martin Rodbell y Lutz Birnbaumer, de los National Institutes of Health, comenzaron una serie de experimentos sobre membranas plasmticas aisladas de adipocitos y clulas hepticas.2 Una de las primeras preguntas que intentaron responder fue si estas clulas, que responden a varias hormonas diferentes produciendo AMPc, poseen una sola adenililciclasa activada por las diferentes hormonas o tienen diferentes adenililciclasas para cada una de las hormonas a las cuales responden. Se eligieron clulas adiposas para los estudios iniciales debido a que son fciles de aislar y liberar de otros tipos de clula, responden a varias hormonas que causan rpido incremento en la concentracin intracelular de AMPc (estimulando enzimas que participan en la descomposicin de lpidos), y sus membranas plasmticas pueden aislarse como "fantasmas" mediante lisis osmtica. Seis hormonas diferentes (ACTH, epinefrina, glucagon, TSH, LH y proactina) mostraron accin estimulante sobre la actividad de adenililciclasa en fantasmas de clulas adiposas aisladas. En la figura VE 15-1 se muestran las curvas de dosis y respuesta de las primeras tres de estas hormonas actuando por separado. Como se muestra en el cuadro PH 15-1, cuando estas hormonas se combinan en grupos de dos o tres, sus efectos sobre la actividad de adenililciclasa no son aditivos, lo que sugiere que cada una de estas hormonas estimula a la misma poblacin de molculas de adenililciclasa. En experimentos subsecuentes se demostr que las diferentes hormonas interactan con receptores espacialmente distintos. Estos datos juntos condujeron a Rodbell y Birnbaumer a proponer que, aunque los diferentes receptores hormonales estimulan una poblacin comn de molculas de adenilifciclasa, los receptores adenililcicasa existen por separado en la membrana plasmtica de las clulas adipesas. En 1971, Rodbell y sus colegas publicaron una serie de trabajos acerca de la actividad de glucagon y epinefrina sobre la estimulacin de adenililciclasa en membranas plasmticas aisladas de clulas hepticas. Una de las tcnicas adoptadas en estos estudios fue vigilar la capacidad de las molculas de glucagon marcadas con istopos radiactivos para enlazarse a sus correspondientes receptores sobre las membranas plasmticas aisladas. Puesto que el ATP es un sustrato de la reaccin adenililciclasa, se pudo vigilar el efecto de la presencia del ATP sobre e! enlace del glucagon marcado, y tambin los efectos de los otros tres trifosfatos de nuclesido comunes, UTP, CTP y GTP. Durante estas investigaciones se notaron por primera vez los efectos especiales de GTP.3 Uno de los efectos observados de los trifosfatos de nuclesido fue que causan disociacin del glucagon marcado enlaza-
661
respuesta celular a varias seales ambientales desencadenado cambios en la expresin de genes o modificando la conducta de la clula. Hasta 1993, se pensaba que estas enzimas se restringan a clulas bacterianas, pero entonces se descubrieron tanto en levaduras como en plantas que producen flores. En ambos tipos de eucariotes, las enzimas son protenas transmembrana que se cree poseen un dominio receptor extracelular y un dominio histdincinasa citoplsmico. Las seales generadas por estas enzimas al parecer alimentan a una cascada de proteincinasa activada por mitgeno. Las pruebas indican que la hstidincinasa de plantas (codificada por el gen Efr) desempea un papel clave en la respuesta del organismo al gas etileno, hormona que regula el crecimiento e induce la maduracin de las frutas.
Otra va nica para transmisin de seales de las plantas se inicia por el ataque de un microorganismo patgeno o de una plaga de insectos. La porcin daada de la planta responde a la amenaza produciendo un mensaje qumico, que se cree est compuesto de cido saliclico (un sucedneo de la aspirina, que es el cido acetilsaliclico). El cido saliclico (AS) se propaga por toda la planta y es detectado por una protena que se enlaza al AS, probablemente la enzima catalasa. La catalasa es una enzima protectora que destruye especies reactivas de oxgeno (pg. 199). Cuando el AS se enlaza a la enzima, inhibe su actividad cataltica conduciendo a a formacin de ciertas especies de oxgeno que pueden actuar como segundos mensajeros para generar una respuesta sistmica de defensa.
do a las membranas plasmticas aisladas. En tanto ATP, UTP y CTP no afecten la disociacin del glucagon de las membranas en concentraciones menores de 100 fiM, GTP estimula la disociacin a concentraciones tan bajas como 0.05 fM. En la figura VE 15-2 se comparan los efectos de ATP y GTP para provocar !a disociacin del glucagon de las membranas. (Ntese que la concentracin se grfica en una escala logartmica indicando diferencias muy grandes en la eficacia de los dos trifosfatos.) Estos resultados sugirieron a los autores que los nucletidos de guarni inducen un cambio en el estado o las propiedades de los sitios de enlace del glucagon que disminu-
yen su afinidad por glucagon. Adems, se observ que las membranas de hgado poseen una actividad nucleotidasa capaz de hidrolizar GTP y que esta actividad GTPasa es inhibida por EDTA, un compuesto que se enlaza a iones calcio y magnesio. En el ltimo trabajo publicado de la serie, intentaron responder la pregunta de si los efectos de los nucletidos de guanilo sobre ef enlace de glucagon implica alguna relacin con las acciones de glucagon sobre el sistema adenililciclasa de las membranas hepticas.4 Como se muestra en la figura VE 15-3, el GTP estimula la actividad basal de adenililciclasa y lo hace a concentraciones tan bajas como 10 nM. Ninguno de los otros nucletidos pose esta actividad. Los autores concluyeron que los nucletidos de guanio son necesarios para que el glucagon active la adenililciclasa. Los nucletidos se enlazan a sitios distintos de los sitios de enlace de glucagon y al parecer
X?
Epinefrina
3.0
CTP
ACTH Glucagon
60
ATP
W
i/
A * A-
2.0
_
i.o
_J
-9
L
-8 -7 -6 -5 -4
GTP o ATP (log[MI)
-3 -2 ~ -1
J 10'
L.L
L-t-L IO'T I0' IO'9 Concentracin de la hormona (M)
10"
FIGURA VE 15-1. Efecto de concentraciones variables de ACTH, epinefrina y glucagon sobre Ja actividad de adenililciclasa de fantasmas de clulas adiposas. La inea punteada representa la actividad en ausencia de hormonas aadidas (la adenililciclasa inicialmente se denomin adenilcidasa y posteriormente se le llam adenilato ticlasa). (Segn L Birnbaumer \j M. Rodbell, J. Biol. Chem. 244:3478, 1969.)
FIGURA VE 15-2. Efecto de concentraciones variables de GT y ATP sobre la disociacin de 125I-glucagon de las membranas plasmticas de clulas hepticas. En este experimento las membranas se incubaron previamente durante 15 minutos en un medio que contena glucagon marcado. A continuacin se aadi GTP o ATP en presencia de un gran exceso de gmcagon no marcado. Luego de 15 minutos de incubacin en uno u otro trifosfato de nuclesido, se tomaron muestras para medir el glucagon marcado que permaneca enlazado. El porcentaje de glucagon marcado enlazado que se disocia durante la incubacin con ATP o con GTP se calcul comparando la radiactividad de enlace presente al inicio y al final de los 15 minutos de incubacin con el trifosfato de nuclesido. (Segn M. Rodbel! y cois. J. Bio!. Chem. 246:1873, 1971.)
662
CUADRO VE 15-1. Efectos de las combinaciones de hormonas, a concentracin supramxima, sobre la actividad de adenililciclasa en fantasmas de clulas grasosas* Cambio de la actividad de adenililciclasa debido a hormonas Experimento 1 (37) Adiciones ACTH Epinefrina Glucagon ACTH + epinefrina Epinefrina + glucagon ACTH + glucagon ACTH 4- epinefrina + glucagon Encontrado 0.57 1.00 0.32 0.80 0.99 0.64 0.85 0.02 0.06 0.01 0.04 0.05 0.02 0.04 Calculado si se aade Encontrado 1.19 1.79 0.57 2.04 2.13 1.33 2.30 0.07 0.11 0.04 0,12 0.10 0.06 0.10 Experimento 2 (30) Calculado si se aade
1.57 1.26 0.89 1.88
2.98 2.36 1.76 3.55
* La actividad de la adenililciclasa se calcul a 37 en ausencia del sistema de regeneracin de ATP o a 30 en presencia del mismo. Se usaron las siguientes concentraciones de la hormona, tanto individualmente como de manera combinada: ACTH, 400 ug por mi; epinefrina, 400/g por mi; glucagon, 60 ( g por mi. Los valores son el medio de triplicar determinaciones desviacin estndar. FUENTE: L. Birnbaumer y M. Rodbell, /. Bol. Chem. 244:3479, 1969.
1000 I-
ID MINUTOS
FIGURA VE 15-3. Efecto del ion fluoruro, glucagon y una combinacin de glucagon y GTP sobre la sntesis de AMP cclico con una preparacin de membranas plasmticas aisladas de clulas hepticas. La notable estimulacin del GTP aqu mostrada se logr con una concentracin de GTP de 0.01 mM. Tambin se encontr que el ion fluoruro es un activador eficaz ce adenililciclasa y se emple en un gran nmero de ensayos subsecuentes. (Segn M. Rodbell y cois. J. Biol. Chem. 246:1879, 1971.)
regulan la respuesta de adenililciclasa a la hormona. Estudios subsecuentes en otros laboratorios demostraron que GTP incrementa la respuesta de los sistemas adenililciclasa a otras hormonas, incluyendo hormonas de pptidos, catecolarninas (p. ej., epinefrina) y prostagandinas. Los anlogos no hidrolizables de los trifosfatos de ncleosido son tiles porque permiten a los investigadores distinguir entre los efectos del enlace de nucletidos y la hidrlisis de nucletidos. Cuando un anlogo no hidrolizable de GTP, 5'-guanililmododifosfato, o Gpp(NH)p, se incuba con membranas plasmticas de hgado, glucagon, ATP y otros ingredientes necesarios para el sistema adenililciclasa, Gpp(NH)p imita los efectos estimuladores de GTP y lo hace de manera ms eficiente. Rodbell y sus colegas observaron que Gpp(NH)p provoca notable estimulacin de la actividad adenililciclasa en membranas aisladas de diferentes clulas eucariotas, cualquiera que sea la naturaleza de los receptores acoplados a estos sistemas. Ms an, el anlogo GTP no hidrolizable fue capaz de activar la adenililciclasa incluso en ausencia de hormonas.5 Puesto que GTP inhibe de manera competitiva la activacin de adenililciclasa por Gpp(NH)p, se supone que actan sobre el mismo sitio regulador. Estos resultados indican que el enlace de GTP, y no su hidrlisis, desempea un papel importante en la activacin de la estimulacin mediada por hormona de la formacin de AMP cclico. La principal diferencia entre las actividades de GTP y sus anlogos GTP no hidrolizables es que el primero estimula la adenililciclasa de manera transitoria, en tanto que los ltimos estimulan la actividad por un periodo prolongado. Estos datos condujeron a los investigadores a enfocarse en el mecanismo para la hidrlisis normal de GTP en el sistema adenililciclasa. A mediados de los aos 1970, varios laboratorios, incluyendo el de Rodbell, identificaron una GTPasa localizada en las membranas plasmticas de diferentes clulas. En un estudio clave, Don Cassel y Zvi Selinger, de la Universidad Hebrea
663
de Jerusaln, encontraron que la adicin de isoproterenol (una hormona catecolamina similar a epinefrina) a un sistema para ensayar GTPasa de la membrana plasmtica provoc incremento de 30 a 70% en la hidrlisis de 32P-GTP estimado por la liberacin de 32P {fig. VE 15-4).6 La estimulacin de la actividad GTPasa por la catecolamina fue independiente de la actividad adenililciclasa. Esta conclusin se basa en el hecho de que: 1) la adicin de AMPc en el ensayo de GTPasa no tiene efecto sobre la tasa de hidrlisis de GTP, y 2) el tratamiento de la membrana con N-etilmaleimida, un compuesto que inactiva ciertas protenas atacando sus grupos sulfidrilo (-SH), provoc 98% de inhibicin de adenililciclasa pero no tuvo efecto sobre la hidrlisis de GTP estimulada por catecolamina. Todava no se sabe si las actividades de GTPasa y de adenililciclasa residen en la misma protena o en dos protenas separadas. De cualquier manera, Cassel y Selinger propusieron que la hidrlisis de GTP por la GTPasa sirve para desactivar la adenililciclasa activada y retornar la enzima a estado basal inactivo. En un estudio subsecuente, estos mismos investigadores demostraron que la activacin del receptor por enlace de la hormona provoca la liberacin de GDP enlazado formado por hidrlisis en intercambio de GTP que entra al sitio de enlace del nucletido de guanilo de la protena reguladora.7 Esta funcin de intercambio fue demostrada al incubar preparaciones de membranas de eritrocitos de pavo con una hormona de catecolaminas adems de 3H-GTP, lavado de las membranas y luego incubacin de la preparacin con ms hormona. En estas condiciones, la hormona indujo la liberacin de casi 25% del nucletdo radiactivo enlazado a la membrana. El anlisis
250 r
200 -
10 TIEMPO (minutos)
15
FIGURA VE 15-4. Curso temporal de la hidrlisis de GTP en presencia y en ausencia de la catecolamina isoproterenol por membranas de eritrocitos aisladas de pavo. El efecto de la hormona se observa en la curva inferior, en la cual se grfica la diferencia en la hidrlisis de GTP entre las preparaciones tratadas con hormona y las preparaciones testigo. (Segn D. Cassel y Z. Selinger, Bioc. Biop. Acta 452:543, 1976.)
del nucletido liberado por la hormona indic que era 3HGDP. Estos estudios sugirieron que, en presencia de la hormona, el GTP se enlazaba inicialmente por el sitio de enlace del nucetido de guanilo y luego era hidrolizado por actividad GTPasa con la liberacin subsecuente del producto GDP. La liberacin de GDP inducida por la hormona se estimula por la presencia de concentraciones bajas de GTP, lo que sugiere que el nucletido liberado por la hormona es reemplazado de manera concurrente por el nucletido de guanilo presente en el medio. Segn estos resultados, se propuso que la reaccin GTPasa en el sitio de enlace de nucletido de guanil (conocido como sitio regulador) produce un GDP fuertemente enlazado que inactiva la adenililciclasa. El enlace de una molcula de hormona al receptor desencadena un cambio de conformacin en el sitio nucletido de guanilo, lo que permite su acceso al medio que lo rodea (fig. 15-12). Puesto que las clulas mantienen una concentracin mucho ms alta de GTP en comparacin con GDP, el acceso al sitio de enlace del nucletido favorece que una molcula de GTP desplace al GDP enlazado, provocando la activacin transitoria de la actividad adenililciclasa. Los resultados de los diferentes experimentos que acabamos de describir demuestran la existencia de un componente regulador del sistema hormona-adenililciclasa activado por el enlace de GTP y desactivado por la hidrlisis de GTP. Se ha vuelto la atencin a otras preguntas. La protena enlazada a GTP, como se le llama, es parte integral de la adenililciclasa o un elemento separado? Si la protena enlazada a GTP es un elemento separado, cul es su estructura y de qu manera interacta con los otros elementos principales del sistema, el receptor y la adenililciclasa? Para tomar el camino que conduce a responder estas cuestiones se requiere una breve disgresin. El clera es una enfermedad causada por una toxina bacteriana que provoca diarrea excesiva acompaada de prdida de agua en los individuos afectados. A principios del decenio de 1970, varios laboratorios determinaron que la toxina del clera acta estimulando la adenililciclasa en las clulas del epitelio intestinal. Experimentos subsecuentes revelaron que el efecto de la toxina no se confina a las clulas intestinales, sino que es eficaz para evocar varias respuestas mediadas por la estimulacin hormonal de la adenililcicasa. Se hizo evidente que la toxina del clera imitara la accin de las hormonas al actuar sobre uno de los elementos comnmente presentes en el sistema adenililciclasa. En 1977, Cassel y Selinger demostraron que la toxina acta inhibiendo la actividad GTPasa de la membrana, que equivale al efecto de mantener la adenililciclasa en estado de estimulacin prolongada (fig. VE 15-5).8 Esta observacin demostr ser una de las claves para purificar la protena enlazada a GTP. La coenzima NAD+ est formada por un grupo ADPribosa unido a una fraccin nicotinamida (fig. 3-26). La toxina del clera inactiva a la protena enlazada a GTP transfirindole un grupo ADP-ribosa desde el NAD + a la protena, reaccin conocida como ADP-ribosilacin. Se observ que cuando las membranas plasmticas de los eritrocitos de pichn se incuban con la toxina del clera en presencia de NAD + marcado con 32P, la radiactividad se transfiere desde el NAD+ a una protena de membrana que tiene un peso molecular de 42 kD determinado por electroforesis en gel de poliacrilamida con
664
350r
CH C 1 _ffl
^
CUADRO VE 1 >-2. Purificacin del elemento regulador
1U
-'G
c "o o o 0) *-> & n u ,c o '3 o. a 2 5 0/ n a ai / "5 E /
a^^"^
jj a.
300
,f^
^. ^f^"^
(G/F) de la adenililciclasa del hgado de conejo"

Unidades total (nmol/ min) 4380 2930 1820 740 Actividad especfica (nio! min mg)
< c 250
o E o a a 200 - /
ffl
/
Paso Extracto de colato de membranas DEAE-sefacel nlfrvilTal A r A ^ d Ljirrugci /ALrto**. HeptilaminaBpfirnRa
Protena (mg) 2020
Recuperacin (%)
10
i
vi
0) (B
.s
-~~ "* "
c -I to 150
100 67 42 17 8.0 6.6 3.5
2.2 26 190 1060 1200 1600 3800
L 0
Q- 1 0Ott
m E ta a
/ l / / 0K
-3 <
50 G"
o -
D u
f
1 1ti1
114 9.8 0.70 0.30 0.18 0.039
0.5
1.0
20
Hidroxiapatita GTP-sefarosa DEAE-sefacel
FIGURA VE 15-5. Efecto de la toxina del clera sobre las actividaclasa (derecha) con diferentes concentraciones de GTP. Las membranas tratadas previamente en ausencia (crculos abiertos) o presencia (crculos cerrados) de toxina se ensayaron para actividad GTPasa y adenililciclasa a las concentraciones indicadas de GTP. (Segn D. Cassel y Z. Selinger, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 74:3309, 2977.)
350 290 150
dodecilsulfato de sodio (EGPA-DSS).9 Un estudio similar efectuado por otro grupo de investigadores demostr que cuando menos dos protenas, de 45 kD y de 52 a 53 kD, eran ADP ribosilado por la toxina del clera cuando se ensayaron en una estirpe de clulas cultivadas de linfoma de ratn (llamadas clulas 549) .10 Se emplearon estas clulas en particular porque se dispona de una estirpe muante de ellas incapaz de producir AMPc en respuesta a diferentes hormonas que de otro modo habran provocado dicha respuesta. Esta variante de la estirpe celular, conocida como cyc~, posee adeniilciclasa activable, pero al parecer carece de algn otro componente necesario para la respuesta hormonal. Cuando se incubaron clulas cyc~ con toxinas del clera en presencia de 32P-NAD+, las bandas marcadas por clulas nativas estaban ausentes o muy reducidas. Estos resultados confirman fuertemente la idea de que: 1) los elementos reguladores del sistema de respuesta a adenililciclasa son fsica y genticamente separables de la propia adenililciclasa, y 2) uno o ms de estos elementos reguladores separables (como parte de la protena enlazada a GTP) es un sustrato de la toxina del clera. En 1980, Alfred Gilman y sus colaboradores, de la Universidad de Virginia, lograron purificar la protena enlazada a GTP luego de varios aos de trabajo preliminar. La purificacin se logr extrayendo protenas de membranas plasmticas de hgado en detergente y sometiendo la mezcla a seis procedimientos cromatogrficos sucesivos (cuadro VE 15-2).11 Igual que en cualquier procedimiento de purificacin se requiri un ensayo para identificar la protena buscada en las diferentes fracciones generadas por cada uno de los procedimientos cromatogrficos. El ensayo para la protena enlazada a GTP (o G/F, como se le denomin en este estudio) se bas en la observacin justamente descrita de que las clulas muanles S49 cyc~ del linfoma carecen de esta protena reguladora clave y por lo tanto no responden a la estimulacin hormonal. La adicin de fracciones purificadas de la protena enlazada a GTP a
*Se extrajeron membranas plasmticas de hgado de conejo (8.6 g de protena) y se purificaron. La actividad se midi mediante reconstitucin de la actividad de adenililciclasa activada por fluoruro en membrana cyc~. La actividad especfica se define como la cantidad de actividad reconstituida por cantidad de G/F aadida a la mezcla de reconstitucin. Las recuperaciones son acumulativas a travs de la preparacin. FUENTE: J.K. Northup y cois. Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 77:6518, 1980.
membranas plasmticas aisladas de clulas cyc restituy a las preparaciones su capacidad de responder a los estmulos (en este caso iones fluoruro, que imitan la accin de GTP} por activacin de la adenililciclasa. La actividad especfica de la protena enlazada a GTP en cada paso de la purificacin (cuadro VE 15-2) se define como la cantidad de actividad de adenililciclasa restituida observada por cantidad de protena aadida a las membranas. Como se indica en el cuadro, la actividad especfica del extracto de detergente incrementa aproximadamente 2 000 veces durante el procedimiento de purificacin, que corresponde a una purificacin de 5 000 a 10 000 veces de las membranas plasmticas, o casi 100 000 veces de la protena celular total. Cuando la protena purificada enlazada a GTP se someti a EGPA-DSS, se observ la presencia de tres polipptidos distintos (pesos moleculares de 52, 45 y 35 kD), lo que indica que la projena reguladora es un complejo de mltiples subunidades. De los tres polipptidos identificados en el estudio inicial, el polipptido de 52 kD estaba presente en cantidades mucho rns pequeas y ms variables y finalmente se observ que no era un miembro de la protena enlazada a GTP. El polipptido de 45 kD se conoci como subunidad a y el polipptido de 35 kD como subunidad /3. Posteriormente se descubri un tercer polipptido de 9 kD. De las tres subunidades, se demostr que la subunidad a de 45 kD es el polipptido que contiene el sitio de enlace del GTP y tambin es e polipptido ADP-ribosilado por la toxina del clera. Conforme se efectuaban estos estudios, en el laboratorio de Gilman se sigui otra lnea de investigacin enfocada sobre una protena que inhibe la adenililciclasa mediante un proceso dependiente de GTP. Se observ que la protena inhibidora es inactivada por una toxina (llamada IAP) producida por la bac-
665
teria (BordeteUa pcrtusss) que causa la tos ferina. Cuando las preparaciones plasmticas de ciertas clulas que muestran control inhibidor sobre adenilciclasa se tratan con la toxina IAP purificada, se incrementa la actividad de adenilciclasa, sugiriendo que la toxina inactiva al inhibidor. Estudios adicionaes indicaron que la toxina IAP puede inactivar al inhibidor dependiente de GTP por la misma reaccin (ribosilacin de ADP) empleada por la toxina del clera para inactivar la protena estimuladora enlazada a GTP. Cuando se incubaron membranas plasmticas de hgado con la toxina IAP en presencia de 32P-NAD+, se encontr que la radiactividad se transfiere a una protena compuesta de dos subunidades con pesos moleculares de 41 kD y 35 kD.12 De las dos subunidades, el polipptido de 41 kD es el sustrato aparente de la toxina. Ninguno de estos polipptidos fue marcado por la toxina del clera. Datos adicionales indican que el polipptido de 41 kD contiene un sitio de enlace para GTP. Luego de incubacin con un anlogo GTP hidrolizable, la protena inhibidora enlazada a GTP (mencionada en esas publicaciones como sustrato IAP) se disocia en sus dos subunidades de manera anloga a como lo hace la protena estimuladora enlazada a GTP (mencionada como G/F}. Estos resultados apuntan a una fuerte homologa entre G/F y el sustrato IAP. Ambas protenas fueron purificadas siguiendo los mismos pasos; ambas respondieron de manera similar a los anlogos GTP no hidrolizables y la activacin por fluoruro; las subunidades ms grandes de ambas protenas (45 kD para G/F y 41 kD para IAP) contienen sitios para la ribosilacin de ADP por toxinas especficas y sitios de enlace para GTP; y las subunidades menores de 35 kD fueron indistinguibles. Estos investigadores concluyeron con la afirmacin: "Es posible que la actividad cataltica de [adenilciclasa] sea modulada de manera recproca por un par de homlogos de protenas reguladoras enlazadas a GTP, G/F (Gs) y el sustrato IAP (G). Adems, es intrigante el hecho de que la transducina, una protena reguladora enlazada al nucletdo guanina del segmento ms externo de los bastones [de la retina] que interacta con una fosfodiesterasa GMP cclica activada por luz, muestre notables semejanzas estructurales funcio-
nales. Una interesante familia de protenas que parece estar surgiendo." BIBLIOGRAFA
1. Robison, G.A., Butcher, R.W. y Sutherland, E.W. 1969. Cyclic AMP. Ann. Rev. Biochem. 37:149-174. 2. Birnbaumer, L. y Rodbell, M. 1969. Adenyl cyclase in fat cells. II. Hormone receptors. /, Biol Chem. 244:3477-3482. 3. Rodbelf, M. y cois. 1971. The glucagon-sensitive adenyl-cyclase system in plasma membranes of rat liver. IV. Effects of guanyl nucleotides on binding of 125l-glucagon. /. Biol. Chem. 246:187218764. Rodbell, M. y cois. 1971. The glucagon-sensitive adenyl cyclase system in plasma membranes of rat liver. V. An obligatory role of guanyl nucleotides in glucagon action. /. Biol. Chem. 246:18771882. 5. Londos, C. y cois. 1974. 5'Guanylylimidodiphosphate, a potent activator of adenylate cyclase systems in eukaryotic cells. Proc. Nati. Acad. Sd. U.S.A. 71:3087-3090. 6. Cassel, D. y Selinger, 2. 1976. Catecholamine-stimulated GTPase activity in turkey erythrocyte membranes. Biochem. Biop. Acta 452:538-551. 7. Cassei, D. y Selinger, Z. 1978. Mechanism of adenylate cyclase activation hrough the /?-adrenergic receptor: Catecholamine-induced displacement of bound GDP by GTP. Proc. Nati Acad. Sci. U.S.A. 75:4155-4159. 8. Cassel, D. y Selinger, Z. 1977. Mechanisrn of adenylate cyclase activation by cholera toxin: Inhibition of GTP hydrolysis at the regulatory site. Proc. Nati Acad. Sci. U.S.A. 74:3307-3311, 9. Gil, D.M. y Meren, R. 1978. ADP-ribosylation of membrane proteins catalyzed by cholera toxin: basis of the activation of adenylate cyclase. Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 75:3050-3054. 10. Johnson, G.L., Kasow, H.R. y Bourne, H.R. 1978. Genetic evidence that cholera toxin substrates are regulatory components of adenylate cyclase. /. Biol. Oan. 253:7120-7123. 11. Northup, J. y cois. 1980. Purifcation of the regulatory component of adenylate cyclase. Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 77:6516-6520. 12. Bokoch, G.M. y cois. 1983. Identification of the predominan! substrate for ADP-ribosylation by islet activating protein. /. Biol. Chem. 258:2072-2075.
SINOPSIS
La transmisin de seales en una clula es un fenmeno mediante el cual se transmite informacin a travs de la membrana plasmtica al interior de la clula y con frecuencia al ncleo celular. La emisin de seales celulares tpicamente incluye reconocimiento, del estmulo en la superficie externa de la membrana plasmtica; transferencia de la seal a travs de la membrana plasmtica, y transmisin de la seal al interior de la clula, desencadenando una respuesta. Las respuestas pueden incluir cambio en la expresin de genes, alteracin de la actividad de enzimas metabcas, reconfiguracin de! citoesqueleto, cambio de la permeabilidad a iones, activacin de la sntesis del DNA, o la muerte de la clula. Con frecuencia este proceso se denomina transduccin de seal, puesto que el estmulo recibido en la superficie de la clula es totalmente diferente de la seal liberada en el interior de la misma. Dentro de la clula, la informacin pasa lo largo de vas para transduccin de seales, que con frecuencia incluyen varias proteincinasas y protemfosfatasas capaces de activar o inhibir sus sustratos mediante cambios de conformacin. Otra caracterstica prominente de las vas para emisin de seales es el uso de as protenas enlazadas a GTP que sirven como interruptores para activar o desactivar las actividades. La informacin no siempre se transmite desde el espacio extracelular al interior de la clula mediante un receptor en la superficie celular; hormonas esteroides y xido ntrico, por ejemplo, difunden a travs de la membrana celular y actan directamente en el interior de la clula (/'. 628). Muchos estmulos extracelulares {primeros mensajeros) inician sus respuestas interactuando con un receptor acoplado a
666
CAPITULO 15 Seales celulares: con unican entre las clulas y su ambiente
protena G sobre la superficie externa de la clula y provocando la liberacin de un segundo mensajero dentro de la misma. La captacin y aprovechamiento de la glucosa son controlados por este tipo de vas para emisin de seales. La desintegracin del glucgeno en glucosa es estimulada por las hormonas epinefrina y glucagon, que actan como primeros mensajeros al enlazarse a sus respectivos receptores sobre la superficie externa de clulas especficas. El enlace de las hormonas activa un efector, adenilciclasa, en la superficie externa de la membrana, lo que conduce a la produccin de un segundo mensajero difusible, el AMP cclico (AMPc). El AMP cclico induce su respuesta a travs de una reaccin en cascada en la cual se modifican una serie de enzimas por enlaces covalentes. Las molculas de AMP cclico se enlazan al sitio regulador de una proteincinasa dependiente de AMPc denominada PKA, la cual fosforila fosforilasa cinasa y glucgeno sintasa, activando a la primera enzima e inhibiendo a la ltima. Las molculas activadas de fosforilasa cinasa aaden fosfatos a la glucgeno fosforilasa, activando a esta ltima enzima, lo que conduce a desintegracin del glucgeno para formar glucosa fosfato, que se convierte a glucosa. Como resultado de esta reaccin en cascada, el mensaje original, entregado por enlace de la hormona en la superficie celular, se amplifica extensamente y se reduce mucho el tiempo de respuesta. Otra ventaja de este tipo de reaccin en cascada es la posibilidad de regulacin en diferentes sitios. La alteracin de las funciones de la protena como resultado de adicin de grupos fosfato por las cinasas es revertida por fosfatasas que eliminan los fosfatos. El AMP cclico se introduce en muchas clulas diferentes como respuesta a una gran variedad de primeros mensajeros. El curso de acontecimientos en la clula efectora depende de las protenas especficas fosforiladas por la cinasa dependiente de AMPc (p. 631). Tanto glucagon como epinefrina, y tambin muchos otros primeros mensajeros, actan por enlace a receptores que son protenas integrales de membrana que contiene siete hlices a que atraviesan la membrana. La seal se transmite desde el receptor al efector por medio de una protena G enterotrimrica. Estas protenas se conocen como enterotrimricas porque tienen tres subunidades (a, fi y y) y como protena G porque se une a nucletidos de guanina, sea GDP o GTP, Cada protena G puede existir en dos estados: uno activo con una GTP enlazada o un estado activo con GDP enlazado. Se han identificado ms de 100 diferentes receptores acoplados a protena G que responden a una gran variedad de estmulos diferentes. Todos estos receptores actan a travs de un mecanismo similar. El enlace del ligando a su receptor especfico provoca un cambio de conformacin del receptor que incrementa su actividad por la protena G. Como resultado, el receptor enlazado al ligando se enlaza a la protena G, a continuacin la protena G libera su GDP enlazado y se enlaza a un sustituto GTP, que activa a la protena G. El intercambio de nucletidos de guanina modifica la conformacin de la subunidad Ga, que se disocia de las otras dos subunidades, las cuales permanecen juntas como un complejo Gpy. Cada subunidad Ga disociada con su GTP fijo puede activar molculas aceptoras especficas, como adenililciclasa. La subunidad Ga disociada tambin es una GTPasa que acta para hidrolizar GTP enlazado y formar GDP enlazado, que suprime la capaci-
dad de la subunidad para activar molculas efectoras adicionales. El complejo Ga-GDP se asocia de nuevo con las subunidades G/ty para reconstituir el complejo trimrico y retornar el sistema a su estado de reposo. Cada una de las tres subunidades que constituyen una protena G enterotrimrica pueden existir en diversas isoformas. Diferentes combinaciones de subunidades especficas sirven para construir protenas G con propiedades diferentes en sus interacciones con receptores y efectores (p. 634). La fosfolipasa C es otro efector importante situado en la superficie interna de la membrana plasmtica que puede ser activada por protenas G enterotrimricas. La fosfolipasa C acta para separar el 4,5-difosfato de fosfatidilinositol (PIP2) en dos segundos mensajeros diferentes, 1,4,5-trisfosfato de inositol (IP3) y 1,2-diacilglicerol (DAG). El DAG permanece en la membrana plasmtica donde activa a la enzima proteincinasa C, que fosforila residuos de serina y treonina sobre varias protenas especficas, incluyendo enzimas del metabolismo intermedio, como la glucgeno sintasa, y factores de transcripcin, como la rniogenina. La activacin constitutiva de la proteincinasa C conduce a prdida del control del crecimiento. El IPs es una molcula pequea hidrosoluble que puede difundir hacia el citoplasma, donde se enlaza a receptores IPs localizados en la superficie del RE liso. Los receptores IPj son canales tetramricos para el ion calcio; su enlace con IP^, abre el canal inico y libera Ca2+ en el citoplasma (p. 639). La rpida elevacin del Ca2+ citoplsmico, sea provocado por la abertura de los canales inicos en la membrana citoplsmica o de canales inicos en la membrana plasmtica, desencadena una gran variedad de respuestas celulares. La concentracin de Ca2+ normalmente se conserva a 10~7 M, aproximadamente, dentro del citoplasma por accin de bombas de Ca2+ localizadas en la membrana plasmtica y en el RE liso. Muchos estmulos diferentes, que van desde el espermatozoide fertilizante hasta la llegada de un impulso nervioso en la clula muscular, provocan elevacin sbita del [Ca2+] citoplsmico, que puede ocurrir despus de la abertura de los canales del Ca2+ en la membrana plasmtica, receptores de IPs, o receptores de rianodina, que son un tipo diferente de receptor-canal de calcio localizado en la membrana del retculo endoplsmico liso. Segn el tipo de clula, los canales de rianodina pueden abrirse por un potencial de accin que llega a la'clula, por la sntesis del segundo mensajero ribosa de difosfato de adenosina cclica (ADPRc), o por el flujo hacia adentro de una pequea cantidad de Ca2+ a travs de la membrana plasmtica. Entre las respuestas, el [Ca2+] elevado puede activar o inhibir varias enzimas y sistemas de transporte, provocar fusin de la membrana o alteraciones en el citoesqueleto, o funciones contrctiles. El calcio no acta sobre estos diferentes efectores en su estado inico libre, sino que se enlaza a algunas de las escasas protenas enlazadas a calcio, que a su vez despiertan la respuesta. La ms ampliamente difundida de estas protenas es la calmoduna, que contiene cuatro sitios para enlazar calcio. El ion calcio es un segundo mensajero particularmente importante en clulas vegetales, donde es mediador de la respuesta a varios estmulos, incluyendo cambios en la luz, presin, gravedad y concentracin de hormonas vegetales, como el cido abscsico (p. 641).
667
Muchos estmulos extracelulares inician una respuesta celular porque se enlazan al dominio extracelular de un receptor de tirosincinasa (RTK), que inicia la actividad de tirosincinasa de la protena localizada en la superficie interna de la membrana plasmtica. La insulina inicia muchas de sus acciones sobre clulas receptoras mediante interaccin con el receptor de insulina, que es un RTK. La cinasa activada aade grupos fosfato a residuos de tirosna localizadas en el receptor y en sustratos selectivos (SRI). Los SRI fosforilados entonces pueden enlazarse y activar a varios efectores por delante de la va. Los residuos de tirosina fosforilados en un SRI sirven como "atracaderos" para protenas que poseen dominios SH2, las cuales se activan al enlazarse al SRI. Puesto que algunas protenas diferentes que contienen dominios SH2 pueden enlazarse a SRI fosforilados, se pueden activar varias vas separadas para transmisin de seales. En tanto una va pueda estimular la sntesis de DNA y la divisin de la clula, otra quiz estimule el movimiento de los transportadores de glucosa hacia la membrana celular, y otra ms todava pueda activar factores de transcripcin que inicien la expresin de un grupo de genes especficos para insulina (p. 646). Diversos agentes extracelulares interactan con los RTK sobre la superficie de clulas efectoras especficas y regulan diversas funciones, incluyendo crecimiento y proliferacin celular, el curso de la diferenciacin celular, la captacin de partculas extraas y la supervivencia de la clula. Los ligandos estimuladores del crecimiento mejor estudiados, como FCDP, FCE y FCF, activan la va de transmisin de seales denominada cascada cPAM, que incluye una pequea protena monomrica enlazada a GTP llamada Ras. Igual que otras protenas G, Ras oscila entre una forma inactiva enlazada a GDP y una forma activa enlazada a GTP. En su forma activa, Ras estimula efectores situados hacia adelante en la va de emisin de seales. Igual que otras protenas G, Ras tiene una actividad GTPasa intrnseca que hidroliza al GTP enlazado para formar GDP enlazado, modificando a s misma su estado para desactivarse. Cuando un ligando se enlaza a RTK, la autofosforilacin del dominio citoplsmico del receptor conduce al reclutamiento de Ras en la superficie interna de la membrana y al intercambio de GDP enlazado por un GTP, activando as la protena G. El Ras activado tiene mayor afinidad por otra protena denominada Raf, reclutada en la membrana plasmtica donde se convierte en una proteincinasa activa que inicia una cadena ordenada de reacciones de fosforilacin, delineadas en la figura 15-27. Los efectores finales de la cascada cPAM son los factores de transcripcin que estimulan la expresin de genes cuyos productos desempean un papel clave en la activacin del ciclo celular que conduce al inicio de
la sntesis de DNA y divisin de la clula. La cascada cPAM tambin estimula la sntesis de protenas liberando la inhibicin ejercida por una protena citoplsmica llamada PHAS-1 que se enlaza a uno de los factores clave de inicio (eFI4E). La cascada cPAM se observa en todos los eucariotes, desde levaduras hasta mamferos, aunque ha sido adaptada por la evolucin para despertar muchas respuestas diferentes en distintos tipos de clulas (p. 648). Diferentes sistemas para emisin de seales a menudo se interconectan de modo que las seales de varios ligandos no relacionados puedan convergir para activar un ef ector comn, como Ras; las seales del mismo ligando pueden divergir para activar a varios efectores, y se pueden pasar seales hacia atrs y hacia adelante entre distintas vas (interferencia). La convergencia entre vas para emisin de seales se ilustra por el enlace de FCE, FCDP e insulina, todos los cuales activan Ras y la cascada cPAM. La divergencia tambin se ilustra con estos mismos ligandos, los cuales despus de enlazarse a sus respectivos RTK pueden activar varias vas adems de la cascada de proteincinasa activada por mitgeno. Las vas estimuladas por AMPc y Ca2+ participan en la interferencia ejemplificada por la capacidad de los iones calcio para activar adenilciclasa y por la proteincinasa dependiente de AMPc (PKA) para fosforilar canales del ion Ca2+ (p. 651), El xido ntrico (NO) acta como mensajero intercelular capaz de difundir directamente a travs de la membrana plasmtica de la clula efectora. Entre las actividades estimuladas por NO se incluyen la fagocitosis por macrfagos, relajacin de las clulas de msculo liso que reviste los vasos sanguneos, y la contraccin peristltica del msculo liso del intestino. El NO se produce por accin de la enzima sintasa de xido ntrico, que usa arginina como sustrato. NO acta activando la guanilil ciclasa para producir el segundo mensajero GMPc (p. 656). Las vas para emisin de seales pueden terminar en apoptosis: muerte programada de la clula. Ejemplos de apoptosis incluyen la muerte del exceso de clulas nerviosas, muerte de tejido embrionario no deseado, muerte de linfocitos T capaces de reaccionar contra los propios tejidos del cuerpo y la muerte de clulas potencialmente cancerosas. La muerte por apoptosis se caracteriza por compactacin total de la clula y su ncleo y la diseccin ordenada de la cromatina por endonucleasas especiales. AI parecer, la apoptosis es mediada principalmente por la liberacin de Ca2+ y la activacin de ciertas proteincinasas, y requiere la activacin de un grupo especfico de genes (p. 658).
PREGUNTAS DE REPASO
1. Describir, en trminos generales, los pasos que ocurren durante la emisin de seales celulares desde la secrecin de un factor de crecimiento u hormona por un tejido hasta la respuesta por una clula efectora. 2. Qu se entiende con el trmino transducdn de seal y por qu se utiliza? 3. En qu se parece una va para emisin de seales, como la cascada cPAM, a un sistema de transporte de electrones? En qu es diferente? 4. En la figura 15-2, el ltimo elemento de la va es un factor de transcripcin. Describir los pasos de una va en la cual sea fosforilado un factor de transcripcin.
668
5. Cmo es posible que el mismo primer mensajero, como la epinefrina, pueda inducir respuestas diferentes en distintas clulas efectoras? Que el mismo segundo mensajero, como AMPc, pueda tambin evocar respuestas diferentes en distinas clulas efectoras? Que la misma respuesta, como la desintegracin de glucgeno, se pueda iniciar por diferentes estmulos? 6. Describir los pasos que conducen desde la sntesis del AMPc en la superficie interna de la membrana plasmtica de una celdilla heptica hasta la liberacin de glucosa en el torrente sanguneo. Cmo se puede controlar este proceso mediante inhibidores enzimticos, como el inhibidor-1? Mediante proteinfosfatasa? Mediante AMPc fosfodiesterasa? 7. Qu se entiende por el trmino amplificacin en relacin con la transduccin de seales? De qu manera el uso de una reaccin en cascada produce una amplificacin de la seal? Cmo incrementa las posibilidades de regulacin metablica? 8. Describir los pasos que ocurren entre el enlace de un Hgando, como glucagon, a un receptor de siete hlices y la activacin de un efector, corno a adeniilciclasa. De qu manera se atena normalmente la respuesta? 9. Qu determina si un estmulo que acta a travs de una protena G heterotrimrica ser estimulador o inhibidor para un efector?
10. Mencione dos estmulos extracelulares que conduzcan a la formacin de IPs. Cul es el mecanismo de formacin de este segundo mensajero? Cul es la relacin entre la formacin de IP3 y la elevacin de [Ca2+] intracelular? 11. Describir la relacin entre fosfatidilinositol, diacilglicerol, iones calcio y proteincinasa C. De qu manera interfieren los esteres de forbol con las vas para emisin de seales en las cuales participa diacilglicerol? 12. Describir el papel del calcio en la mediacin del dimetro de los estomas por las clulas guardianes. 13. Describir los pasos entre el enlace y una molcula de insulina en la superficie de una clula especfica y la activacin del efector PI(3)K. En qu difiere la accin de la insulina de los otros ligandos que actan por medio de un receptor de tirosincinasa? 14. Cul es el papel de Ras en las vas para transduccin de seales? De qu manera promueve la divergencia y la convergencia en estas vas? 15. Cmo altera la cascada cPAM la actividad de transcripcin y de traduccin en una clula? 16. Describir los pasos en la va para emisin de seales mediante la cual el xido ntrico media la dilatacin de los vasos sanguneos.
PREGUNTAS ANALTICAS
1. Hicimos notar que el terna de la emisin de seales celulares se coloc casi al fin del libro porque est ntimamente vinculado con muchos temas diferentes en biologa celular. Ahora que usted ha ledo el captulo, estara de acuerdo o en desacuerdo con esta afirmacin? Apoye sus conclusiones con ejemplos. 2. Supongamos que la va de emisin de seales de la figura 15-2 conduce a la activacin de un gen que inhibe una cinasa dependiente de ciclina. Cmo afectara una mutacin debilitante en la fosfatasa-2 al crecimiento de la clula? Cmo afectara una mutacin similar en la proteincinasa-3 al crecimiento de la clula? 3. Cul sera el efecto sobre la funcin heptica de una mutacin en un gen que codifica AMPc fosfodiesterasa? De una mutacin en un gen que codifica un receptor para glucagon? De una mutacin en un gen que codifica fosforilasa cinasa? De una mutacin que altere el sitio activo de la subunidad GTPasa de una Gnl 4. Ca2+, I?3 y AMPc son segundos mensajeros muy diferentes. En qu se parecen sus mecanismos de accin? En qu son diferentes? 5. En la reaccin en cascada ilustrada en la figura 15-27, qu pasos conducen a la amplificacin y cules no? 6. Supongamos que la epinefrina y la norepinefrina pueden iniciar una respuesta similar en una clula efectora particular. Cmo se podra demostrar que los dos compuestos actan enlazndose a! mismo receptor en la superficie de la clula? 7. Uno de los experimentos claves para demostrar que las uniones de abertura (pg. 215} permiten el paso de molculas pequeas se llev a cabo permitiendo que las clulas de msculo cardiaco (que responden a la norepinefrina contrayndose) formen uniones de abertura con clulas de la granulosa ovrica (que responden a la FSH al ser sometidas a varios cambios metablicos). A continuacin los investigadores aadieron FSH a la mezcla del cultivo celular. Qu resultados sera de esperar y cmo apoyan el papel de las uniones de abertura en la transmisin de seales entre las clulas? 8. Gomo afectara un anlogo de GTP no hidrolizable a los sucesos de emisin de seales que tienen lugar durante la estimulacin de una clula heptica con glucngon? Cu sera el efecto del mismo anlogo sobre la omisin de seales de una clula epitelial estimulada por el factor de crecimiento epidrmico, FCE? Cmo se compararan los efectos de la toxina del clera sobre estas mismas clulas? 9. Se esperara que la osfatidiicolina pudiera servir como precursor para un segundo mensajero que desencadena la seccin de una hormona en un tipo de clula endocrina cultivada que usted estaba estudiando. Adems, se sospechara que el segundo mensajero liberado por la membrana plasmtica en respuesta a un estmulo fuera fosfato de colina. Qu tipos de experimentos podran efectuarse para verificar su hiptesis? 10. La figura 15-16 muestra los cambios localizados en Ca2+ dentro de un macrfago durante la fagocitosis. Los iones
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente de calcio son agentes pequeos rpidamente difusibles. Cmo una clula puede mantener concentraciones diferentes de este ion libre en diferentes regiones de su citoplasma? Qu sospechara usted que ocurriera si se inyecta un pequeo volumen de solucin de cloruro de calcio en una clula inyectada previamente con una sonda de calcio fluorescente? 11. Formular una hiptesis para explicar de qu manera el contacto de un espermatozoide fertilizante sobre 3a superficie exterior de un vulo en un sitio determinado puede provocar una onda de liberacin de Ca2+ que se propaga a travs de todo el vulo, segn se muestra en la figura 15-18. 12. Puesto que la calmodulina puede activar muchos efectores diferentes (p. ej., proteincinasas, fosfodiesterasas, protenas transportadoras de calcio), una molcula de calmodulina debe tener muchos sitios de enlace sobre su superficie. Estara usted de acuerdo con esta afirmacin? Por qu s
669
o por qu no?
13. La diabetes es una enfermedad que puede ser resultado de varios efectos, todos los cuales implican la funcin de la insulina. Describa tres diferentes anomalas moleculares en una clula heptica que podran causar a diversos pacientes un cuadro clnico similar, incluyendo, por ejemplo, concentracin elevada de glucosa en sangre y orina. 14. Esperara usted que una respuesta celular a FCE fuese ms sensible a la fluidez de la membrana plasmtica que su respuesta a insulina? Por qu si o por qu no? 15. Esperara usted que una mutacin en Ras actuara de manera dominante o recesiva como causa de cncer? Por qu? (Una mutacin dominante muestra su efecto cuando slo uno de los alelos homlogos presenta la mutacin, en tanto que una mutacin recesiva requiere que ambos alelos del gen presenten la mutacin.) 16. Especular acerca de un mecanismo mediante el cual la apoptosis pueda desempear un papel crucial para combatir el desarrollo del cncer, tema analizado en el siguiente captulo.
BIBLIOGRAFA
Respuestas mediadas por protena G heterotrimFica Bourne, H.R. 1992. The target sets the tempo. Nature 358:541-543. Clapham, D.E. y Neer, E.J. 1993. New roles for G-protein/Jy-dimers in transmernbrane signaling. Nature 365:403-406. Cohn, P. 1988. Protein phosphorylation and hormone action. Proc. Roy. Acad. Sel. Loa. 8234:115-144. Cooper, D.M.F. y cois. 1995. Adenylyl cyclases and the interaction between calcium and cAMP signaling. Nature 374:421-434. Dohlman, H.G. y cois. 1991. Model systems for the study of seventransmembrane-segment receptors. Ann. Rev. Biochem. 60:653-688. Goody, R.S. 1994. How G proteins turn off. Nature 372:220-221. Lefkowitz, R.J. 1992. The subunit story thickens. Nature 358:372. Neer, E.J. 1995. Heterotrimeric G proteins: Organizers of transmernbrane signis. Celi 80:249-257. Stradcr, C.D. y cois. 1994. Structure and function of G protein-coupled receptors. Aun. Rev. Biochem. 63:101-132. Tang, W.-J. y Gilroy, A.G. 1992. Adenylyl cyclases. Cell 70:859-872. La perspectiva humana Clapham, D.E. 1993. Mutations in G protein-linked receptors: Novel insights on disease. Cell 75:1237-1239. Clapham, D.E. 1994. Why testicles are cool. Nature 371:109-110. Kahn, C.R. 1995. Diabetes: Causes of insulinresistance. Nnfiirc373:384 385. Lekfowitz, R.J. 1993. Turned on to ill effect. Nature 365:603-604. Ninvak, R. 1994. Moving development research into the clinc. Science 266:567-568. Respuestas mediadas por RTK Blumcr, K.J. y Johnson, G.L. 1994. Dversity in function and regulation of MAP kinase pathways. Trcnds Biochem. Sci. 19:236-240. Boudewijn, M. y cois. 1995. Regulation of Ras-mediated signaling: More tkaj way to skin a cat. Trcnds Biochem. Sci. 20:18-22. Bourne, H.R. 19947-The importante of being GTP. Nature 369:611-612. Bourne, H.R. 1993. A turn-on and a surprise. Nature 366:628-629. Burgering, B.M.T. y Bos, J.L. 1995. Ras-mediated signaling: More than one way to skin a cat. Trcnds Biochem. Sci. 20:18-23. Chavrier, P. y cois. 1993. An immunologist's look at the Rho and Rab GTP-binding proteins. Immimol. Today 14:440-444. Cook, S. y McCormick, F. 1994. Ras blooms on sterile ground. Nature 369:361-362. Downward, J. 1992. Rae and Rho in time. Nature 359:273-274. Egan, S.E. y Weinberg, R.A. 1993. The pathway to signal achievement. Nature 365:781-783. Fantl, W.J. y cois. 1993. Signaling by receptor tyrosine kinases. Ann. Rev. Biochem. 62:453-481. Feig, L.A. y Schaffhausen, B. 1994. The hunt for Ras targets. Nature 370:508-509. Hall, A. 1994. A biochemcal function for Ras-at last. Science 264:14131414. Lienhard, G.E. 1994. Life without the IRS. Nature 372:128-129. Marshall, C.J. 1994. Hot lips and phosphorylation of protein kinases. Nature 367:686. * Marx, J. 1993. Two major signal pathways linked. Science 262:988-989. Marx, J. 1993. Forging a path to nucleus. Science 260:1588-1590. McCormick, F. 1994. The Holy Grail of Ras biology. Trcnds Cell Biol. 4:347-350. Montminy, M. 1993. Trying on a new pair of SH2s. Science 261:16941695. Myers, M.G. y cois. 1994. The IRS-1 signaling system. Trends Biochem. Sci. 19:289-293. O'Brien, C. 1994. Missing link in insulin's pathway to protein producn'on. Science 266:542-543. Pawson, T, 1995. Protein modules and signaling netvvorks. Nnttirc 373:573-580. Ruderman, j.V. 1993. MAP kinase and the activation of quoseent cells. din: Opin. Cell. Biol. 5:207-213. Schmidt, K. 1994. A puzzle: How similar signis yield different effects. Science 266:566-567.
670
CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente Gilroy, S. y Trewavas, A. 1994. A decade of plant signis. Bioess. 16:677682. Jones, A.M. 1994. Suppresing signis in plant cells. Science 263:183184. Diversos Bredt, D.S. y Snyder, S.H. 1994. nitric oxide: A physiologic messenger molecule. Ann. Rev. Biochem. 63:175-195. Casey, PJ. y cois. 1995. Signal transduction. Science 268:221-255. Feramisco, J.R. y Watterson, D.M. eds. 1993. Cell regulation. Curr. Opin. Cell Biol. 5:239-291. Hughes, D.A. 1994. Histidine kinases hog the Hmelight. Nature369:187188. Juliano, R.L. y Haskell, S. 1993. Signal transduction from the extracellular matrix. /. Cell Biol. 120:577-585. Krebs, E.G. y cois. 1994. Protein phosphorylation. Trenas Biochem. Sci. vol. 19, issue no. 11. Lee, S. y cois. 1993 Apoptosis and signal transduction: Clues to a molecular mechanism. Curr. Opin. Cell Biol. 5:286-291. Lowenstein, CJ. y Snyder, S.H. 1992. Nitric oxide: A novel biologic messenger. Cell 70:705-707. Marshall, CJ. y cois. 1995. Reviews on signal transduction. Cell 80:179278. Nathan, C. y cois. Nitric oxide synthases: Roles, tolls, and controls. Cell 78:915-936. Schaller, M.D. y Parsons, J.T. 1993. Focal adhesin kinase: An integrinlinked protein tyrosine kinase. Trenas Cell Biol. 3:258-262. Snyder, S.H. 1994. Nitric oxide: More jobs for that molecule. Nature 372:504-505. Takai, Y. y cois. 1995. Rho as a regulator of the cycloskeleton. Trends Biochem. Sci. 20:227-231.
Mensajeros lpidos y respuestas mediadas por calcio Berridge, M.J. 1993. Inositol triphosphates and calcium signaling. Nature 361:315-325. Brown, A.M. y Birnbaumer, L. 1990. Inonic channels and their regulation by G protein subunits. Ann. Rev. Physiol. 52:197-213. Cooper, D.M.F. y cois. 1995. Adenylyl cyclases and the inreraction between calcium and cAMP signaling. Nature 374:421-424. Galione, A. 1993. Cyclic ADP-ribose: A new way to control calcium. Science 259:325-326. Galione, A. y White, A. 1994. Ca2+ relase induced by cycc ADPribose. Trenas Cell Biol. 4:431-436. Hurley, J.B. 1995. Signal transduction: Phosphopids in action. Nature 373:37-43. Irvine, R.F. 1992. Inosito! phosphates and Ca2+ entry: Toward a proliferation or a simplication. FASEB /. 6:3085-3091. Kiley, S.C. y Jaken, S. 1994. Protein kinase C. Trenas Cell Biol 4:223227. Liscovitch, M y Cantley, L.C. 1994. Lipid second messengers. Cell 77:329-334. Majerus, P.W. 1992. Inositol phosphatebiochemistry. Ann. Rev. Biochem. 61:225-250. McPherson, P.S. y Campbell, K.P. 1993. The ryanodine receptor/Ca2+ relase channel. /. Biol. Chem. 268:1376543768. Putney, J.W., Jr. 1993. Excitement about calcium signaling in inextitable cells. Science 262:676-678. Roberts, M.F. 1994. First thoughts on lipid second messengers. Trenas Cell Biol. 4:219-223. Torok, K. y Whitaker, M. 1994. Taking a long, hard look at calrnodium's warm embrace. Bioess. 16:221-224. Emisin de seales en plantas Assrnann, S.M. 1993. Signal transduction in guard cells. Ann. Rev. Cell Biol. 9:345-375.

Capitulo 15 BIOCEL

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Capitulo 15 BIOCEL

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

CAPITULO

Seales celulares: comunicacin entre clulas y su ambiente

Sitio de contacto clula-clula

15-1 Algunas caractersticas bsicas de los sistemas de seales celulares

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas \j su ambiente

Fosfato Proteincinasa 3 activa Fosfato

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

L5-2 Receptores acoplados a protena G y segundos mensajeros

CH2OH HJ--~t\ Fosforilsa

CH^OH H/ \ {GlucosaJn _ Glucgeno

Glucgeno sintetasa UDP-glucosa (Glucosa)n -

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

0 0 0 ""^N II II II "OPOPOPOCH-j I I I 0~0~0

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente Hormona

AMPc Forma inactiva del inhibidor-1

Forma activa del inhibidor-1

Epinefrina Epinefrina Epinefrina, ACTH y glucagon Vasopresina (ADH)

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

Membrana plasmtica (transporte)

Microtbulos (ensamblado/ ^ desensamblado)

endoplsmico (sntesis de Cinasa\)

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre as clulas y su ambiente -Ligando

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre ias clulas y su ambiente

Trastornos relacionados con receptores acoplados a protena G

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

CUADRO PH 15-1. Enfermedades humanas vinculadas con la va de la protena G

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre as clulas y su ambiente

Canal Ca+ controlado por voltaje

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas \j su ambiente

CAPITULO 15 Seaks celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

Cierre del poro del estoma

hacia afuera de K+ (abierto)

15-3 Receptor de tirosincinasas (RTK): un segundo tipo principal de sistemas de seales

Mecanismo de accin de la insulina! seales por un RTK

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

Activacin n del receptor W

15-4 Convergencia, divergencia e interferencia entre diferentes sistemas de seales

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre as clulas y su ambiente

Factores de crecimiento, por ejemplo: FCE, FCDP

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

Ejemplos de vas convergentes para transmisin de seales

Receptores unidos a protena G

Receptores unidos a tirosincinasa

FCDP, FCE, etc.

Ejemplos de vas divergentes para transmisin de seales

Interferencia entre las vas para transmisin de seales

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

15-5 Otros sistemas de seales

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

Receptor Factor de de FCE crecimiento Receptorx Epinefrina I

Sintasa de xido ntrico

'Clulas de msculo liso

Seales originadas por contactos en la superficie celular

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

Papel de las fos alagas en la transmisin de seales celulares

Vas que conducen a la muerte celular

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

CAPITULO 15 Seales celulares: comunicacin entre las clulas y su ambiente

Sistemas para transmisin de seales en plantas