Espectrometra de masas

Martha Isabel Paez M. PhD

Ejemplo Elemental
ACTIVACION (Ionizacin) ACELERACIN (Extraccin)

ANALISIS (Separacin)

s po Cam
Lus Esteban 1993

r ado par

COLECCIN (Deteccin)

El

primer paso en los anlisis de Espectrometra de Masas de un compuesto es la produccin de un ion en fase gaseosa del compuesto.

M+e

M +2e
.+ +

EE +R M
.+ + +

OE +N

 La

carga de un ion se representa por q, la carga de un electrn por e y el numero de cargas de los ines por z

q = ze

e = 1,6x10-19 coulomb

 Una

unidad de masa atmica, cuyo smbolo es u (antiguamente era uma), equivale a una duodcima (1/12) parte de la masa de un tomo de carbono-12. 1Da=1,665402x10-27 Kg0,59 ppm

1u=

Diagrama de un Espectrometro de Masas

Sistema en Vaco
Fuente de ionizacin Fuente de ionizacin

Analizador Analizador

Detector Detector

Transductor Transductor Introduccin de muestra Registrador Registrador

Espectrmetro de Masas
GC HPLC DIP EI - CI FAB FI/FD MALDI EBE Q TOF IC

ENTRADA
IONIZACION SEPARACION DETECCION
SEPARADOR DE MASAS A NIVEL MOLECULAR El espectrmetro de masas debe evacuarse a un vaci de <=10-4 torr para proporcionar una camino libre de colisiones

ELECTROMULTIPLI CADOR (CHANELTRON)

RECORRIDO LIBRE MEDIO 10-4 torr: 200 mm 1 torr: 2X10-4 mm

Lus Esteban 1993

Esquema de un espectrmetro de masas

SEPARACIN ACELERACION IONIZACIN

DETECCIN

Entrada
Lus Esteban 1993

Historia
Joseph John Thomson 1906 Nobel de Fsica Descubri el electrn y determino la relacin m/Z
Francis William Aston 1922 Nobel de Qumica, desarrollo el primer espectrmetro de masas con velocidad enfocada

Wolfgang Paul 1989 Nobel de fsica, desarrollo la trampa ionica

John Bennet Fenn 2002 Nobel de Qumica, desarrollo la electrsparay ESI

Koichi Tanaka 2002 Nobel de Qumica, desarrollo el MALDI

 Tras

descubrir la existencia de partculas cargadas positivamente en 1886 y demostrar que estas se desvan al atravesar un campo elctrico o magntico. Thomson demostr en 1913 que el nen existe como mezcla de dos tomos diferentes en su peso atmico, es decir la existencia de istopos.

J.J. Thomson 1.912 Investiga propiedades de los rayos positivos

Pantalla
Campo Magntico Campo Elctrico

B
E Ne+
+

22 20

Y2 e B2 =K X m E

Ecuacin de las parbola s

+ nodo
Lus Esteban 1993

Ctodo
E

Cuanto mas cerca este del nodo se forman los iones, mayor velocidad adquirida

Las partculas menos desviadas son las de mayor velocidad

aos mas tarde Aston descubre que los pesos atmicos de los elementos no son mltiplos enteros de un valor unidad sino que presentaban una diferencia Defecto de masa.

Necesidad de alto vaco

1)

Bajo y mediano vaco. El intervalo de presin atmosfrica con estas caractersticas se manifiesta desde un poco menos de 760 torr hasta 10-2 torr.

Con

las tcnicas usuales para hacer vaco (que se describen ms adelante), los gases que componen el aire se evacuan a diferentes velocidades y esto altera la composicin de gases del aire residual.

2) Alto vaco
.

El intervalo de presin se extiende desde cerca de 10-3 hasta 10-7 torr. La composicin de gases residuales presenta un alto contenido de vapor de agua (H2O).

3) Ultra alto vaco.

El

intervalo de presin va desde 10-7 hasta 10-16 torr. Las superficies internas del recipiente se mantienen limpias de gas. En este intervalo el componente dominante de los gases residuales es el hidrgeno.

Historia de la bombas de vaco

Ao Siglo VIII 1850 1865 1905 1913 1915 1916 1923 1935 1936 1953 Autor Hauskbee y Nollet Geissler y Toepler Sprengel Wolfgang Gaede Wolfgang Gaede Wolfgang Gaede Irving Langmuir F. Holweck Wolfgang Gaede Kenneth Hickman Schwartz y Herb Descubrimiento Mejoras a la bomba de Von Guericke Bomba de columna de Hg Bomba de gota de Hg Bomba de vaco o rotatoria Bomba molecular de vaco Bomba de difusin Condensacin-difusin Bomba molecular Bomba de balastra Bomba de difusin de aceite Bomba inica Bomba criognica

Rasgos de presin para bomba de vaco.

Bomba Mecnica de Paleta

Puerto del descarga Recipiente
Vlvula de descarga
Rotor Paleta

Puerta al vaci

Bomba mecnica de paleta rotatoria en accin. A) Las paletas deslizantes se mueven cuando el rotor gira. El volumen entre la entrada y la paleta inferior es incrementado; esto causa que el gas se mueva dentro de esta rea desde la entrada. B) El gas ha sido aislado del sistema de vaco y comienza a empujarse hacia la vlvula de descarga. C) El gas se comprime ligeramente arriba de la presin atmosfrica. La vlvula de descarga se abre y el gas es expulsado fuera de la bomba a travs del aceite en el recipiente.

BOMBA MECANICA
Estabilizador Bomba mecnica Espectrmetro

Unidades de vaco
El Torr es milmetro de mercurio (mmHg) y como 1/760 de atmsfera. Debido que la atmsfera estndar es definida cuantitativamente en el Sistema Internacional de Unidades, el Torr es definido exactamente como 101325 / 760 pascales. Aunque su uso es todava frecuente en medidas de baja presin, el pascal es la unidad de presin recomendada.

Bombeo simple

Bombeo diferencial

RECORRIDO LIBRE MEDIO

10-4 tor200 mm
Lus Esteban 1993

1 tor

10-4 mm

Unidades de vaco

pascal (Pa) = 1 N/m2 = 1 J/m3 = 1 kgm1 s2 9,86923 x 10 -6 atmsferas.

Equivale

EL RECORRIDO LIBRE MEDIO

Se define como la trayectoria que debe recorrer un in, desde la fuente hasta el detector en un vacio suficiente para asegurar la ausencia de colisiones.

 1. 2. 3.

Depende de factores como: el tamao de las molculas a analizar, el vaco reinante, la temperatura o agitacin termica.

EL RECORRIDO LIBRE MEDIO

En

mecnica estadstica y teora cintica de los gases, se define como recorrido libre medio a la distancia o espacio entre dos colisiones sucesivas de las molculas de gas. Recordemos que en un gas, sus molculas estn en constante movimiento chocando unas con otras. La temperatura del gas es funcin de la energa cintica de estas.

Clculo del recorrido libre medio

El

recorrido libre medio se calcula multiplicando la velocidad media de las molculas del gas por el tiempo entre colisiones, L en metrod:

KT L= 2
K= Constante de Boltzman T temperatura en K presion en Pa la seccion cruzada que puede colisionar (m2)

BOMBA TURBOMOLECULAR
ROTOR ENTRADA DE AIRE

PREVACIO

CONEXI N A LA REFRIGE RACIN MOTOR

Lus Esteban 1993

Bombas turbomoleculares

BOMBA TURBOMOLECULAR
El rotor gira de 60.000a 90.000 rpm Las moleculas a evacuar chocan con las aspas y estas reciben un componente adicional de velocidad en direccin a la camara inferior Esta camara esta siendo evacuada por una bomba rotativa mecanica.

BOMBA TURBOMOLECULAR
Si la velocidad de las aspas del rotor es del mismo orden que la velocidad de agitacin termica de las moleculas a evacuar, el proceso sera muy eficiente, y se conseguira una buena relacion de

compresin entre la zona de prevacio y la

de alto vacio

EYECTOR LATERAL

EYECTORES

ACEITE MENOS VOLATIL

ACEITE CON COMPONENTES VOLATILES

Lus Esteban 1993

PLACA CALEFACTO RA

Bomba de difusin. El fluido de bombeo se calienta hasta que se evapora mediante un calentador situado al fondo de la bomba. El vapor se eleva y es deflectado hacia abajo, trayndose consigo las molculas de gas de la cmara (puntos negros).

BOMBA DE DIFUSIN

Las bombas criognicas (de baja temperatura).

A la camara de vacio

Radiador a( 76oK)

Barrera de radiacion (76oK)

He liquido

Vapor de He

Las bombas criognicas (de baja temperatura).

Se usan especficas vaco.

en de

aplicaciones ultra alto

Una criobomba es una bomba de vaco que tiene una superficie interna enfriada a temperaturas menores a los 120K, donde los gases y vapores se condensan.

Existen

varios mecanismos mediante los cuales se capturan los gases sobre la superficie fra, los ms importantes se pueden representar por medio de las criotrampas y la criosorcin.

Una

trampa de vapor enfriada con nitrgeno lquido acta como una criobomba. El trmino criotrampa se usa para la condensacin de gases difcilmente condensables, por ejemplo el H2, Ar, CH4, CO2, NH3 y los hidrocarburos pesados.

Medidores de vacio

Medidor Pirani

El medidor de Pirani, diseado en 1906, nos da una medida de la presin a travs de la variacin de la conductividad trmica del gas. Este dispositivo consta de un filamento metlico suspendido en un tubo en el sistema de vaco y conectado a una fuente de voltaje o corriente constante. El alambre puede ser de tungsteno u otro material cuya resistencia vare mucho con la temperatura. Al aumentar el vaco, se reduce la prdida de calor por conduccin a travs del gas y aumenta la temperatura y la resistencia del conductor, que se mide con un aparato adecuado

EL MEDIDOR DE IONIZACIN DE CTODO CALIENTE

GAUGER- MEDIDOR DE VACIO

GAUGER MEDIDOR DE VACIO CONT.

MEDIDOR DE VACIO CONT.

VISTA GENERAL DEL DETECTOR DE MASAS

DIFUSIN
VENTAJAS
COSTO REDUCIDO MANTENIMIENTO CASI NULO RELACION DE COMPRESION CASI ALTA

TURBO
VENTAJAS
ALCANZA REGIMEN RAPIDAMENTE POSICIN EN ALGULO MENOR NECESIDAD DE REFRIGERACIN

OTROS TIPOS DE BOMBAS

Bombas

Inica Bombas de sublimacin de titanio Bombas criognicas Trampa de nitrgeno Lquido Blower/ Booster Sorcin Mecanica de aceite Rotativa de Piston

Bombas difusoras y turbomoleculares. Relacin de compresin

P1 P1
N2 1010 H2 106

s a os ui d r f

P2

s ob u r t

1010 a 106

P2
500 a 1000

P2/P1

Detectores
Primero

se utilizaron placas fotosensibles, de deteccin simultaneo del haz ionico, asi como multiplicadores de electrones de deteccin puntual situados en el ambiente de alto vaci del espectrmetro

Detectores
Copa

de faraday Multiplicador de electrones secundarios Chaneltron Detector de conversin fotnica (Detecctor Daly de cenetelleo Detector multicanal. Mulktiple Channel Detector, Multiplier Array Detector

Detector Copa de Faraday

eeee-

e- e-

+
Corriente elctrica generada

La copa de Faraday consiste en un simple electrodo, normalmente en forma de copa o caja, que recibe el impacto de los iones a detectar. Los iones se neutralizan por transferencia de electrones, y la senal se mide con una corriente analgica igual o superior a la corriente inica original

Multiplicador de electrones.
Multiplicador de electrones secundarios (SEM) de dinodos discretos
- - -

+ +
e
-

e-

ee -e e - -

-3Kv 0Kv

El ion a detectar choca con el primer dinodo, provocando la emisin de un elevado numero de electrones que van a incidir sobre el segundo dinodo. El proceso de multiplicacin se repite sucesivamente

ee ee

e-

1. Ctodo

nod o

DETECTOR TIPO CHANELTRON

+
IONES EJE OPTICO PREAMPLIFICA DOR CHANELTRON FUERA DEL EJE (NO CENTRADO)

-3Kv

e + + + +

M M M M M

M M M

V< Potencial de
Ionicacin

V >> Potencial de V>>> Potencial de ionizacin

ionizacin

IONIZACIN POR IMPACTO ELECTRONICO

Corriente inica total

Eficacia del proceso

Procesos Primarios 10 eV 70 eV

DUENTE DE IONIZACIN POR IMPACTO ELECTRONICO

75 eV = 1.700 Kcal /mol
En la fuente EI se producen TEORIA DEL REACCIONES UNIMOLECULARES ABC + e- energtico -------ABC+ CUASI-EQUILIBRIO Los iones ABC+ Formados tendrn un alto contenido L de energa interna, unos o mas que otros, segn como s haya sido de pleno el impacto. Por tanto, unos se i fragmentaran mucho, otros poco y otros nada n

MODELO MECANISISTICO DE LA ESPECTROMETRIS DE MASAS

PRIMER POSTULADO Uno de los factores principales que regulan la abundancia relativa de los iones producidos por fragmentacin, el la estabilidad de los productos de descomposicin
POCO ABUNDANTE

ION PRECURSOR ENTALPIA DE FORMACIN BAJA,CONDUCE A FRAGMENTOS ABUNDANTES

...Y DE AQU ARRANCA TODA UNA MECANICA DE INTERPRETACIN DE ESPECTROS

FUENTE DE IONIZACIN DE IMPACTO ELECTRNICO

FILAMENTO 70 eV
PLACA REPULSORA

PLACAS ACELERADORAS

ENTRADA

VOLTAJE DE ACELERACIN

+ + +
Ec = mv2

+
EXTRACTOR LENTE

TIPOS DE FUENTES IONICAS

CERRADA RADIAL DE

HAZ MOLECULAR DE U.H.V.

TIPOS DE FILAMENTOS

TUNGSTENO RENIO IRIDIO TORIADO HEXABORURO DE LANTANO

CADA COMPUESTO SE FRAGMENTA DE MANERA DIFERENTE

PATRON DE FRAGMENTACIN

ABUNDANCIA RELATIVA

M+ (100%)

Como la molecula tiene 10 carbonos, la probabilidad de que haya uno de masa 13 sera: 10x 1.12 = 11.2% La probabilidad correspondiente a la presencia de un deuterio sera: 8x 0.016 = 0.128 % Por tanto, la probabilidad de que un ion molecular contenga un isotopo pesado, o la probabilidad del ion (M+1)+ ser 11.328%

PATRON DE FRAGMENTACIN Como vemos, el patrn de fragmentacin tambin ayuda a interpretar el espectro de baja resolucin. En el espectro del nitrgeno, adems del ion molecular y del (M+1)+ podemos ver el fragmento de masa 14 correspondiente al tomo de nitrgeno. En el caso del monxido de carbono aparecen los fragmentos de masa 16 y 12 correspondientes al oxigeno y al carbono. En el espectro del etileno hay varios fragmentos procedentes de la perdida de uno o varios protones adems del ion fragmento de masa 12 correspondiente al carbono

ESPECTRO DE BAJA RESOLUCIN

ESPECTRO DE ALTA RESOLUCIN

ION (M+2)+ HALOGENOS

ISOTOPO F 3 5 Cl 3 7 Cl 7 9 Br 8 1 Br 17 2 I
1 9

MASA MASA ABUNDANCIA ION NOMINAL EXACTA RELATIVA GENERADO M+ M+ M+2+ M+ M+2+ M+

CUADRO DE DISTRIBUCIN DE ISOTOPOS DEL CLORO Y BROMO

En los espectrometros de masas la adquisicin de datos y el control total del instrumento se realiza por computador. Una herramienta muy util para la interpretacin de espectros es la comparacin con espectrotecas realizada automticamente por el sofwer

Ventajas del sistema inverso

Desventajas sistema inverso

SENSIBILIDAD
El parmetro sensibilidad indica el valor de la corriente ionica detectada en el colector, para una presin de vapor determinada en la fuente inica Se mide en amperios/ torr y debe estar siempre referida a un compuesto determinado. MINIMA PRESIN PARCIAL DETECTABLE Este trmino es realmente mas importante que el de sensibilidad. Es mucho mas dependiente de la calidad del amplificador empleado.

Desventajas de la ionizacin por impacto electrnico

1.Dificultad

en la medida relativa del ion molecular de algunas molculas 2. Es difcil distinguir entre ismeros 3. Algunos compuestos pueden sufrir degradacin trmica antes de su ionizacin o ser propensas a la fragmentacin despus de la ionizacin debido a la temperatura requerida para la vaporizacin 4. Algunas muestras son simplemente poco volatiles para generar un espectro

 Debido

a esto se hace necesario pensar en otro tipo de ionizacin. Los metodos alternativos que son comunmente usados cuando el analisis por impacto electronico es inapropiado son: Ionizacion quimica Ionizacin por campo Desorcion por campo Bombardeo por atomos rapidos Ionizacin por desorcion via laser

Ionizacin Quimica

Efecto tunel. El efecto tunel puede ser explicado a partir del concepto de ondas de probabilidad. Consideremos el balanceo de una bola en una colina con subidas y bajadas sin friccion, segun lo mostrado en la figura, suponga que la bola esta sostenida momentaneamente y se suelta de la posicion A,esta rodara cuesta abajo y subira la colina hacia la posicion C, nunca podra llegar a una altura mas alta que el nivel del punto A, podra llegar a la posicion B, que esta en la misma altura que A,la bola ira hacia arriba y hacia abajo,oscilando entre los puntos A y B, para siempre. No hay forma por la cual la bola pueda pasar a la posicion D dentro del dominio de la mecanica Newtoniana,pero esto es exactamente lo que ocurre en el dominio de la mecanica cuantica. La bola puede rodar cuesta abajo en la otra cara de la colina,despues de subir hasta la posicion B, esta se materializa en la otra cara,esto se denomina efecto tunel en la mecanica cuantica. Si un hombre tira una pelota contra una pared,la bola rebota devuelta,de acuerdo a las leyes de la fisica cuantica,la bola puede penetrar a traves de un tunel por la pared,pero debido que la bola es un objeto macroscopico,las posibilidades de que esto ocurra, es infinitamente pequena. Dos metales separados por un vacio,se aproximan a esta situacion,los electrones en el metal son bolas y el vacio representa la pared.Los electrones no tienen suficiente energia para escapar a traves del vacio,pero,los dos metales pueden intercambiar electrones por efecto tunel,si estos estan suficientemente proximos,la probabilidad de que esto suceda es grande,porque los electrones son particulas microscopicas.

DISOLVENTES NORMALMENTE UTILIZADOS EN IONIZACION FAB

GLICEROL TIOGLICEROL 3-NITROBENCILALCOHOL N-OCTIL-3-NITROFENILETER TRIETANOLAMINA DIETANOLAMINA POLIETILENGLICOL

(MEZCLAS)

LA MATRIZ ELEGIDA
DEBERA

SER UN BUEN ABSORBENTE DE LA L DEL LASER EMPLEADO FORMAR CON LA NUESTRA UNA DISOLUCION O SUPERFICIE SOLIDA HOMOGENEA SON HABITUALES DISOLUCIONES DESDE 100:1 HASTA 10 000:1

LA MATRIZ ELEGIDA
DOS

DE LOS COMPUESTOS NAS UTILIZADOS COMO MATRIZ SON: ACIDO 2,5 DIHIDROXIBENZOICO (DHB) ACIDO TRANS-3,5P DIMETOXI-4HIDROXICINAMICO AMBOS OPERAN A 266 nm, 337 nm, 355nm 2,79 mm

Solo introduccin (Dire

Tcnicas para i liquidas p

- Moving Belt Cinta mo

- Particle Beam - Haz de

MUESTRAS GASEOSAS
ORIFICIO

DEPOSITO CAPILAR CALENTADO INMERCION DIRECTA JET MUESTREO AUTOMATICO EN CONTROL DE PROCESOS
LA

CROMATOGRAFIA GASEOSA

MUESTRAS LIQUIDAS
SONDA

DE INTRODUCCION DIRECTA SONDA ROBOTIZADA DEPOSITO CALENTADO (SEPTUN INLET) AGHIS (ALL GLASS HEATED INLET SYSTEM) MEMBRANA CROMATOGRAFO LIQUIDO HPLC CROMATOGRAFO DE GAS SISTEMAS ESPECIALES PARA ISOTOPOS

MUESTRAS SOLIDAS
SONDA

DE SLIDOS TECNICAS ESPECIALES. ABLASIN POR LASER MALDI ICP-MASAS

El sector magntico es un elemento dispersivo( en masas velocidades o momentos) y tambin enfoca en direcciones o ngulos

Trayectoria R

Fc=mv2/R

Ec=1/2(mv2)=zV

FL=zVB Fc=Fl

Fc=mv2

Mv2/r=zvB

m/z = R2B2 / 2V

Al salir los iones de la fuente, extrados mediante la aplicacin de un potencial positivo en la placa repulsora, se encuentra con un campo acelerador de voltajeV, y adquieren una energa translacional zV, siendo z la carga del ion, generalmente carga unitaria

Por tanto:

1 2 Ec = mv = zV 2

2 zV v= m

1 2

+
-

+
+

CORRIENTE DIRECTA +

+20v

T1

T3

RF +120
T2

T1= +140 T2=-100

T3= +140

ETE RI R CO DE IVA OS SIT RID PO BAR CTA IRE D BARRIDOS DE RF

BAR RID DIR OS D ECT A N E COR EGA RIE TE TIV A