TITULO:

PRCTICAS DE LABORATORIO ANLISIS INSTRUMENTAL

CATEDRTICO:

DRA. OLAYA PIRENE CASTELLANOS ONORIO

H. VERACRUZ VER, FEBRERO DE 2012

INTRODUCCION
El color es un atributo de la visin. Si el ser humano no poseyera ojos que detectan un mbito poco extenso de las radiaciones electromagnticas, no sera posible identificar subjetivamente cada uno de los colores que se perciben en la vida real. El color, asimismo, es una caracterstica de la luz. La luz se puede definir como la forma de la energa radiante que es capaz de estimular la retina del ojo humano provocando un proceso consciente que da lugar a las sensaciones visuales. Esta definicin es subjetiva, pues la hace depender del observador. Si ste es ciego, por ejemplo, no habr para l diferencia entre una radiacin de 400 nm de longitud de onda y otra de 700 nm. Slo podr darse cuenta (si son lo suficientemente intensas) que la primera produce quemaduras y la segunda calor al ser absorbidas por la piel. Pero qu es el color? El color, como otros trminos, tiene diferentes significados. Los fsicos lo aplican a las variaciones en las distribuciones espectrales de las luces, tanto si son emitidas directamente por fuentes como si lo son indirectamente reflejadas o transmitidas por objetos. Los qumicos utilizan la palabra color para referirse a diferencias espectrales debidas a variaciones en la composicin molecular o en las configuraciones de los compuestos qumicos. En sociologa color significa un aspecto de la respuesta de un observador humano, una percepcin que tiene lugar en el cerebro del observador como resultado de la estimulacin visual. En el lenguaje normal el color se asocia con objetos, de modo que el mismo objeto debe de tener siempre el mismo color; as decimos rojo sangre o verde csped. Por lo tanto todos usamos la palabra color de manera diferente dependiendo del inters del momento. La Sociedad ptica de los EE.UU. (OSA) defini el color en 1944 como aquellas caractersticas de la luz distintas de las inhomogeneidades espaciales y temporales. Definicin poco feliz ya que induce a pensar en este atributo como una propiedad fsica ms que psicofsica. Por otra parte, es siempre preferible definir las cosas por lo que son y no por lo que no son. Si se tuviera que definir el color, sera quiz ms simple y ms directo utilizar la definicin dada por Judd, que dice: si dos objetos de igual forma y textura iluminados con la misma luz y en iguales condiciones de observacin pueden diferenciarse, el atributo de esos objetos que produce esa diferenciacin es el color. Si se desea otra definicin ms rigurosa podra decirse que: el color es el atributo de la luz que hace corresponder de forma unvoca a cada distribucin espectral una sensacin. Esta sensacin est condicionada por la intensidad y duracin del estmulo, el estado de adaptacin del observador, el rea de la retina afectada y el contraste luminoso y cromtico con que se recibe. Es importante destacar algo. Cuando se dice

unvocamente, se indica que para cada composicin espectral de la luz en las condiciones dadas se produce, una y slo una, sensacin de color. En cambio, inversamente, para cada sensacin de color no existe una correspondencia biunvoca, la misma sensacin puede ser producida por infinitas combinaciones de distribuciones espectrales. A este fenmeno se le llama metamerismo. Es evidente, entonces, que los colores dependen de los objetos, al mismo tiempo que de la luz que los ilumina. Sea cual fuere el iluminante empleado, sus propiedades fsicas permanecern inalterables; sin embargo, su apariencia psicolgica depender de la composicin espectral del iluminante; es por tanto un fenmeno psicofsico. No hay una sola definicin de color, pero la norma UNE y la CIE definen dos conceptos diferentes color percibido y color psicofsico. De acuerdo con la CIE (1970) el color percibido se define como el aspecto de la percepcin visual mediante el cual un observador puede distinguir entre dos campos del mismo tamao, forma y textura basndose en las diferencias en la composicin espectral de las radiaciones relacionadas con la observacin. El color psicofsico es la caracterstica de la radiacin visible que permite al observador distinguir las diferencias entre dos objetos de las mismas dimensiones, forma y estructura, siendo estas diferencias de la misma naturaleza que las producidas por una diferencia en la composicin espectral de la radiacin que interviene en la observacin.

Determinacin de Fe+2 por el mtodo de colorimetra visual

Objetivo Que el alumno a travs de la formacin de un complejo colorido del in Fe +2 y una serie de tubos patrn preparados a diferentes concentraciones encuentre la concentracin de ese in en un problema dado. Reactivos 1- 10 Ortofenantrolina Solucin de sulfato ferroso amoniacal Solucin buffer de pH 3 Solucin reductora de cido ascrbico al 10%

Preparacin de reactivo SOLUCIN DE Fe +2 Pesar 0.702 g. de sulfato ferroso amoniacal, disolver en agua destilada y adicionar 0.2 ml de cido sulfrico y aforar a 1 L. Concentracin 0.1 mg/ml. SOLUCIN REDUCTORA Disolver 10 g. de cido ascrbico y aforar a 100 ml. SOLUCIN BUFFER pH 3 Pesar 16.3 g. acetato de sodio, disolver en agua y agregar 11.5 ml. de cido actico aforar a 100 ml. SOLUCIN DE ORTOFENANTROLINA Pesar 0.5 g. de ortofenantrolina, disolver y aforar a 100 ml, calentar ligeramente la solucin. Material 7 Matraces aforados de 50 ml. 3 Tubos Nessler. 3 Pipetas volumtricas de 1 ml. 1 Pipeta graduada de 5 ml. 1 Pipeta graduada de 1 ml

1 Piseta.

Tcnica Preparar patrones en los matraces aforados de 50 ml. adicionando 0, 0.25, 0.5, 1.5, 2.5 y 3.5 ml de solucin de sulfato ferroso amoniacal (0.1 mg/ml) Adicionar a cada matraz 1 ml de solucin buffer, 1 ml de solucin reductora y 1 ml. de solucin de ortofenantrolina. Aforar a 50 ml. cada matraz. Adicionar la misma cantidad a la muestra problema. Comparar los colores obtenidos de las diferentes concentraciones conocidas, con la muestra problema uno antes y uno despus, colocando los patrones y el problema en los tubos Nessler.

Observaciones Conclusiones

Actividades Investigar en que consiste el colormetro de Lovibond

Describir como son los tubos Nessler y las probetas de Hehner. Investigar sobre el colormetro de la A.S.T.M. para determinar el color en aceites lubricantes.

Es sabido que el agua es incolora; entonces, investigar a que se debe su color y como se clasifica este. Las aguas con ms de 20 unidades de color no se aceptan como de calidad potable, por tanto; se siguen dos mtodos oficiales para medir el color al agua, cuales son estos y en que consisten?

COLORIMETROS COMPARADORES

Determinacin Colorimtrica del Fe+2 por el mtodo de Igualacin y curva de calibracin

Objetivo Que el alumno a travs de la formacin de patrones de soluciones coloridas con el in Fe+2 determine la concentracin en un problema por el mtodo de igualacin visual y construyendo una curva de calibracin. Reactivos Ortofenantrolina 1-10 Solucin de sulfato ferroso amoniacal (0.1 mg. /ml) Solucin buffer de pH 3 Solucin acondicionadora de cido ascrbico al 10%

Material 3 Matraces aforados de 100 ml. 3 Pipetas volumtricas de 2 ml. 1 Pipeta graduada de 1 ml. 1 Piseta 1 Colormetro Dubosq 1 Colormetro de Klett 1 Cubeta (celda) para colormetro de Klett 1 Filtro # 42 azul 1 Filtro # 54 verde 1 Filtro # 66 rojo Tcnica En los matraces aforados de 100 ml., adicionar en cada uno de ellos 0 ml. de la solucin madre, en otro 5ml. y en otro la muestra problema. Adicione a cada matraz 2 ml. de solucin buffer, 2 ml de cido ascrbico al 10 % y 2 ml de ortofenantrolina (en ese orden); aforndolos a 100 ml. Colocar la solucin patrn de concentracin conocida en el aparato y mediante la tcnica correspondiente, obtener y anotar la lectura. Colocar la muestra problema, anotar la lectura obtenida.

Observaciones Resultados

Interpretacin de resultados Clculos Conclusiones Actividades Complete el cuadro siguiente Color de la solucin Prpura Naranja Amarillo Violeta Azul Filtro adecuado Verde Azul, verde Azul, verde y rojo Verde Verde y rojo

Investigue el principio de la determinacin del Fe por ste mtodo. Diga usted que le ocurre al Fe al reaccionar con la 1-10 ortofenantrolina. Explquelo con reacciones qumicas. Si se construyera una grfica en ppm. (mg. /ml) vS lectura, como seran las graduaciones de la escala de concentracin. Problema Una solucin estndar de sulfocianuro de molibdeno 2 x 10-4 M. la profundidad o espesor es de 8.47 cm. la profundidad de la solucin problema es de 6.55 cm. Calcular la concentracin de la solucin problema.

Colormetro de Klett Colormetro Dubosq

Determinacin de sulfatos
Objetivos Que el alumno determine el contenido de sulfatos en una solucin aplicando tcnicas turbidimtricas. Reactivos Na2SO4 Solucin acondicionadora para sulfatos Cloruro de bario

Preparacin de los reactivos Solucin de Na2SO4 Pesar 0.148 g. de Na2SO4. Disolver en agua y aforar a 1000 ml. Solucin acondicionadora para sulfatos 50 ml. de glicerina + 30 ml. de HCl + 300 ml de agua destilada + 100 ml. de etanol + 75 g. de NaCl. Material 2 Matraces aforados de 100 ml. 1 Matraz Erlenmeyer de 250 ml. 1 Pipeta graduada de 5 ml. 1 Agitador magntico 1 Mosca para agitador 1 Colormetro de Klett 1 Celda para Klett 1 Piseta. 1 Filtro azul N 42 1 Reloj con segundero Tcnica Se prepara una solucin estndar de sulfatos (tomando de 1 a 5 ml de la solucin madre) y se afora hasta 100 ml. Se vierte el contenido en un matraz Erlenmeyer y se agregan 5 ml. de la solucin acondicionadora y cristales de BaCl2 2H2O (Tome el tiempo a partir de la adicin de los cristales)

 Agitar durante 1 min. Pasado el minuto, se lleva al colormetro de Klett, y se toman lecturas cada minuto durante 3 min. Se toma la lectura ms alta para hacer los clculos correspondientes. Para la alcuota del problema, seguir el mismo procedimiento. Observaciones

Resultados

Interpretacin de resultados

Conclusiones Actividades Definir los siguientes trminos: Dispersin tipo Ryleigh. Dispersin de Tyndall. Efecto Raman. Explique como de determina el SO=4 en detergentes (reactivos, tratamientos, etc.)

Cul es la diferencia entre turbidimetra y nefelometra (esquematice).

Problema El azufre contenido en sulfatos orgnicos y sulfonamidas puede ser transformado por digestin (Zdybek G. D. S. McCann y A.J. Boyle) a sulfato, el cual se determina turbidimtricamente. Una muestra que pesaba 30 g. de una preparacin que contiene p-toluenosulfonamida p-CH3C6H4SO4NH2 (cuya masa molar es 171), fue sujeta al tratamiento de digestin. A continuacin, un dcimo de la cantidad anterior fue llevada a 10 ml. y se le agreg solucin acondicionadora y cloruro de bario en cantidades adecuadas. Al leer la suspensin resultante en un fotmetro, la turbidancia fue de 0.229. Por otra parte un estndar de sulfato de amonio, conteniendo 0.20 mg. de azufre, tratado en forma similar, dio una turbidancia de 0.322, adems se comprob que el sistema sigue una relacin lineal. Calcule el porcentaje de pureza en p-toluenosulfonamida de la muestra original.

Introduccin
La Espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas para la deteccin especfica de molculas. Se caracteriza por su precisin, sensibilidad y su aplicabilidad a molculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomolculas, etc) y estado de agregacin (slido, lquido, gas). Los fundamentos fsico-qumicos de la espectrofotometra son relativamente sencillos. Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en forma de energa interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosntesis en plantas y bacterias. La Mecnica Cuntica nos dice que la luz est compuesta de fotones cada uno de los cules tiene una energa:

Efotn = hn = hc/ donde c es la velocidad de la luz, n es su frecuencia, l su longitud de onda y h= 6.6 10-34Js es la constante de Planck. Cuando decimos que una sustancia qumica absorbe luz de longitud de onda l, esto significa que las molculas de esa sustancia absorben fotones de esa longitud de onda. En esta prctica estudiaremos la absorcin de luz en el visible (440-600 nm). Cuando una molcula absorbe un fotn en este intervalo espectral, se excita pasando un electrn de un orbital del estado fundamental a un orbital excitado de energa superior. De est manera la molcula almacena la energa del fotn:

A+h*vA* Como la energa se conserva, la diferencia de energa entre el estado fundamental de la molcula (A) y su estado excitado (A*) debe ser exactamente igual a la energa del fotn. Es decir, una molcula slo puede absorber fotones cuya energa hn sea igual a la energa de un estado molecular excitado. Cada molcula tiene una serie de estados excitados discretos (o bandas) que dependen de su estructura electrnica y que la distinguen del resto de molculas. Como consecuencia, el espectro de absorcin, es decir, la luz absorbida en funcin de la longitud de onda, constituye una verdadera sea de identidad de cada sustancia o molcula.

Determinar el pico de mxima absorbancia de KMnO4 y K2Cr2O7

Objetivo Que el alumno mediante mtodos espectrofotomtricos y con la obtencin de datos de absorbancia, determine el pico de mxima absorbancia de soluciones de KMnO4 y K2Cr2O7 . Reactivos Solucin de KMnO4 5 x 10 -4 M Solucin de K2Cr2O7 5 x 10 -4 M

Preparacin de los reactivos Solucin de KMnO4 5 x 10 -4 M Pesar 0.079 g. de KMnO4, disolver y transferir a un matraz aforado de 1 L. Aadir 27 ml. de H2SO4 y aforar 1000 ml. Solucin de K2Cr2O7 5 x 10 -4 M. Pesar 0.071 g. de K2Cr2O7 disolver y transferir a un matraz aforado de 1 L., aadir 27 ml. de H2SO4 y aforar 1000 ml. Material 2 Matraces aforados de 250 ml. con soluciones. 1 Matraz aforado de 1000 ml. 1 Vaso de precipitados. 2 Cubetas para espectrofotmetro 1 Espectrofotmetro Bausch & Lomb Tcnica En una cubeta adicionar agua destilada como blanco de reactivo, y en la otra KMnO4 5 x 10 -4 M. Posteriormente repetir la prctica con el K2Cr2O7 5 x 10 -4 M. Encender el espectrofotmetro y dejar calentar durante 15 min. Ajustar a cero. Introducir el blanco de reactivo, seleccionar la longitud de onda y ajustar a 100. Sacar el blanco de reactivo, introducir la cubeta que contiene la muestra problema y anotar la lectura. Repetir la operacin con el blanco de reactivo y la muestra problema, pero cambiando la longitud de onda disminuyndola de 10 en 10, desde 600 nm. hasta 450 nm. Realizar la grfica para determinar el pico de mxima absorbancia de cada solucin Efectuar el reporte correspondiente.

Observaciones

Resultados

Interpretacin de resultados.
Conclusiones

Actividades Investigue cuales son las soluciones y filtros empleados para comprobar la calibracin de la escala de longitud de onda de un espectrofotmetro.

USO DE LOS DISOLVENTES EN LAS DETERMINACIONES ANALTICAS.

Explique como funciona un espectrofotmetro de haz simple y como uno de haz doble. Espectrofotmetro de Doble Haz: Espectrofotmetro de Simple Haz (Un solo haz). Problema Para determinar el volumen de un tanque de forma irregular se le agrega 1 Kg. de un colorante soluble en agua. El tanque se llena en su totalidad y el agua se mezcla por medio de un sistema de bombeo homogeneizando el colorante; se drena una muestra y se analiza. Una porcin de 0.1 gr. de colorante fue disuelto y diluido hasta 500 ml. (solucin A); una porcin de A fue diluida despus con un volumen igual de agua para formar la solucin B. en un espectrofotmetro de filtro de dos fotoceldas puesto a cero de absorbancia con la solucin B se encontr una absorbancia de 0.863 para el agua del tanque y 0.750 para la solucin A. Calcule la capacidad del tanque en litros.

EXTRACCIN Y SEPARACIN DE PIGMENTOS VEGETALES MANCILLA, C. G. E.; CASTREJN, C. R.; ROSAS, T. M; BLANCO, E. Z. y PREZ, S. L. J.
RESUMEN: Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-a (verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo anaranjado) en diferentes proporciones. Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes apolares, lo que permite su separacin cuando una solucin de las mismas desciende por a travs de una columna de cromatografa verticalmente sobre una pelcula de un disolvente orgnico, ya que las ms solubles se desplazarn a mayor velocidad, pues acompaarn fcilmente al disolvente a medida que ste desciende. Las menos solubles avanzarn menos en la columna. Aparecern, por tanto, varias bandas de diferentes colores (hasta siete o ms, dependiendo del material utilizado) que estarn ms o menos alejados de la disolucin alcohlica segn la mayor o menor solubilidad de los pigmentos. Estas bandas poseern diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolucin. En la prctica se extrajeron estas clorofilas al primero hervir en agua las espinacas para retirar el almidn, despus se extrajeron con una mezcla de metanol y ter dietlico las clorofilas y por medio de una extraccin lquidolquido con ter de petrleo clorofilas y carotenos con ayuda de una solucin sobresaturada de NaCl para evitar emulsiones y obtener las 2 fases. Una vez extrados los pigmentos fotosintticos, se procedi a realizar una cromatografa de adsorcin para separar las distintas clorofilas que componen dichos pigmentos fotosintticos que componen las coloraciones de las hojas de las plantas observndose que estas se iban corriendo por la columna dependiendo de la afinidad que tuvieran por el disolvente y se obtenan en diferentes cantidades de acuerdo al tipo de clorofila, ya que por ejemplo se obtuvo en mayor cantidad la clorofila alfa debido a que esta es la que compone casi el 75% de las clorofilas de la planta.