Facultad de Ingeniera Industrial

Informe de Qumica Orgnica

*Cromatografa de compuestos orgnicos*
Integrantes:
Burgos del Rosario, Karina Ruth Higa Carrillo, Tereza Mineko Nonalaya Rivera, Jordan Joe Reupo Ojeda, Silvana Alessandra Viza Fernndez, Rosmely Katty 11170162 11170251 11170136 11170039 11170238

Grupo:
Viernes de 3 a 5 p.m.

Profesor:
Luis Miguel Flix Veliz

Viernes, 23 de septiembre del 2011

La Decana de Amrica

ndice
Introduccin Marco terico Desarrollo experimental / RESULTADOS Conclusiones Cuestionario Bibliografa 2 3 18 23 24 27

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Introduccin
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia y la fsica. Es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Las tcnicas cromatogrficas1 son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase mvil que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que arrastra a la muestra a travs de una fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido fijado en un slido. Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria. De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando. Despus de que los componentes hayan pasado por la fase estacionaria, separndose, pasan por un detector que genera una seal que puede depender de la concentracin y del tipo de compuesto. Diferencias sutiles en el coeficiente de particin de los compuestos da como resultado una retencin diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separacin efectiva en funcin de los tiempos de retencin de cada componente de la mezcla. La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen mutuamente:

Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas sntesis). Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad analtica). En este caso, las cantidades de material empleadas son pequeas.

Nuestros objetivos en esta prctica son:

1. Conocer los fundamentos de la cromatografa en capa fina. 2. Realizar una cromatografa en capa fina del cido acetil saliclico.

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I.

Marco Terico.

Cromatografa:
Cromatografa significa Escribir en Colores *del griego cromos (color) y grafo (escribir)]. Debe su nombre al bilogo ruso Mikhail Tswett primera persona que utiliz esta tcnica (1906) al separar una mezcla de pigmentos naturales. Utiliz una columna larga de vidrio, rellena de sulfato de calcio finamente dividido y con una llave en su extremo inferior. Comprob que al colocar una mezcla de pigmentos verdes de una planta en una columna que se eluye con ter de petrleo, aparecen unas bandas horizontales con diferentes colores que se corresponden con cada uno de los pigmentos de la mezcla y que indica que ha habido una separacin a lo largo de la columna Aproximacin a la tcnica de Tswett La separacin no tiene nada que ver con el color de los compuestos sino con la diferente afinidad de adsorcin de los pigmentos hacia el yeso. De esta forma los compuestos que se adsorben ms dbilmente avanzan por la columna de cromatografa con ms rapidez que los compuestos que se adsorben ms fuertemente. Aunque el color tiene poco que ver con la cromatografa moderna, su nombre ha persistido y se sigue utilizando para describir todas las tcnicas de separacin en las que intervienen una fase mvil y una fase estacionaria.

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DEFINICIN DE CROMATOGRAFA

Se entiende por cromatografa al conjunto de tcnicas analticas que se fundamentan en la separacin que se produce cuando una mezcla de compuestos es arrastrada por una fase mvil a lo largo de una fase estacionaria. La tcnica cromatografa de purificacin consiste en separar mezclas de compuestos en funcin de su diferente afinidad entre una fase estacionaria y una mvil. Todas las tcnicas cromatogrficas dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles, una de ellas llamada fase activa o fase mvil, que transporta las sustancias que se separan, y que progresa en relacin a otra fase llamada fase estacionaria

CLASIFICACIN DE LOS PROCESOS CROMATOGRFICOS

La fase mvil puede ser un lquido o un gas. La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido. Teniendo en cuenta la naturaleza de la fase estacionaria se establece la siguiente clasificacin.

CROMATOGRAFA DE ADSORCIN: la fase estacionaria es un slido sobre el que se adsorben

los componentes de la muestra. - Cromatografa Lquido Slido CLS (fase mvil lquido) - Cromatografa Gas Slido CGS (fase mvil gas) - Cromatografa en Capa Fina CCF (fase estacionaria slida en forma plana y la mvil lquida) Existen ciertas sustancias slidas, qumicamente inertes, que tienen la propiedad de adsorber o fijar dbilmente en su superficie a una gran cantidad de compuestos. La fortaleza con la que se adsorben las sustancias sobre un adsorbente dado vara de un compuesto a otro. Entre los adsorbentes ms usuales: slica Gel (xido de silicio), almina (xido de aluminio), celulosa, fluorosil (silicato de magnesio) y sulfato de calcio. La separacin se realiza por la diferente tendencia de adsorcin de los compuestos orgnicos por la fase estacionaria.

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La fase mvil desplaza y disuelve a los componentes de la mezcla segn sea su afinidad por la fase estacionaria es decir, los componentes ms polares estarn adsorbidos con ms fuerza y sern ms difciles de separar de la fase estacionaria que los componentes poco polares. Los menos polares no presentan una interaccin importante con la fase estacionaria (gel de slice) y no sern retenidos. En un proceso de adsorcion los componentes de la mezcla son adsorbidos por la fase estacionaria con diferente intensidad de tal forma que el proceso adsorcin desorcin hace que unos componentes avancen ms rpidamente que otros. La adsorcin es un proceso de superficie mientras que la absorcin es la penetracin de una sustancia en el seno de otra (al escribir el papel adsorbe tinta mientras que la esponja absorbe agua). En cualquier fenmeno de adsorcin influyen tres variables independientes: el adsorbente, el disolvente y las sustancias a cromatografiar. Por tanto, s una molcula tiene una gran afinidad pasar muy lentamente mientras que otro componente con menos afinidad lo har ms rpidamente. La regla general es elegir la polaridad del disolvente anloga a la de la muestra a emplear y en la mayora de los casos adsorbentes poderosos (activos) para sustancias no polares y adsorbentes con menos actividad para sustancias ms polares. En la tabla anterior se indica una relacin de adsorbentes y disolventes ordenados de menor a mayor polaridad, (actividad y poder eluyente respectivamente).

CROMATOGRAFA DE ADSORCIN EN COLUMNA

Cromatografa liquido slido que utiliza columnas huecas verticales de vidrio cerradas en su parte inferior con una llave que permite la regulacin del flujo de la fase mvil. Como fase estacionaria se emplean bsicamente dos adsorbentes, gel de slice y almina. La tcnica consiste en rellenar la columna con el adsorbente elegido que debe sedimentar sin que se produzcan canales o grietas. En la parte superior de la columna se coloca la mezcla a separar, llamada cabeza de la columna que se obtiene mezclando el adsorbente con la muestra con el eluyente (fase mvil) que va a ser utilizado en el proceso de separacin Se deja que el eluyente empiece a descender por la columna ya sea por gravedad o a presin (cromatografa flash). Se produce la adsorcin de los componentes con diferentes intensidades logrando que unos avancen ms que otros.

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En la parte inferior de la columna se recogen las diferentes fracciones cromatogrficas que se analizan y agrupan en funcin de sus caractersticas.

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

La tcnica de Cromatografa en Capa Fina CCF (TLC, sus siglas en ingls Thin Layer Cromatography) es una adaptacin especial de la cromatografa de adsorcin muy utilizada en Qumica Orgnica ya que entre otras cosas nos permite: - Determinar el grado de pureza de una muestra - Comparar muestras. - Hacer el seguimiento de una reaccin qumica - Controlar el contenido de las fracciones obtenidas por cromatografa en columna - Determinar las condiciones ms adecuadas para una cromatografa en columna. La fase estacionaria consiste en una fina capa delgada de gel de slice o almina adherida a un soporte de vidrio, aluminio o materiales plsticos con un grosor que puede oscilar entre 1 hasta 0,1 0,2 mm. Algunas placas vienen con indicadores fluorescentes. Para realizar la cromatografa se aplica la muestra disuelta en la parte inferior de la placa, y a 1 cm del borde de la misma, con la ayuda de un capilar. Las muestras se deben colocar entre 1 - 1,5 cm del extremo de la placa de tal forma que al ponerla en contacto con el disolvente que se encuentra en la cubeta no cubra la muestra. El cronograma se introduce verticalmente en un recipiente cerrado llamado cubeta de cromatografa o tanque de desarrollo que contiene en su fondo una pequea

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cantidad del eluyente que se vaya a usar (fase mvil) dejando que el disolvente ascienda por capilaridad.

CROMATOGRAFA DE REPARTO: la fase estacionaria es un lquido sostenido por un slido

inerte. - Cromatografa Lquido Lquido CLL (fase mvil un lquido) - Cromatografa Gas Lquido CGL (fase mvil un gas) - Cromatografa en papel (fase estacionaria es una capa de agua adsorbida sobre una hoja de papel) Tcnica donde la separacin selectiva de los componentes se produce por el diferente grado de solubilidad que estos puedan tener con las dos fases participantes. Es decir, como si se estuviese produciendo un elevado nmero de extracciones. Por ello, las fases tiene que ser inmiscibles entre si y el soluto sufre un equilibrio de particin entre ambas que queda definido por una constante K, llamada coeficiente de Reparto, cuyo valor depende para una fase estacionaria determinada y para una fase mvil dada, de la naturaleza del soluto a aislar, lo que origina las diferencias en la retencin y la consiguiente separacin. El soluto se reparte entre el lquido de la fase estacionaria y la ase mvil, por diferencia de solubilidad, hasta alcanzar el equilibrio. La tcnica cromatogrfica consiste en disponer de una columna de tal forma que su contenido sea capaz de establecer fuerzas de retencin hacia una sustancia, a la vez que un disolvente que pasa continuamente por esa columna sea capaz de establecer fuerzas de disolucin hacia ese soluto. Lgicamente, para que la fase estacionaria se mantenga dentro de la columna debe estar formando una delgada pelcula sobre un soporte inerte. En este tipo de cromatografa se debe controlar la temperatura y los volmenes de ambas fases (estacionaria y mvil) ya que estos parmetros alteran la solubilidad y por tanto el coeficiente de reparto.

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Las sustancias que forman parte de la muestra se adhieren a la fase estacionaria o son arrastradas con la fase mvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a u afinidad por la fase estacionaria. Cuando el eluyente ha ascendido hasta casi el borde superior de la placa, se saca, se seca y se observan las seales. Muchas veces las sustancias desarrolladas por este mtodo, al no ser coloreadas, no son visibles. Para hacerlas visibles se utiliza luz ultravioleta entre 240 270 nm. Para hacer visibles aquellas seales que no se detectan a la luz UV ni son coloreadas, se procede al revelado de la laca usando un

revelador destacando entre los ms usuales el Yodo y el leum [mezcla e cido sulfrico (4%) cido actico (80%) y agua (16%)] El revelado consiste en pulverizar el cromatograma con la especie reveladora y posterior

calentamiento en una estufa alrededor de 100 C, logrndose de esta manera la carbonizacin de los compuestos orgnicos. El cromatograma una vez revelado nos presenta mediante anchas el grado de pureza de la muestra o el nmero de compuestos presentes en ella.

CONCEPTO DE FACTOR DE RETENCIN - Rf Para determinar las posiciones relativas de las seales se utiliza el concepto de Rf o Factor de Retencin. El Rf es la relacin que existe entre el recorrido de una mancha, medido desde el origen hasta el centro de la misma, y el recorrido por el disolvente (fase mvil) medido desde el origen hasta el frente.

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Distancia recorrida por la seal de un compuesto Rf = -------------------------------------------Distancia recorrida por el frente del disolvente El Rf se expresa en valores que oscilan desde 0,01 hasta 0,99 y, tambin en porcentaje. Cuanto menos haya recorrido la sustancia en la fase estacionaria, menor ser el Rf de la misma. Los valores de Rf se pueden utilizar con fines comparativos para identificar sustancias al comparar con muestras autnticas de las mismas.

TLC PREPARATIVA La cromatografa en capa fina tambin se puede usar con fines cuantitativos para separar pequeas cantidades de un compuesto. Las separaciones preparativas se realizan en placas estndar de 20 x 20 cm (algunas veces en placas de 20 x 40 cm) ms gruesas y el volumen de la muestra tambin debe ser mayor (alrededor de 10 ml). La muestra se aplica en forma de banda lineal mediante una pipeta Pasteur o con un capilar. Para la TLC preparativa podemos utilizar todos los sistemas de disolventes que hemos descrito para la TLC analtica obteniendo los mismos resultados. Una vez realizada la cromatografa, las bandas de inters se ponen de manifiesto utilizando una tcnica no destructiva con el reactivo adecuado (luz UV o Yodo). La zona de la placa que contiene dicha banda es raspada y recuperada en un matraz y extrada con el disolvente adecuado. Finalmente el disolvente es evaporado para la recuperacin del soluto. Esta tcnica tiene la ventaja de que su tiempo de desarrollo es inferior al de una cromatografa en columna.

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CROMATOGRAFA EN PAPEL Es similar a la CCF, excepto en que como fase estacionaria se utiliza una capa de agua adsorbida sobre una hoja de papel (lquido retenido sobre un soporte slido inerte). El papel contiene retenido alrededor de un 20% de agua. El soporte general que se utiliza es papel Whatman nmero 1 y nmero 3 para separaciones analticas y Whatman 3MM para trabajos preparativos No es estrictamente una cromatografa de adsorcin sino una combinacin de adsorcin y reparto. El reparto se produce entre el agua que hidrata la celulosa de la fase estacionaria y la fase orgnica mvil.

La tcnica consiste en colocar el papel (fase estacionaria) en una cubeta de vidrio colgndolo de un soporte. La fase mvil, colocada en el fondo de la cubeta (1 1,5 cm), entra en contacto con el papel sobre el cual, a 1 cm de distancia hemos colocado las muestras que deben ser arrastradas y separadas. Este tipo de cromatografa, llamada ascendente, se debe realizar en unas condiciones estndar de saturacin previa de la fase estacionaria ya que el disolvente se puede evaporar del papel antes de que se produzca la separacin y no se consiga el efecto deseado. La tcnica de cromatografa en papel se utiliza preferentemente cuando se trata de separar compuestos polifuncionales o muy polares como aminocidos o azcares. La tcnica descendente es similar a la anterior y slo se diferencia en que el papel es introducido por su parte superior en una canaleta donde hay una pileta para el disolvente. Las muestras colocadas en la parte superior del papel, a 1 1,5 cm de la canaleta, sern arrastradas hacia abajo por el eluyente (fase mvil). Los resultados de ambas tcnicas son similares. En forma anloga a la TLC se pueden realizar cromatografas en papel tanto preparativa como bidimensional.

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CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA EFICIENCIA HPLC Tcnica muy utilizada para el anlisis de compuestos orgnicos pesados como pesticidas, aromticos polinucleares, frmacos, vitaminas, alimentos etc. Cromatografa de adsorcin conocida como HPLC (siglas en ingls High Performance Liquid Chromatography) o Cromatografa Lquida de Alta Presin o Resolucin. Es una variante de la cromatografa en columna donde la fase estacionaria est formado por partculas muy pequeas, en forma esfrica, que hace que el empaquetamiento de la columna sea muy compacto. La disminucin del tamao de los poros que forman la fase estacionaria hace que la cromatografa sea muy lenta prdida de carga, por lo que hay que instalar a la entrada de la columna un sistema de bombeo que tiene dos finalidades: I) Superar la resistencia del relleno II) Aportar un flujo de fase mvil que puede ser controlado a lo largo de toda la cromatografa En estas condiciones se consigue acortar el tiempo de anlisis de las columnas de gravedad. En la cromatografa lquida los componentes de una mezcla son llevados a travs de una fase estacionaria fijada dentro de una columna de cromatografa mediante el flujo de una fase mvil lquida. Las separaciones estn basadas en las diferentes velocidades de migracin que existen entre los componentes de la mezcla que dependen de su naturaleza y su interaccin con las fases. Una cromatografa por HPLC puede tener un poder de separacin miles de veces superior al de una columna simple. Las partculas de relleno suelen ser microesferas de slice, almina o resina cuyo dimetro oscila entre 3 25 m (micras). Las columnas de HPLC son de acero inoxidable, con un dimetro interno de 2 5 mm y una longitud variable de 10 30 cm dependiendo del dimetro de las micropartculas de relleno. El flujo a presin se aplica entre 1500 800 psi. En la cromatografa HPLC, como en cualquier tipo de cromatografa, se distinguen una fase estacionaria y una fase mvil. Como ambas compiten con las molculas del soluto sern de polaridades diferentes. Si la fase mvil la integran compuestos orgnicos poco polares, la fase estacionaria ser relativamente polar. La tcnica derivada de esta situacin se llama de fase normal por ser la modalidad ms usual de la HPLC. Si la fase mvil la forman lquidos acuosos o polares y la fase estacionaria es poco polar o apolar, la tcnica se llama de fase inversa (cada vez ms usada).

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HPLC en fase normal Fase mvil poco polar (hexano, tetracloruro de carbono, benceno, etc.) Fase estacionaria polar (generalmente slice) HPLC en fase inversa Fase mvil polar (agua, disoluciones amortiguadoras de pH, metanol, acetonitrilo, etc.) Fase estacionaria no polar: (habitualmente silica injertada con compuestos orgnicos que contienen desde 8 hasta 18 tomos de carbono). Esta tcnica requiere un equipo muy sofisticado que describimos a continuacin.

CMARA DEL DISOLVENTE Los componentes de la fase mvil para HPLC necesitan un estricto control de pureza fsica y qumica por ellos tienen que ser filtrados y muchas veces desgasificados. Es conveniente que en esta cmara (reservorio) existan desgasificadores (aplicacin de ultrasonidos) para eliminar los gases del disolvente pues producen burbujas en la columna que interfieren en los resultados. Se puede trabajar con un solo disolvente (elucin isocrtica) o se puede cambiar continuamente la composicin del disolvente (elucin por gradiente).

BOMBA DE ALTA PRESIN Es la encargada de introducir la fase mvil (eluyente) en la columna de cromatografa. Estas bombas deben aportar un flujo constante del disolvente entre 0,001 hasta 10 ml/minuto. Las elevadas presiones que generan las bombas (varios centenares de atmsferas) no constituyen un peligro de explosin ya que los lquidos no son muy compresibles. No obstante, muchos cromatgrafos presentan vlvulas de seguridad y purga por si se produce este proceso.

PRECOLUMNA El empleo de una columna previa (precolumna) a la columna analtica mejora la eficiencia de la separacin cromatogrfica. Su misin es eliminar contaminantes y partculas de polvo.

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CMARA DE INYECCIN DE LA MUESTRA - INYECTOR. Dispositivo por medio del cual se introduce la muestra en el sistema cromatogrfico. La inyeccin se realiza con una jeringa que se introduce en el inyector y descarga la muestra para su anlisis. La muestra no debe contener slidos para que no se atasque, si es necesario hay que proceder a su filtracin. La muestra debe ser disuelta en el mismo eluyente que se va a utilizar. El volumen a inyectar de muestra debe ser el menor posible para que los resultados sean ms ntidos.

COLUMNA ANALTICA Es el corazn del sistema cromatogrfico, en ella se produce la retencin de los diferentes compuestos que permite su separacin.

ESPACIO TRMICO - CALENTADOR. Su misin es controlar la temperatura del proceso que puede oscilar desde la ambiental hasta 150C. Manteniendo la temperatura constante se obtienen mejores resoluciones cromatogrficas.

DETECTOR. Dispositivo que colocado a la salida de la columna nos indica quien va en la fase mvil. Su misin es detectar los momentos de emersin de los componentes y proporcionar informacin cualitativa y cuantitativa de los mismos. La accin del detector se traduce en una seal, (normalmente de tipo elctrico) que posteriormente se amplifica y registra en un grfico llamado cromatograma. El cromatograma consta de una serie de picos que se emplean para identificar cualitativamente (posicin en el eje) y cuantitativamente (rea de los picos) a los componentes de la muestra, al compararlos con cromatogramas estndar. Se dividen en dos tipos:

Detector selectivo. Aquel que responde a una propiedad del soluto en disolucin. Ejemplo, el detector UV/Visible nos mide la absorcin de un producto a una determinada longitud de onda, el fluormetro que nos mide la fluorescencia, etc.

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El ms utilizado es el detector espectrofotomtrico UV/Vis por ser el ms sensible y estable a los cambios de flujo y temperatura (trabaja en el rango 190 650 nm). Es el ms utilizado porque muchos solutos absorben este tipo de radiacin y son bastantes sensibles a ella. El sistema ms simple emplea la emisin a 254 nm de una lmpara de mercurio y deteccin a una sola longitud de onda.

Detector universal. Aquel que responde cuando una propiedad de la fase mvil es modificada por la presencia de un soluto en ella. Ejemplo, el detector de ndice de efraccin (RI) nos mide el cambio en el ndice de refraccin entre el lquido contenido en el matraz y la referencia. Los ms utilizados son el detector de ndice de refraccin y el de conductividad.

COLECTOR DE FRACCIONES En este mdulo se van recogiendo las fracciones a medida que van llegando al detector. Esta recogida nos separa los componentes de idnticas propiedades entre s, salvo que aparezcan picos solapados. A continuacin se toman las muestras, se comprueba su pureza mediante una cromatografa en capa fina y se efectan los ensayos de identificacin con las tcnicas disponibles, IR, RMN, Fluorescencia, Masas, etc. La mayora de los cromatgrafos de HPLC llevan incorporados un colector de fracciones.

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ORDENADOR CROMATOGRFICO Microprocesador diseado solo para esta tcnica, es el nexo entre todos los componentes del equipo. Su misin es controlar todas las variables del proceso e indicar en cada instante las condiciones del sistema.

CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO: la fase estacionaria es una resina de intercambio inico y la separacin se produce por la unin de los iones a la fase estacionaria.

Mtodo muy utilizado en la separacin de iones inorgnicos como nitratos (NO3 -), sulfatos (SO4 2), separacin y purificacin de molculas biolgicas (pe, protenas) y en los procesos de desionizacin del agua. La tcnica es muy similar a la utilizada en la cromatografa en columna y la separacin se produce en funcin de la carga que posee el soluto. Fase estacionaria: resinas de intercambio inico que tienen la propiedad de separar especies ionizadas (aniones o cationes) Fase mvil: generalmente disoluciones amortiguadoras de pH. La afinidad de los compuestos por los grupos cargados de la fase estacionaria est influida por el pH que determina su estado de ionizacin. El intercambiador inico consiste en una matriz insoluble a la que se han unido covalentemente grupos cargados. Estos grupos cargados pueden ser reversiblemente intercambiados por otros iones de la misma carga sin alterar la matriz. Hay dos tipos de intercambiadores inicos

Intercambiador catinico. Posee grupos cargados negativamente que atraen cationes (cargas +). Tambin se les conocen como intercambiadores inicos cidos porque sus cargas negativas proceden de la ionizacin de sus grupos cidos. Las resinas catinicas presentan como grupos funcionales ms frecuentes el sulfonato SO3 H+ y el carboxilato -COO- H+.

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Intercambiador aninico. Posee grupos cargados positivamente que atraen aniones (cargas negativas). Tambin se les conocen como intercambiadores inicos bsicos ya que las cargas positivas que poseen resultan de la asociacin de protones con grupos bsicos. Las resinas aninicas suelen contener grupos amonio cuaternario -RN+R3 (-NH3 +OH) y (-+N(CH3)3OH-) Se utilizan normalmente como fase mvil disoluciones acuosas tamponadas ya que las propiedades del agua contribuyen a la disociacin de los grupos inicos y al hinchamiento de la matriz efectos que aumentan el intercambio inico. Hay que tener presente dos reglas bsicas 1) La temperatura del proceso que afecta a la constante de equilibrio (pK) de la disolucin tampn por lo que puede variar su capacidad de tamponamiento. 2) Que los iones del tampn no interfieran en el proceso de intercambio inico ya que si estos iones llevan carga opuesta a la de los grupos funcionales del intercambiador inico intervendrn en el proceso de intercambio inico y causarn perturbaciones en el pH. CONCLUSIN: Utilizar tampones catinicos con intercambiadores aninicos y tampones aninicos con intercambiadores catinicos

CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN MOLECULAR: la fase estacionaria es una estructura parecida a un tamiz y la separacin se produce en funcin del tamao de las molculas. Teniendo en cuenta la forma de la fase estacionaria se clasifica en: - Cromatografa en columna - Cromatografa plana (cromatografa en capa fina y en papel.

Tambin conocida como Cromatografa de Filtracin sobre Gel, Cromatografa de Permeacin sobre Gel y Cromatografa por Tamao Molecular o por Tamices Moleculares. Es un tipo especial de cromatografa que se utiliza en la separacin de sustancias que poseen volmenes o tamaos diferentes. La fase estacionaria, llamada malla molecular, est formada por partculas altamente porosas que permiten la separacin de los componentes de la mezcla en funcin del tamao de las molculas. No existen interacciones entre la fase estacionaria y el soluto. Se separan por el tamao de la partcula. Las especies ms utilizadas como fase estacionaria se dividen en dos tipos:

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Tipo Inorgnico: como las zeolitas sintticas, por ejemplo los tamices moleculares de Linde. Tipo Orgnico: como geles y biogeles (polmeros orgnicos) por ejemplo, el Sephadex (polmero cruzado derivado del dextrano) Todas estas especies poseen cavidades o poros a travs de los cuales las molculas pueden pasar o ser retenidas.

MECANISMO DE FILTRACIN SOBRE GEL La muestra a cromatografiar se aade por la parte superior de la columna y se procede a su elucin con el disolvente adecuado. Las sustancias cuyo tamao molecular es superior al de los poros del gel no pueden atravesarlo por lo que pasan con el lquido a travs del lecho emergiendo las primeras en la columna. El tamao de estas molculas determina el llamado lmite de exclusin de tal forma que aquellas molculas que superan dicho lmite sern las primeras en ser eluidas. Las molculas ms pequeas penetran en los poros quedando retenidas en su interior y sern las ltimas en ser eluidas. Las molculas que emergen de la columna siguen un orden decreciente respecto a sus pesos moleculares.

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Desarrollo experimental
MATERIALES:

1. Tubo de prueba 2. Beaker 3. Capilares 4. Mechero 5. Trpode 6. Placa Aluminio con Silicagel 7. Cmara de revelado 8. Lpiz

Reactivos:
1. Etilo Acetato 2. Benceno 3. cido acetil saliclico

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Experimentacin
PROCEDIMIENTO y RESULTADOS CROMATOGRAFA EN CAPA FINA Soporte: Silicagel G Activado Sistema de solvente: Bz AcOEt (2:1) Sustancias: cido acetil saliclico Revelador: Vapores de yodo metlico A 0.5 cm del borde inferior del portaobjeto (cromatograma) marcar dos puntos equidistantes entre s con un lpiz y a 1 cm del borde superior una lnea que ser el frente de solvente. Realizar el trazo con lpiz porque al utilizar tinta, interferira en la cromatografia 1.0cm

0.5cm
Poniendo al contacto con el fuego del mechero y luego separando se obtienen los capilares. Se calientan muy rpidamente, por eso se separan fcilmente. Esperar a que enfren

Los capilares deben tener una punta muy fina para evitar que el halo sea demasiado grande. Se rompen las puntas haciendo contacto con cualquier superficie

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Como la sustancia debe estar en estado lquido, se debe preparar una solucin sobresaturada. Solo agregar unas gotitas de lo contrario no estara sobresaturada.

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Con un capilar aplicar la muestra problema y la muestra patrn de identificacin, 5 veces cada una; teniendo la precaucin de dejar secar despus de cada aplicacin. Si no se deja secar el halo se hara muy grande y se mezclaran las muestras.

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Luego introducir el cromatograma en la cmara de saturacin el que a su vez contiene 2 ml del sistema de solvente; debe ser rpido ya que es muy voltil. Cuando el solvente est por llegar al borde superior retirarla de la cmara, marcar el frente del solvente, dejar secar La cmara no debe moverse o ladearse bajo ninguna circunstancia, porque podra afectar la trayectoria.

revelar con los vapores de yodo y determinar el Rf de ambas sustancias. El yodo ha estado previamente sobre una cocina elctrica.

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o Distancia que recorri el soluto = 1.05 cm o Distancia que recorri el solvente = 5,9 cm

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Rf = Distancia que recorre el soluto Distancia que recorre el solvente

= 0.178

Terminada la cromatografa analizar los resultados. En nuestro caso se pudo apreciar que las distancias son las mismas lo que indica que la muestra problema es la misma que la qumicamente pura (cido acetil saliclico)

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I.

Conclusiones.

Hay diversos tipos de cromatografas Se observ en esta prctica que por medio de la cromatografa es posible identificar de que sustancias est compuesta una mezcla. La polaridad del solventes utilizados para la cromatografa determinan la el resultado mostrndonos sus diferentes compuestos. Se necesitan soluciones sobresaturadas. En nuestra experiencia se observa que se realiz previamente, una buena extraccin y purificacin.

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II.
I.

Cuestionario
Qu es una serie eluotrpica?

Una serie eluotrpica es un listado de varios compuestos ordenados segn su poder de elucin para un adsorbente dado. Tales series son tiles para determinar los disolventes necesarios en la cromatografa de una mezcla de compuestos qumicos. Normalmente tales series comienzan con disolventes no-polares, como el n-hexano, y finalizan en disolventes polares como metanol o agua. El orden de disolventes en una serie eluotrpica depende a la vez de la fase estacionaria as como del compuesto empleado para determinar el orden

II.

En qu consiste la cromatografa por HPLC y la cromatografa de gases? Es un tipo de cromatografa, es el que ms destaca debido a que es la ms usada. Permiten observar un mejor desplazamiento sobre una fase estacionaria.

CROMATOGRAFA DE GASES Tcnica cromatogrfica que se utiliza para separar compuestos orgnicos voltiles como hidrocarburos, fenoles, disolventes, cidos grasos, etc. Hay dos tipos de cromatografa de gases: Cromatografa Gas Slido (CGS) donde la fase estacionaria es un slido y la fase mvil un gas inerte. (Tcnica muy imitada solo aplicable a compuestos gaseosos de bajo peso molecular). (Cromatografa de adsorcin) Cromatografa Gas - Lquido (CGL) donde la fase estacionaria es un lquido retenido sobre la superficie de un soporte slido y la fase mvil es un gas. En este caso la separacin de los compuestos depende de la constante de solubilidad de la muestra entre la fase lquida y la fase gaseosa. Esta es la tcnica conocida vulgarmente como cromatografa de gases CG (Cromatografa de reparto). MTODO GENERAL DE LA CROMATOGRAFA DE GASES Una pequea muestra del material a separar se inyecta en una corriente de gas inerte (fase mvil)) que lo transporta hasta la columna de cromatografa que contiene el medio adecuado para ir retardando el flujo de los componentes individuales de la muestra. Los componentes de la muestra se van separando en la columna cromatogrfica debido a las diferencias de su perfil de particin o retencin entre la fase mvil gaseosa y la fase estacionaria slida o lquida. La diferencia en la adsorcin o en el reparto sobre el material de la columna es el factor que hace posible la separacin. Los compuestos ya separados emergen a intervalos de tiempo discretos (caracterstico de cada componente) y pasan a travs de un tipo de detector.

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ELEMENTOS DEL CROMATGRAFO DE GASES GAS PORTADOR: Los ms usuales son el helio, argn, nitrgeno, dixido de carbono e hidrgeno, inyectados a presin que oscila entre 2 6,3 atm. Su eleccin depende del tipo de detector instalado en el cromatgrafo. El gas portador, qumicamente inerte, se mezcla con la muestra vaporizada impulsndola por el interior de la columna. INYECTOR: Dispositivo encargado de introducir la muestra en la columna. Se mantiene a temperaturas elevadas entre 200 350 C. La temperatura de trabajo se debe elegir de tal forma que se consiga la volatilizacin de todos los componentes presentes en la mezcla, pero no debe ser superior a la temperatura de ebullicin del componente menos voltil ya que puede producir su descomposicin. COLUMNAS: La columna de cromatografa est situada dentro de un horno ya que esta tcnica se realiza a elevadas temperaturas. Las columnas pueden ser de vidrios, plsticos y metlicas (cobre - nquel y acero inoxidable). Generalmente se usan columnas metlicas (ms caras pero ms eficaces) cuya longitud oscila entre 1 4,5 m y entre 2 20 mm de dimetro. En las columnas de adsorcin los adsorbentes ms usuales son la almina, gel de slice y carbn activo. En columnas de reparto el material de relleno consiste en un soporte slido finamente dividido como celita, arcilla o esferitas de vidrio que portan el lquido voltil. Los lquidos ms empleados son las siliconas, grasas y glicoles polietilnicos. DETECTOR: Los componentes de la muestra ya separados, abandonan la columna de cromatografa y se dirigen hacia el detector que mide alguna propiedad fsica del compuesto que origina una seal elctrica sobre el registrador. Entre los detectores ms usuales est el de ionizacin de llama, conductividad trmica, el termoinico (para detectar compuestos orgnicos con nitrgeno y fsforo y el detector fotomtrico de llama til para el anlisis de contaminantes del agua y del aire como pesticidas e hidrocarburos. REGISTRADOR: El proceso de separacin por cromatografa de gases queda reflejado en un cromatograma donde se observan una serie de picos. Cada pico representa una sustancia de las eluidas en la columna. Estos picos vienen caracterizados por tres parmetros: * Tiempo de retencin: tiempo transcurrido entre la inyeccin de la muestra y la elucin de un producto de la misma. * Volumen de retencin: volumen total del gas portador que se ha necesitado pasar a travs de la columna para separar completamente la sustancia responsable de ese pico. Volumen retencin = (tiempo retencin) x (velocidad del flujo) * rea de los picos: directamente relacionada con la concentracin de la sustancia detectada. La altura de los picos en el cromatograma se expresa en unidades de potencial elctrico. El rea de los picos se calcula multiplicando el alto del pico por el ancho del mismo medido a la mitad de su altura. Actualmente los cromatgrafos de gases llevan incorporados unos aparatos llamados integradores que realizan esa funcin automticamente.

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La identificacin de los productos separados se realiza comparando su tiempo de retencin o volumen de retencin con el de sustancias conocidas. En el anlisis de mezclas con sustancias desconocidas la tcnica de la cromatografa de gases no es suficiente. En este caso es necesario recoger la muestra a la salida del detector para realizar su identificacin con las tcnicas habituales de IR, RMN, UV y Masas. Esta tcnica tiene dos grandes ventajas: * til para separar cantidades muy pequeas de material (del orden de 10 4 g). * Requiere poco tiempo para su realizacin al contrario que otras tcnicas analticas.

III.

Diga que es la electroforesis y cul es su fundamento

es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de estas en un campo elctrico. La separacin puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte slido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de celulosa), o bien a travs de una matriz porosa (electroforesis en gel), o bien en disolucin (electroforesis libre). Dependiendo de la tcnica que se use, la separacin obedece en distinta medida a la carga elctrica de las molculas y a su masa. La variante de uso ms comn para el anlisis de mezclas de protenas o de cidos nucleicos utiliza como soporte un gel, habitualmente de agarosa o de poliacrilamida. Los cidos nucleicos ya disponen de una carga elctrica negativa, que los dirigir al polo positivo, mientras que las protenas se cargan al unirse con sustancias como el SDS (detergente) que incorpora cargas negativas de una manera dependiente de la masa molecular de la protena. Al poner la mezcla de molculas y aplicar un campo elctrico, stas se movern y debern ir pasando por la malla del gel (una red tridimensional de fibras cruzadas), por lo que las pequeas se movern mejor, ms rpidamente. As, las ms pequeas avanzarn ms y las ms grandes quedarn cerca del lugar de partida.

IV.

Diga usted que mtodo cromatogrfica se podra aplicar en su carrera profesional Cromatografa liquida de alto rendimiento (HPLC).

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III.

Bibliografa

"Anlisis Instrumental" Skoog Leary Ed. McGraw Hill (1993) "Cromatografa Lquida de Alta Resolucin" Adrin Garca de Marina - Benito del Castillo Ed. Limusa (1988)

"Gua de Prcticas de Qumica Orgnica" Mariana Lpez Snchez Jorge Triana Mndez Mara Esther

"Introduccin a la Cromatografa" David Abboutt R.S Andrews http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa