Seminario 6

Papilomavirus y Poxvirus
Laura Alba Montero Sergio Astudillo Caldern Paula Blanco

ndice:

1. Papilomavirus: y Introduccin: y Estructura viral: y Ciclo biolgico: o Infeccin. o Transcripcin de genes tempranos. o Transcripcin de genes tardos. y Enfermedades: y Vacunas:

2. Poxvirus: y Introduccin: y Estructura viral: y Ciclo biolgico: o Infeccin. o Transcripcin de genes tempranos. o Replicacin. o Transcripcin de genes intermedios. o Transcripcin de genes tardos. o Morfogenesis. y Enfermedades: y Vacunas:

3. Bibliografa.

Papilomavirus:
Introduccin:
Los papilomavirus son virus con un genoma de DNA de doble hlice circular, pequeo tamao y con una capsula icosadrica que carece de envuelta. Algunos genes de esta familia de virus tienen la capacidad de inmortalizar o transformar clulas, producir tumores en determinados huspedes en algunas especies y algunos serotipos estn claramente asociados con cncer humano. Las especies que pertenecen a la familia de Papillomaviridae estn bien distribuidas en la naturaleza, aunque han sido aisladas en vertebrados superiores. Producen lesiones proliferativas muy diversas y comunes en epitelio estratificado, piel y con carcter benigno, como las verrugas y papilomas, aunque en ciertas ocasiones pueden derivar a procesos hiperplasicos y carcinomas, en los que se da un crecimiento celular descontrolado y esto puede derivar en cncer. Los papilomas son muy especficos de cada especie y se estudio se ha visto muy dificultado por la imposibilidad de cultivarlos en lneas celulares establecidas. En humanos se han aislado cien tipos de HPV, que se clasifican por homologa de su secuencia de nucletidos y estn asociados en cada caso a ciertos tipos de lesiones epiteliales.

Estructura viral:
Son virus de DNA bicatenario, pequeos, desnudos y con una cpside icosadrica. Las partculas tienen un dimetro de 52-55 nm y contienen el DNA bicatenario de forma circular de aprox. 8 Kpb, empaquetado con diversas histonas de la clula husped. El genoma est constituido por 8 genes y una regin reguladora no codificante LCR, la cual contiene sitios de unin para factores proteicos y hormonales del hospedador necesarios para el que virus pueda hacer su replicacin. Su cpside esta formada por 72 capsmeros constituidos por subunidades de protena ensambladas en los vrtices pentamricos, las protenas son L1 en un 95% y la L2 en un 5%. El genoma se transcribe desde una sola hebra que acta como molde, de la que se transcriben unos diez genes clasificados en tempranos y tardos segn el momento de expresin en el ciclo vital del virus. La temprana se
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expresa en infecciones abortivas y en transformacin, y la regin tarda se expresa en infecciones productos. Presentan un nico origen de replicacin. Las HPV infectan las clulas epiteliales basales estratificadas. No lo hacen en la dermis porque estas clulas no son metablicamente activas.

Ciclo biolgico:
Se trata de virus de desarrollo nuclear, es decir, que el ciclo viral se realiza en el nucleo. Presenta un claro tropismo por el epitelio escamoso estratificado, ya que la expresin de ciertos productos necesarios para su replicacin esta limitada a clulas epiteliales terminalmente diferenciadas. La infeccin se inicia por microlesiones de clulas proliferativas de la capa basal, a las que acceden los viriones procedentes de otras lesiones cutneas donde hay muchas partculas virales. Para que pueda entrar tiene que interaccionar con una protena de membrana de la clula hospedadora, la a6-Integrina. Cuando el virus infeccioso entra en el nucleo de las clulas basales se inicia la replicacin del genoma, (aprox. 50-100 copias/clula) hasta alcanzar un nivel de acumulacin de las molculas moderado y la expresin de algunos genes tempranos (E1, E2, E3, E4, E5 y E6) que contribuyen a la replicacin y al mantenimiento del estado episomal (circular) del genoma en las clulas que se dividen. Los genes que codifican para protenas se encuentran en el DNA plasmdico; el gen BPV-1 codifica para las protenas E1 y E2, que han demostrado estudios que interaccionan entre ellas. Adems hay genes que codifican para marcos de lectura abiertos OFRs que estn implicados en la replicacin. Cuando se produce una mutacin en E1 se produce un fallo en la replicacin, ya que se produce una fosforilacin en el Nterminal y se convierte en una protena de corta vida. La protena E2 ha sido estudiada para demostrar la regulacin de la transcripcin viral, tiene larga duracin y en la transcripcin activa el transactivador de varios promotores oficiales a travs de los elementos de E2, con una respuesta potenciadora. Cuando las clulas migran hacia capas ms externas de la epidermis y se diferencian, se induce una replicacin productiva del virus que conlleva la acumulacin de miles de copias de genoma viral por clula en el estrato granuloso. En el estrato granuloso se produce la transcripcin de otros genes tempranos por accin de factores inducidos con la diferenciacin; como por ejemplo el factor Epo c-1/skn-1 puede activar el promotor E6/E7 por unin directa. Los genes tempranos estimulan la tasa de proliferacin de las clulas suprabasales, sin detectar una expresin importante de las protenas estructurales.
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La transcripcin tarda se induce en clulas mas distales de la capa granulosa, que conlleva a la acumulacin de protenas L1 y L2 y al ensamblaje de genomas en viriones maduros, que son liberados al exterior con las clulas muertas del estrato corneo. Hay dos mecanismos que regulan la transcripcin tarda:

y Una remodelacin de la estructura del genoma viral alrededor del promotor tardo, que se opera con la diferenciacin celular, lo que hace accesible a la unin de factores de transcripcin y permiten un mejor reconocimiento de las polimerasas celulares. y A un nivel postranscripcional, la maduracin de los transcritos tardos a mensajeros aumenta con la diferenciacin terminal, debido al incremento de la expresin de distintos factores de procesamiento de RNA, que se unen y facilitan la interaccin de las secuencias donadoras y aceptoras del procesamiento.

La liberacin de los viriones en la capa distal del epitelio impide su acceso a la sangre, lo que explica la falta de respuesta inmune contra estos virus, por lo tanto la persistencia de infecciones y las lesiones que producen.

Enfermedades:
Las infecciones por el virus del papiloma humano (HPV) representan una de las enfermedades de transmisin sexual ms comunes. Los papilomavirus humanos cuentan con mas de 100 tipos virales que se clasifican en tipos de alto riesgo (HPV-16 y 18) y de bajo riesgo (HPV-6 y 11). Tanto la mujer como el hombre pueden ser portadores asintomticos y vehculos de infeccin. La diseminacin se produce, principalmente, por contactos sexuales y los rganos ms susceptibles de infeccin con potencial para iniciar una transformacin neoplsica son el cuello uterino y la lnea pectnea del canal anal. Estas infecciones han tomado inters por la asociacin etiolgica con el carcinoma de crvix y tumores del tracto anogenital masculino y femenino. Estudios epidemiolgicos detectan determinados tipos de oncognicos de alto riesgo en el 100% de los canceres cervicales. Las lesiones de alto riesgo incluyen neoplasias cervicales intraepiteliales o CIN II (diplasia moderada) y CIN III (displasia grave y carcinoma in situ). Las lesiones de bajo riesgo son cambios citolgicos o histolgicos caractersticos de la infeccin de HPV y la CIN I (displasia leve).

Al iniciar la actividad sexual la mujer puede ser contagiada por el virus de alto riesgo, que dar lugar a una infeccin transitoria no detectndose hasta los 6-8 meses. De forma ocasional la infeccin desarrollar una lesin CIN visible al microscopio. Cuando el virus no es eliminado y persiste la infeccin, la lesin precursora se mantiene y cierto nmero de ellas se convierten en CIN III, que dar un cncer invasor. Los HPV de alto riesgo ejercen su actividad oncognica en gran parte tras ingresarse en el genoma celular. El mecanismo mejor conocido de induccin de neoplasia se produce a partir de la interaccin de las protenas virales E6 y E7 con p53 y Rb (reguladoras del ciclo celular), en la transicin G1-S, degradndolas o alterndolas funcionalmente, permitiendo al virus en el comienzo de su ciclo vital perturbar el patrn de expresin de numerosos factores. Esta interaccin impide la correcta reparacin del DNA, una inestabilidad genmica y aumenta la probabilidad de desarrollar mutaciones especficas, esenciales para la progresin del cncer invasor. Para la persistencia y progresin de la carcinognesis cervical son necesarios otros cofactores, como deficiencias inmunes adquiridas o congnitas, factores hormonales endgenos o exgenos, otras infecciones de transmisin sexual, consumo de tabaco y algunos ingredientes de la dieta.

Vacunas:
Los estudios de las vacunas preliminares comenzaron en la dcada de 1990. Diane Harper y col. Efectuaron un estudio de 3 aos de la eficacia e inmunogenicidad de la vacuna en 1113 mujeres estadounidenses y brasileas de 15-25 aos. Todas tenan 2-5 compaeros sexuales, comenzaron su actividad con 15-19 aos, la mitad eran fumadoras, eran seronegativas para HPV 16 y 18, negativas por PCR para el DNA de HPV-16 y 18, no tenan antecedentes de pruebas Pap anormales y nunca recibieron tratamientos para verrugas genitales o cncer de cuello uterino. Se inmuniz a las mujeres con un placebo o con una vacuna bivalente que contena partculas virales semejantes al HPV (VLP) en un cronograma de 0.1-6 meses, estas no causan infeccin. Las mujeres a los 18 y 27 meses se tenan que hacer una citologa Pap posvacunacion. Las muestras cervicales se analizaban por PCR para la deteccin del DNA del HVP y se extraan sangre para evaluar la seroconversin. Las mujeres registraban sus sntomas. Los investigadores hallaron que la vacuna bivalente era 100% efectiva contra las infecciones persistentes por HPV-16 y 18. Fue un 91.8% efectiva contra las anormalidades en la citologa Pap y 100% efectiva contra el desarrollo de lesiones.

El desarrollo de vacunas profilcticas, teraputicas o combinadas es una nueva opcin para la prevencin o tratamiento de las infecciones por VPH. La Administracin de Alimentos y Drogas de los EEUU (Food and Drug Administration FDA) ha aprobado dos vacunas para prevenir la infeccin por VPH: Gardasil y Cervarix. Ambas son muy efectivas en la prevencin de infecciones de VPH-16 y 18 de alto riesgo que causan el 70% de los canceres de cuello uterino y de ano. Gardasil impide tambin la infeccin de los tipos 6 y 11 que causan el 90% de las verrugas genitales. Las vacunas contra el VPH funcionan como otras inmunizaciones que protegen contra infecciones virales. Los investigadores supusieron que los componentes de superficie nicos a los VPH podran crear una reaccin de anticuerpos capaz de proteger al cuerpo contra la infeccin y que estos se podran usar para formar parte de la vacuna. Los componentes de superficie de VPH pueden actuar entre si para formar partculas virales semejantes a virus (virus-like particles, VLP) que no son infecciosas porque no tienen DNA. Sin embargo, estas pueden pegarse a clulas y estimular el sistema inmune para que produzca anticuerpos que puedan impedir que papilomavirus completos infecten clulas en encuentros futuros. Las vacunas contra VPH pueden ayudar a impedir la infeccin futura por VPH, no ayudan a eliminar las infecciones ya existentes.

Poxvirus:
Introduccin:
Los poxvirus constituyen la familia de virus ms extensa. Tiene una partcula viral tan completa que contiene todas las enzimas necesarias para replicarse enteramente en el
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citoplasma. Han causado enfermedades infecciosas como la viruela, que se trata de una enfermedad que mat aproximadamente a 500 millones de personas en el siglo XX. Sin embargo, la capacidad de los poxvirus para inducir respuesta inmune protectora permiti hacer una campaa de vacunacin que culmin en 1980 con la declaracin por la OMS de la erradicacin de la viruela en nuestro planeta. Distintos miembros de la familia se usan en la actualidad como vacunas seguras contra un amplio espectro de enfermedades humanas y animales. Los poxvirus es la familia ms extensa de virus animales con DNA, y se encuentran distribuidos por toda la naturaleza. Fueron los primeros en observarse al microscopio. Toda la maquinaria enzimtica necesaria para la transcripcin se encuentra en la partcula viral. Esta familia de virus codifica una serie de genes cuya funcin es evadir la respuesta inmune frente a la infeccin.

Estructura viral:

Las partculas virales de poxvirus presentan el mayor tamao conocido de virus animales, entre 270-350 nm, y tienen forma de ladrillo. Existen dos formas infectivas, llamadas virus intracelular maduro (IMV) y virus extracelular con envuelta (EEV), ambas se diferencian en el nmero de membranas que adquieren del husped. El nucleo esta rodeado por dos capas, la ms externa con espculas agrupadas de forma hexagonal, y la ms interna que coexiste con una membrana. El DNA es lineal bicatenario con 130000 a 300000 nucletidos, con los extremos sellados con 120-230 kpb, por lo que en condiciones desnaturalizantes formara un circulo, y se encuentra enrollado en el core en contacto con la cavidad interna de este. Las dos cadenas del DNA tienen en los extremos una secuencia repetida con orientacin opuesta formando telomeros, es donde se encuentran la mayor parte de los genes esenciales para la replicacin viral y los de la defensa viral. En las regiones internas se encuentran los genes que codifican para protenas estructurales. La forma infectiva EEV se forma a partir de IMV por la adquisicin de la doble membrana procedente del Golgi; en el proceso de salida de la clula, el virus pierde por

fusin con la membrana plasmtica una de sus membranas, por lo que tiene una membrana externa ms que el IMV. La partcula viral tambin tiene unos cuerpos laterales en los que hay varias enzimas esenciales para la replicacin viral. Estos virus son sensibles a cromforos y se activan a pH 3.0, resisten a una temperatura de 100C durante 5 minutos. Conservan su virulencia por ms de un ao en costras secas y se conservan a bajas temperaturas desecndolo o con glicerol. Son sensibles a la radiacin UV.

Ciclo biolgico:
El proceso infectivo se inicia con la unin del virion con la membrana. En la interaccin del IMV con la membrana celular intervienen al menos dos protenas: una es la p32, que se localiza en la parte externa de la membrana del IMV, que se une a los residuos de crontroitin-sulfato presentes en la membrana celular, lo que permite la interaccin virus-clula. La otra protena es la p14 que se ancla a la membrana del IMV a travs de la interaccin de la protena viral p21 que tiene varios dominios con distintas propiedades: el amino tiene el dominio de fusin virusclula, y el sulfato heparina interviene en la formacin de trmeros. No se ha definido un receptor celular especfico de poxvirus. Otros genes que intervienen son el A28L, H2R y A21L. Despus se libera el nucleoide viral en el citoplasma celular, que es donde se va a replicar. A los pocos minutos de la entrada del virus en la clula se produce la transcripcin de los genes tempranos, que usan como molde el DNA del nucleoide y las enzimas transcripcionales asociadas al virion, como la RNA polimerasa, las enzimas del cap, la poli-(A)-polimerasa, el factor transcripcional VETF y otros. Se trata de un proceso muy rpido que ocurre en presencia de inhibidores de la sntesis de protenas, se inhibe por la accin de agentes que interaccionan con el DNA. Es un proceso que dura 1 o 2 horas. Los estudios transcripcionales han demostrado que hay una secuencia rica en A/T localizada inmediatamente antes del lugar de iniciacin de la transcripcin que acta
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como lugar de iniciacin, y en el extremo 3 del DNA, que termina con 20-50 nucletidos detrs de la secuencia TTTTTNT, acta como seal de terminacin.

Despus del proceso de liberacin del DNA del nucleoide se inicia la replicacin del DNA, localizada en el citoplasma. Para ello se usan enzimas producidas por la transcripcin temprana como la DNA polimerasa, timidina quinasa, ribonucletido reductosa y otras protenas virales. En la replicacin se da la formacin de concatmeros que posteriormente son procesados, mediante las protenas tardas, dando lugar a la molcula lineal de DNA. La replicacin comienza con un corte en una de las cadenas dejando un extremo libre 3 para iniciar la incorporacin de desoxirribonucleotidos. La molcula replicada se vuelve sobre si misma para copiar lo que queda del genoma. Despus con la transcripcin de los genes tardos se producen molculas lineales con los extremos sellados del DNA viral y con secuencias invertidas y complementarias. Este DNA se acumula en lugares discretos conocidos como factoras para luego dar la formacin de unas 10.000 partculas virales por clulas. Despus se da la transcripcin de genes intermedios, que se da despus de la replicacin y antes de que se expresen los genes tardos. Los genes intermedios codifican factores que son necesarios para la transcripcin de los tardos, uno de ellos es el VIFT-2. La transcripcin de los genes tardos, que se encuentran en la zona central del genoma, se inicia despus de la produccin de los genes intermedios y continua a lo largo del proceso infectivo. El iniciador es la TAAATG/A y la terminacin es la TTTTTNT. Los genes tardos codifican para protenas estructurales del virion, y para enzimas que tambin se incorporan en el virion y que son necesaria para la transcripcin de los genes tempranos. Despus se produce la morfognesis, que incluye una serie de etapas que van desde la formacin de agregados proteicos hasta la separacin de los mismos en partculas con
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distintos grados de maduracin. Las primeras estructuras que se observan al microscopio estn formados por agregados de protenas virales rodeados de elementos (tbulos) procedentes del ERGIC (compartimento intermedio del retculo endoplasmico-Golgi), formado por la factora. Hay protenas virales que se integran en el ERGIC y que son responsables del transporte de los tbulos de la factora, donde forman crestas con espculas. Estas crestas se liberan de la factora formando estructuras circulares con distintos grados de densidad llamadas partculas inmaduras (IV). El DNA se incorpora a estas partculas a travs de un poro. La incorporacin posterior de protenas virales y el procesamiento proteoltico de las protenas del nucleoide determinar la formacin del virus intracelular maduro (IMV). Algunos de estos IMV usan microtubulos para llegar al Golgi y adquirir una segunda membrana, dando lugar a un virus intracelular con envuelta (IEV). Este ltimo es transportado por microtubulos a la membrana plasmtica donde su membrana externa se fusiona con la membrana plasmtica y sale al exterior de la clula. La forma viral con envuelta que permanece unida a la membrana plasmtica por la cara externa se llama CEV (cell-associated enveloped virus), cuya liberacin da lugar a la segunda forma infectiva llamada virus extracelular con envuelta (EEV). El EEV representa menos del 1% del total de la progenie viral producida en la infeccin cuya liberacin da lugar a la segunda forma infectiva llamada virus extracelular con envuelta (EEC). El EEV representa menos del 1% del total de la progenie viral producida por la infeccin, pero participa de forma muy activa en la diseminacin a larga distancia del virus, mientras que el IMV juega un papel ms importante en la transmisin del virus clula a clula.

Enfermedades:
La transmisin del poxvirus se produce por pequeas partculas o gotas liberadas por las secreciones salivares, nasales o de la mucosa nasofarngea de una persona infectada. Contienen el virus como resultado de la lisis celular y la liberacin de partculas virales que sern inhaladas por una persona susceptible. Tambin se puede transmitir por contacto con las lesiones de una persona infectada durante la fase de viremia, es decir, cuando hay partculas infectivas en la sangre. Dos especies de virus que causan la enfermedad en humanos son la variola, causante de la viruela, y el virus Molluscum contagiosum, causa la enfermedad cutnea, que pertenecen al genero Orthopoxvirus y Molluscipoxvirus. Los poxvirus tienen dos cepas que causan enfermedades muy diferentes: Variola major: da fiebre alta y exantema en mayor cantidad. Hay 4 tipos que son la comn (89% de los casos, mueren el 30%), la modificada (en personas vacunadas), la plana (6.7% de los casos, muere el 96%) y la hemorrgica (2.4% de los casos, mueren 96%). Variola menor: que da menos fiebre y erupcin.

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En el virus causante de la viruela la infeccin se inicia por el trato respiratorio a partir de partculas virales liberadas por individuos infectados o por contacto directo. Despus el virus comienza a replicarse sin causar sntomas aparentes. Cuando han pasado varios ciclos se produce a los 12-14 das la fase de viremia, que da fiebre y erupcin en la piel. Posteriormente se traslada el virus a otros rganos infectados (bazo, medula sea, ganglios linfticos y el hgado). A los 16 das se producen lesiones en la piel, pasando por los estadios mcula- ppula- vescula- pstula. La lesin ms caracterstica es en cara, tronco y extremidades. Una segunda viremia causa las lesiones adicionales en el husped, produciendo la muerte o recuperacin con secuelas; esta se asocia a la inmunidad prolongada. La severidad de los sntomas se atribuyen a las propiedades toxicas del virus, que se multiplican con rapidez y se acumulan en gran cantidad. Las lesiones adicionales pueden ser encefalitis, necrosis progresiva, eccema vacunal, encefalomielitis, encefalopata y miopericarditis. Se puede tratar con inmunoglobulinas. Molluscum contagiosum causa una enfermedad viral benigna que afecta a nios entre 2-5 aos, entre el 5 y 8%. Afecta tambien a adultos sexualmente activos y pacientes con infeccion por VIH. Esta enfermedad solo la padecen los humanos. Tras un periodo de incubacion de 2-8 semanas aparecen lesiones nodulares, indoloras y de forma umbilicada. Desaparece sin tratamiento al cabo de 2-12 meses. Actualmente el virus solo se estudia en el Centro Estatal de Investigacion sobre Virologia y Biotecnologia de una ciudad de Rusia.

Vacunas:
La viruela es la nica enfermedad que ha sido erradicada. Los trabajos realizados por Edward Jenner (s. XVIII) contribuyeron a realizar la vacuna. Jenner tom pstulas provocadas por la viruela vacuna (Cowpox virus), relacionada con la viruela humana, e inocul con ellas a personas sanas, provocando una infeccin similar. Las personas una vez recuperadas quedaban protegidas contra la viruela humana. El procedimiento fue denominado vacuna, que deriva de vacca, del latn. En el siglo XIX para erradicar la viruela se hacia la variolacion brazo a brazo, pero en 1898 se prohibi ya que se podan contagiar otras enfermedades como la sfilis, tuberculosis, hepatitis B La erradicacin mundial de la viruela se logr en 1979 gracias a la campaa de vacunacin masiva
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llevada a cabo por la OMS. La vacuna usada consiste en un virus de la vaccina, semejante al de la viruela. Tras la erradicacin, el almacenamiento del virus de la viruela se restringi a dos laboratorios de referencia de la OMS, uno en EEUU y el otro en Rusia, para conocer con mayor profundidad las causas genticas de la gran mortandad producida por la variola y desarrollar herramientas para controlar la infeccin en el caso de que reaparezca, por accidente o bioterrorismo. En la actualidad existen muy pocos antivirales contra el poxvirus, pero mediante el conocimiento de la biologa molecular de estos virus y su anlisis estructural se podrn disear compuestos con especificidad frente a protenas esenciales en la cascada de replicacin.

Bibliografa:
http://www.biologia.edu.ar/viruslocal/estructurayclasificacion.htm http://www.losmicrobios.com.ar/microbios/clasificaciones.cfm?CLASI=2 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S004268220500601X http://www.microbelibrary.org/index.php%3Foption%3Dcom_resource%26controller%3Darticl e http://www.nature.com/nrmicro/journal/v3/n3/fig_tab/nrmicro1099_F3.html http://animations.3d4medical.com/Small-pox-virus-animation_AN2329.html poxvirus) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1926367 Minireview. http://www.bmj.com/content/319/7224/1540.full http://www.micromadrid.org/pdf/tomo1_tema38.pdf http://scielo.isciii.es/scielo.php?pid=S1699-695X2009000100012&script=sci_arttext http://www.etcetera.com.mx/articulo.php?articulo=2493 http://www.cancer.gov/espanol/recursos/hojas-informativas/prevencion/vacuna-VPH L. Carrasco, J.M. Almendral del Ro. Virus Patgenos. Ed. Hlice. (video de

http://www.medigraphic.com/pdfs/adm/od-2005/od056c.pdf

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