CINÉTICA+

1Recopilado por Luz del Carmen Ornelas Hernndez Profesora de Bioqumica.
Instituto Tecnolgico de Morelia

Velocidad de reaccin afectada por pH, temperatura y concentracin de sustrato

La accin de las enzimas es modificada por cambios en el pH, por aumento de
temperatura y por la concentracin del sustrato.
Efecto del pH sobre la velocidad de reaccin
El pH tiene una influencia marcada sobre la velocidad de las reacciones enzimticas.
Caractersticamente, para cada enzima hay un valor de pH al cual la velocidad
es ptima y a cada lado del ptimo la velocidad es inferior. Esto se debe a que los
sitios activos de la enzima se componen a menudo de grupos ionizables que deben
encontrarse en la forma inica adecuada, con el fin de mantener la conformacin del
sitio activo, unir los sustratos o catalizar la reaccin. Adems, uno o ms de los
sustratos pueden contener grupos ionizables y slo una forma inica del sustrato
puede unirse a la enzima y experimentar la catlisis. La relacin pH-actividad de la
enzima depende del comportamiento cido-bsico de la enzima y del sustrato. La
disminucin de la actividad enzimtica podra deberse a la formacin de una forma
inica incorrecta del sustrato o de la enzima, o de ambos. El pH ptimo de la
enzima y el pH de su entorno celular no siempre es el mismo; de tal manera que, en
ocasiones, la regulacin intracelular de su actividad es el pH.

FIGURA 2.13

Velocidad frente al pH, un modelo monoprtico sencillo
Considerar un sistema en el que el sustrato es un cido dbil, HA, pero slo la forma
ionizada A
-
se une a la enzima. El verdadero sustrato es entonces A
-
. Para una
concentracin total fija de cido dbil, la proporcin que se encuentra en la forma
inica apropiada se calcula con la ecuacin de Henderson-Hasselbalch.
Cuando el pH es superior en una unidad al pK
a
10/11 del total se encuentran
como A
-
. Cuando el pH = pK
a
+ 2, 100/101 del total se encuentran como A
-
. Cuando el
pH es una unidad menor que el pK
a
1/11 se encuentran como A
-
; as podemos esperar
que la velocidad aumente a medida que se in-cremente el pH, como se muestra en la
2Recopilado por Luz del Carmen Ornelas Hernndez Profesora de Bioqumica. Instituto Tecnolgico de Morelia

figura 2.14 donde el pK
a
del sustrato se supone que es 4. Se supone tambin que el
sitio activo de la enzima contiene un grupo bsico B que deber estar protona-do, BH
+
,
para unirse al sustrato A
-
. La proporcin de concentracin total de enzima en la forma
inica adecuada BH
+
disminuye al aumentar el pH, como se ilustra en la figura 2.14
donde el pK
a
del sitio ac-tivo se supone es 7. La actividad mxima terica se dar a un
pH en el que toda la enzima se encuen-tra como BH
+
y todo el sustrato como A
-
. Sin
embargo, los dos valores de pK
a
se diferencian slo en tres unidades y, por lo tanto, la
combinacin mxima de BH
+
y A
-
se dar a un pH de 5.5 en el que el 97% del sustrato
total y enzima total estarn en la forma inica adecuada.

FIGURA 2.14
Efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccin
Muchas reacciones qumicas transcurren a una velocidad mayor si la temperatura
aumenta. Un aumento en la T comunica ms energa cintica a las molculas del
reactivo, dando ms colisiones eficaces por unidad de tiempo. Las reacciones
catalizadas enzimticamente se comportan anlogamente hasta cierto punto. Las
enzimas son molculas proteicas complejas; su actividad cataltica se debe a una
estructura terciaria altamente ordenada y exacta que da lugar a la formacin de sitios
estereoespecficos de unin del sustrato con el centro cataltico. La estructura terciaria
de una enzima se conserva por un gran nmero de enlaces dbiles no covalentes; por
lo tanto, una enzima es una estructura frgil y muy delicada. Si la enzima absorbe
demasiada energa, la estructura terciaria se rompe y la enzima se des-naturaliza y
pierde su actividad cataltica. As, al elevarse la temperatura, el aumento esperado en
velo-cidad debido al incremento de colisiones E+S es anulado por el aumento de la
velocidad de desna-turalizacin; por lo tanto, una representacin de actividad cataltica
frente a T generalmente muestra un pico que se conoce como temperatura ptima.

Las enzimas de peso molecular bajo compuestas de cadenas polipeptdicas sencillas y
que poseen puentes disulfuro son, generalmente, ms estables al calor que las de
peso molecular alto como las enzimas oligomricas.

FIGURA 2.15
La curva que presentan las reacciones catalizadas por enzimas se debe:

Al incremento habitual de la reaccin por aumento de la temperatura.
Desnaturalizacin de la enzima que se lleva a cabo entre 45 - 60 C.

Como se mencion anteriormente, la relacin entre la constante de velocidad k, y la
energa de activa-cin E
a
viene dada por la ecuacin de Arrhenius
RT
E
-
a
Ae = k

que tambin se puede expresar

[y = m x + b]

La forma integrada de la ecuacin de Arrhenius es:

O bien

A log
T
1
R 303 . 2
E
k log
a
+ =
1 2
1 2 a
1
2
T T
T T
R 303 . 2
E
k
k
log

=
1
2
1 2
1 2
a
k
k
log
T T
T RT 303 . 2
E
=

Donde k
1
y k
2
son las constantes especficas de velocidad de reaccin a dos
temperaturas diferentes, t
1
y t
2,
respectivamente.
En un sistema sencillo de equilibrio rpido, V
max
/[E]
t
= k
p
, constante de
velocidad de primer or-den. As, una representacin de log V
max
/[E]
t
frente a 1/T da E
a

para el proceso cataltico. En la prctica slo puede representarse log V
max
, ya que la
V
max
de una preparacin dada es proporcional a k
p
.
El efecto de temperatura sobre la velocidad de reaccin se expresa
frecuentemente en trmi-nos de un coeficiente de temperatura, Q
10
, que es el factor
en que aumenta la velocidad al incre-mentar la temperatura 10C.

Efecto de la concentracin del sustrato sobre la velocidad de reaccin
La velocidad de una reaccin catalizada por una enzima se incrementa al aumentar la
concentracin de sustrato hasta un punto en el cual ya no hay incremento, aun con la
adicin de ms sustrato. En esta fase, el sustrato ha saturado los sitios activos de la
enzima y se ha logrado la velocidad mxima de la reaccin, la cual depende de la
afinidad de la enzima y el sustrato correspondiente.

FIGURA 2.16

Cintica enzimtica
Para que una reaccin qumica se lleve a cabo es necesario:
Que las molculas se reconozcan qumicamente; es decir, que tengan una
orientacin espacial ptima.
Que posean la suficiente energa para alcanzar un estado de transicin en el
cual la probabilidad de establecer o romper un enlace sea elevada. Este
10
Q log T RT 303 . 2
E
10 1 2
a
=

estado de transicin se encuentra en la barrera de energa que separa
reactivos y productos. Se puede esquematizar de la siguiente manera:

Energa de activacin
Es la energa necesaria para llevar las molculas de un mol de sustancia al estado de
transicin.
Energa de activacin y catlisis
Se sabe que los procesos espontneos transcurren con disminucin de la energa
libre. La energa adi-cional que hay que suministrar al sustrato para que se transforme
en producto recibe el nombre de energa de activacin, como se haba mencionado.
La energa de activacin est relacionada con la constante de velocidad de la reaccin
qumica, como se indica:

S P
k

k = -
dS
dt
=
dP
dt

k = constante de velocidad

V = k[S]

La energa de activacin y la constante de velocidad estn relacionadas por la
ecuacin de Arrhe-nius

en donde
A = nmero de molculas que tienen la suficiente energa para reaccionar
e = base de logaritmo natural
R = 1.99 cal/Kmol
T = 273 + C

RT
E
-
a
Ae = k

Sacando logaritmo natural a los dos miembros de la ecuacin, tenemos que

RT
E
- ln A e ln ln A = k ln
a RT
E
-
a
=
(

Sustituyendo ln A = B.
ln k = B -
E
RT
a

Esta ecuacin permite deducir que la velocidad de cualquier reaccin qumica ser
mayor al aumentar la temperatura de la reaccin y disminuir la energa de activacin.
Se sabe que por cada 10 de elevacin de temperatura la velocidad de
reaccin se duplica. Precisamente, los catalizadores disminuyen la energa de
activacin y en consecuencia aumentan considerablemente la velocidad de la
reaccin catalizada.
Llamamos k a la constante de velocidad de la reaccin espontnea, y k a la
catalizada:
ln k = B -
E
RT
y ln k' = B -
E
RT
a a
'

Restando mutuamente, tenemos

2.303 RT
' E - E
=
k
k'
log , bien o ,
RT
' E - E
=
k
k'
ln
a a a a

Esta relacin nos indica cuantas veces es ms rpida una reaccin catalizada de una
no catalizada.
Principios de la cintica enzimtica
La cintica es el estudio de las velocidades de reaccin y el conocimiento de los
principios que rigen dichas reacciones. Vamos a relacionar la velocidad de la reaccin
con la concentracin de los reactivos mediante la expresin

V = k[ ]
Sea la reaccin

en donde,
k
f
= constante de formacin
k
r
= constante de reversibilidad

A B + C A B + C
k
k
f
r


V = k
f
[A] V = k
r
[B][C]

Sobre una base cintica, las reacciones qumicas se pueden clasificar por el orden de
reaccin en: de primer orden, de segundo orden, de tercer orden y de orden cero.
Reacciones de primer orden
Son aqullas cuya velocidad depende de la concentracin de un reaccionante.
A P

La velocidad de reaccin en cualquier tiempo t est dada por:

V = k[A]

Puesto que V = mol/seg, y [A] = mol, despejando k tenemos

k = seg
-1

La forma integrada de esta ecuacin, que es ms til para la realizacin de clculos
cinticos, es

En las reacciones de primer orden, la mitad del tiempo est dada por:

Reacciones de segundo orden
Son aqullas cuya velocidad es proporcional a la concentracin de dos reaccionantes

A + B P

La velocidad de esta reaccin se puede expresar como

si [A] = [B] V = k [A]
2

V = -
d[A]
dt
=
d[P]
dt
V = -
d[A]
dt
= -
d[B]
dt
=
d[P]
dt
303 . 2
kt
] A [
] A [
log
o
=
k
693 . 0
t
2
1
=
| |
| | A k =
dt
A d
- = V
| |
k[A][B] =
dt
A d
- = V

] B ][ A [
] A ][ B [
log
] B [ ] A [ k
303 . 2
t
o
o
o

=
despejando k tenemos
k = (seg mol)
-1

La forma integrada de la expresin de segundo orden es

en donde
[A
o
] y [B
o
] son las concentraciones iniciales
[A] y [B] son las concentraciones en el tiempo t

En las reacciones de segundo orden, cuyas concentraciones de los reaccionantes son
iguales, el tiempo mitad es igual a

en donde
C
o
= concentracin inicial de los reaccionantes
k = constante de velocidad de segundo orden
Reacciones de tercer orden
Son aqullas cuya velocidad es proporcional a la concentracin de tres reaccionantes

A + B + C P

La velocidad de esta reaccin se puede expresar como

si [A] = [B] = [C] V = k [A]
3

despejando k tenemos

k = (seg mol )
2 -1

Reacciones de orden cero
Son independientes de la concentracin de cualquiera de los reaccionantes. La
velocidad puede de-pender de la concentracin del catalizador
V = -
d[A]
dt
= -
d[B]
dt
= -
d[C]
dt
=
d[P]
dt
k C
1
t
o
2
1
=
| |
k[A][B][C] =
dt
A d
- = V

| |
V= -
d A
dt
= k[A] = k
o

despejando k
k = mol/seg

Obsrvese que la velocidad es una constante a lo largo del tiempo que dura la
reaccin.
Los principios generales de cintica de las reacciones qumicas son aplicables
a las reacciones enzimticas, pero stas tienen una caracterstica que no se observa
en las reacciones qumicas no enzimticas y es la saturacin con el sustrato.
Los primeros conocimientos sobre el comportamiento enzimtico se deben a V.
Henri y ms tarde a L. Michaelis y Maud L. Menten. El modelo de accin enzimtica de
Michaelis-Menten ha sido la base de la cintica enzimtica. Su trabajo experimental se
realiz con un extracto de levaduras ricas en invertasa (hidroliza la sacarosa). Se
recopilaron los datos de dos experimentos independientes, los cuales se indican a
continuacin.

1) Mientras la concentracin del sustrato se mantuvo constante, en tanto se
haca variar la con-centracin de enzima, se observ lo siguiente:

FIGURA 2.5

2) El experimento inverso, cuando la concentracin de enzima se mantuvo
constante y la concentracin de sustrato se hizo variar, se observ lo
siguiente:


Este ltimo comportamiento se explica suponiendo que:

A concentraciones muy bajas de sustrato [S] < 0.01 K
m
la representacin de V
frente a [S] es prcticamente lineal. Esta es la regin de cintica de primer
orden.
A medida que aumenta la [S], la velocidad disminuye y deja de ser
proporcional a la [S]; en esta zona la reaccin es de orden mixto.
Al aumentar la [S], [S] > 100 K
m
, la velocidad es prcticamente independiente
de la [S]. Esta es la regin de cintica de orden cero.
Cuando la [S] est entre 0.1 K
m
y 10 K
m
, la cintica que muestra es la
cintica clsica de Michaelis-Menten.

Eleonor Michaelis Maud Menten
En 1913, Michaelis-Menten explicaron de manera sencilla este comportamiento.
Supusieron que la enzima poda combinarse de modo reversible con el sustrato para
formar un complejo intermedio enzima-sustrato (ES), el cual se descompone para
formar los productos y la enzima queda libre en su forma original.

La velocidad de formacin del complejo ES
V
f
ES = V
f
= k
1
[E][S]

la velocidad de disociacin del complejo ES
V
D
ES = V
D
= K
3
[ES] + k
2
[ES]

cuando se alcanza el equilibrio para ES
V
f
= V
D

k
1
[E][S] = K
3
[ES] + k
2
[ES]

simplificando

k
1
[E][S] = (k
2
+ K
3
) [ES]

Si [E] = [E
T
] - [ES]. Sustituyendo [E] tenemos, E
T
= Enzima total

k
1
( [E
T
] - [ES] ) [S] = (k
2
+ K
3
) [ES]

despejando las k tenemos
[ES]
[S] ) [ES] - ] [E (
=
k
k + k
T
1
3 2

en donde
. Michaelis) de (constante K =
k
k + k
m
1
3 2

Sustituyendo

[ES]
[S] ) [ES] - ] [E (
= K
T
m

simplificando
[ES]
) [S] [ES] ( - ) [S] ] [E (
= K
T
m

[S] -
[ES]
[S] ] [E
= K
T
m

La velocidad de formacin del producto es V =
k
3
[ES]; esta velocidad la podemos llamar
velocidad inicial (V
o
);
entonces
[ES] = V
o
/ k
3

sustituyendo [ES]
[ES]
[S] ] [E
= [S] + K
T
m
[S] + K
[S] ] [E
= [ES]
m
T

[S] + K
[S] ] [E
=
k
V
m
T
3
o

despejando V
o

[S] + K
[S] ] [E
k = V
m
T
3 o

Si V
o
= k
3
[ES] la velocidad mxima (V
max
) se
alcanzar cuando toda la enzima est unida
al sustrato;
entonces
V
max
= k
3
[E
T
]
sustituyendo k
3
[E
T
]

Esta es la ecuacin cintica clsica de Michaelis-Menten y corresponde a una
hiprbola con V
o
y [S] como coordenadas, y con la constante V
max
como asntota.
Cuando V
o
= V
max
los sitios activos de la enzima estn ocupados y toda la
enzima est como ES y no hay enzima libre; esta condicin se llama saturacin al
100%. Cuando la saturacin es al 50%

Vo = V
max

sustituyendo V
o
en la ecuacin de Michaelis-Menten:

V
2
=
V [S]
K +[S]
max max
m

simplificando

K
m
+ [S] = 2 [S]

K
m
= 2 [S] - [S]

K
m
= [S]

[S] + K
[S] V
= V
m
max
o

K
m
= [S], a la que se alcanza la mitad de la mxima velocidad. Esto habla de la
especificidad de
la enzima. Mientras ms pequea es la K
m
, mayor es la especificidad de la enzima por
ese sustrato.

La fraccin de sitios unidos a una determinada concentracin de sustrato puede ser
calculada por:
[S] + K
[S]
=
V
m max
V
f
ES
=

La aproximacin del estado estacionario
En 1925, Briggs y Haldane establecieron una hiptesis. Estos autores sealaron una
importante cir-cunstancia que se muestra en la figura siguiente

Este diagrama muestra cmo tienden a variar las concentraciones de los distintos
componentes de una reaccin enzimtica en el curso de la misma.


De acuerdo con esto, despus de un primer momento transitorio [S] y [P] cambian
mucho ms rpida-mente en trminos absolutos que [E] y [ES]. Si la enzima est
presente en cantidades catalticas; es decir, [S] >> [E
T
], entonces, inmediatamente
despus de mezclar E y S se alcanza un estado estacio-nario en el que [ES]
permanece, prcticamente, constante con el tiempo. Cabe considerar cero la velocidad
de cambio de [E] y [ES] respecto al tiempo, en comparacin con la velocidad de
cambio con [S] y [P]. Esta suposicin de Briggs y Haldane se conoce como
aproximacin del estado estacionario. De esto puede deducirse una ecuacin de
velocidad de forma similar a la descrita por Michaelis-Menten.
Cintica de primer orden
La relacin lineal entre V y [S] cuando [S] << K
m
, la K
m
puede deducirse a partir de la
ecuacin de Michaelis-Menten.

Cuando [S] << K
m
la [S] en el denominador se desprecia y la ecuacin se reduce a:

] S [
K
V
= V
m
max
o
o V = k[S]
Donde

k = constante de velocidad de primer orden para la reaccin total (min
-1
)

Cintica de orden cero
La relacin lineal entre V y [S] cuando [S] >> K
m
, la K
m
puede deducirse a partir de la
ecuacin de Mi-chaelis-Menten.
Cuando [S] >> K
m
, la K
m
en el denominador se deprecia y la ecuacin se
reduce a:

[S]
[S] V
= V
max
o
, simplificando V
o
= V
max

Para efectos prcticos, la velocidad es constante e independiente de [S].
Cuando la [S] est entre 0.1 K
m
y 10 K
m
, la cintica que muestra es la
cintica clsica de Michaelis-Menten.
Determinacin de K
m
y V
max
por representacin doble directa
[S] + K
[S] V
= V
m
max
o

Conocidos dos o ms puntos de la hiprbola Michaeliana, de coordenadas individuales
(x
1
, y
1
), se pue-den trazar todas las rectas que pasen por los puntos (x
1
,0) y (0, y
1
),
obtenindose as un haz que con-fluye en el punto de coordenadas (-K
m
, V
max
) como
muestra la figura:

Transformacin de la ecuacin de Michaelis-Menten
Representacin de Lineweaver-Burk

De
V =
V [S]
K +[S]
o
max
m

El recproco de esta ecuacin es
1
V
=
K +[S]
V [S]
o
m
max

Simplificando
1
V
=
K
V
1
[S]
+
1
V
o
m
max max

[y = m x + b] Ecuacin de una recta

FIGURA 2.9

Representacin de Eadie-Hofstee
La ecuacin de Michaelis-Menten se transforma en la ecuacin que corresponde a una
recta.
V= - K
V
[S]
+ V
m max

[y = m x + b]

FIGURA 2.11
Representacin de Dixon
La ecuacin de Michaelis-Menten puede tambin generar una recta al expresarla en la
forma

max
m
max
V
K
+
V
[S]
=
V
[S]

[y = m x + b]

FIGURA 2.12


ndice de recambio
El trmino ndice de recambio puede utilizarse de dos formas. Una, que ha sido
definida como activi-dad molecular, es el nmero de moles de sustrato
transformados por minuto por mol de enzima en condiciones ptimas. Otra,
considerando que muchas enzimas son oligmeros que contienen n subunidades, es
el nmero de moles de sustrato transformados por minuto por mol de subuni-
dad activa o centro cataltico en condiciones ptimas. Esta ltima definicin de
poder cataltico se llama actividad de centro cataltico.

Inhibicin enzimtica
Cualquier sustancia que reduzca la velocidad de una reaccin catalizada
enzimticamente se puede considerar como un inhibidor. Tanto la velocidad mxima
como la K
m
pueden verse afectadas de diferentes maneras. La inhibicin de la
actividad enzimtica es uno de los mecanismos de regulacin de las clulas vivas y
uno de los procedimientos ms importantes de diagnstico enzimtico.
En la vida cotidiana, los inhibidores enzimticos pueden encontrarse en sustancias
como dro-gas, antibiticos, conservadores, venenos y toxinas.
Inhibicin irreversible
En primer lugar, se reconoce la inhibicin irreversible que supone una unin
covalente enzima-inhibidor que lesiona o suprime la actividad enzimtica, sin
posibilidad de regeneracin. As, por ejemplo, el iodoacetato o el
diisopropilfluorofosfato pueden bloquear a los aminocidos cistena o serina del centro
activo de la enzima inutilizndola como catalizador
CysSH + ICH
2
COOH
CysSCH
2
COOH + HI

| |
t
max
p
E
V
k =

Inhibicin reversible
En la inhibicin reversible, la unin enzima-inhibidor (EI) suele ser no covalente y,
por tanto, temporal. El complejo (EI) se podr formar y destruir de acuerdo con las
leyes de los equilibrios qumicos. Se describen tres tipos fundamentales de inhibicin
reversible: inhibicin competitiva; inhibicin no competitiva a) pura y b)mixta; e
inhibicin acompetitiva.
Inhibicin competitiva
Un inhibidor competitivo es una sustancia que se combina con la enzima libre, de
forma que impide la unin con el sustrato. Es decir, el inhibidor y el sustrato se
excluyen mutuamente. Un inhibidor competitivo puede ser un anlogo no
metabolizable, un derivado del verdadero sustrato, otro sustrato para la enzima o un
producto de reaccin. Esta inhibicin se puede compensar aumentando la
concentracin de sustrato lo que permite alcanzar la misma velocidad mxima. El
efecto aparente del inhibidor es disminuir la afinidad de la enzima por el sustrato.

El cido malnico es un ejemplo clsico de un verdadero inhibidor competitivo. Inhibe
la succinato deshidrogenasa que cataliza la oxidacin del cido succnico a cido
fumrico.

El cido malnico se parece al cido succnico lo suficiente como para combinarse con
la enzima en el sitio activo


Esta inhibicin se diagnostica midiendo V
o
contra [S] en ausencia y en presencia de
inhibidor. Sus representaciones grficas son:

Inhibicin competitiva

De
V =
V [S]
K +[S]
o
max
m

En esta inhibicin se ve afectada la K
m
por el factor (1 + [I]/K
I
), el cual puede
considerarse como un factor estadstico dependiente de la [I], que indica la distribucin
de enzima entre las formas E y EI. As, tenemos que

|
|
.
|
\
|
I
m m
K
[I]
+ 1 K = ' K

La constante de Michaelis aparente (K
m
) aumenta.
La ecuacin se transforma en la ecuacin correspondiente a una recta

[S] +
K
[I]
+ 1 K
[S] V
= V
I
m
max
o
|
|
.
|
\
|

[ y = m x + b ]

Como ejemplos de esta inhibicin estn los antibiticos, insecticidas, herbicidas y
medicamentos contra el cncer, por mencionar algunos.
Modelos de inhibicin competitiva

El modelo 1 ilustra la inhibicin competitiva clsica en la que un inhibidor compite con
el sustrato por un sitio nico de unin. Los modelos 2-4 representan otras formas en
las que un inhibidor y un sustrato se excluyen mutuamente: impedimento estrico
(modelo 2); impedimento estrico o competicin por un grupo de unin comn
(modelo 3) y sitios de unin superpuestos (modelo 4).

Inhibicin no competitiva
Inhibicin no competitiva pura

El inhibidor no se fija en el centro activo, sino en otro punto de la molcula enzimtica,
modificando la eficacia cataltica de sta. La unin del inhibidor a la enzima no es
excluyente para el sustrato, pero el complejo ternario ESI no origina productos de
reaccin.
Esta inhibicin no afecta a la constante de Michaelis de la enzima, pero disminuye la
velocidad mxima. El resultado aparente es que hay menos molculas enzimticas
dispuestas a actuar sobre el sustrato. El efecto de inhibicin no se contrarresta al
| |
| |
max I max
m
V
1
S
1
K
I
1
V
K
V
1
+
|
|
.
|
\
|
+ =

aumentar la concentracin de sustrato; la inhibi-cin depende slo de la concentracin
del inhibidor.

Sus representaciones grficas son:

De
V =
V [S]
K +[S]
o
max
m

En esta inhibicin se ve afectada la velocidad por el factor (1 + [I]/K
I
), as:

) [S] + K (
K
[I]
+ 1
[S] V
= V
m
I
max
o
|
|
.
|
\
|

K
[I]
+ 1
V
= ' V
I
max
max
|
|
.
|
\
|

La V
max
aparente disminuye
Ecuacin de Lineweaver-Burk afectada:


| |
|
|
.
|
\
|
+ +
|
|
.
|
\
|
+
I I
K
I
V K
1
1
S
1 I
1
V
K
=
V
1
max max
m
o

[ y = m x + b ]
Como ejemplos de esta inhibicin tenemos enzimas que tienen como cofactores
metales y son inhibi-os reversiblemente por EDTA o enzimas que tienen grupos
tilicos (-SH) que reaccionan reversible-mente con metales pesados, como Pb
++
, Hg
++

y Ag
+
.
Inhibicin no competitiva mixta

En la cintica de la inhibicin no competitiva mixta, tanto la V
max
como la K
m
se ven
afectadas. En la figura se representan las caractersticas de esta inhibicin

De
V =
V [S]
K +[S]
o
max
m

En esta inhibicin el factor (1 + [I]/K
I
) afecta de la siguiente manera:


[S] +
K
[I]
+ 1 K
[S]

K
[I]
+ 1
V
= V
I
m
I
max
o
|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|

K
[I]
+ 1
V
= ' V
I
max
max
|
|
.
|
\
|
La V
max
aparente disminuye
|
|
.
|
\
|
I
m m
K
[I]
+ 1 K = ' K

m
) aumenta.


| |
|
|
.
|
\
|
+ +
|
|
.
|
\
|
+
I max I
K
I
V K
1
1
S
1 I
1
V
K
=
V
1
max
m
o

[ y = m x + b ]
Inhibicin acompetitiva
El inhibidor slo se une al complejo enzima-sustrato, y no a la enzima libre. El
complejo ternario ESI tampoco origina producto final. Como resultado, la velocidad
mxima disminuye (ya que no todos los complejos ES van a producir reaccin) pero la
constante de Michaelis aparente disminuye: aumenta la estabilidad del complejo ES
por la presencia del inhibidor.


La grfica registra las caractersticas de este tipo de inhibicin

FIGURA 2.21

De
V =
V [S]
K +[S]
o
max
m

En esta inhibicin el factor (1 + [I]/K
I
) afecta de la siguiente manera:

[S] +

K
[I]
+ 1
K

[S]

K
[I]
+ 1
V
= V
I
m
I
max
o
|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|

Sacando comn denominador

|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|

K
[I]
+ 1

K
[I]
+ 1 [S] + K

[S]

K
[I]
+ 1
V
= V
I
I
m
I
max
o

Por ley de la herradura

K
[I]
+ 1 [S] + K

K
[I]
+ 1 [S]

K
[I]
+ 1
V
= V
I
m
I
I
max
o
|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|

Eliminando trminos

Finalmente

K
[I]
+ 1 [S] + K
[S] V
= V
I
m
max
o
|
|
.
|
\
|

K
[I]
+ 1
V
= ' V
I
max
max
|
|
.
|
\
|

La V
max
aparente disminuye

K
[I]
+ 1
K
= ' K
I
m
m
|
|
.
|
\
|
m
) disminuye.


| |
|
|
.
|
\
|
+ +
I max
K
I
V
1
1
S
1
V
K
=
V
1
max
m
o

[ y = m x + b ]


Ejemplos. La inhibicin acompetitiva es rara en sistemas unirreactivos. Sin embargo
merece la pena considerarla porque es un ejemplo sencillo de adicin secuencial de
los ligandos enzimticos en un orden obligado. La inhibicin acompetitiva es comn en
sistemas multirreactivos.

Cintica de las enzimas alostricas
La cintica que se ha estudiado (de tipo hiperblico) no resulta aplicable a la totalidad
de las enzimas. Existen muchas enzimas de estructura oligomrica cuyas subunidades
se influyen mutuamente; es decir, la actuacin de una de ellas repercute en el
comportamiento de las dems. Como consecuencia de este fenmeno, la cintica de
estas enzimas suele ser ms compleja: en general, de tipo sigmoideo.

Cooperatividad: Ecuacin de Hill
La concentracin de sustrato puede influir en la velocidad de reaccin de las enzimas
reguladoras, dando lugar a la mencionada cintica sigmoidea.

El efecto cooperativo se atribuye a que la enzima presenta varios centros activos (uno
por cada monmero), ya que puede adoptar dos conformaciones espaciales distintas:
la forma R (relajada) ms activa, y la forma T (tensa) menos activa, en equilibrio
dinmico. La presencia del sustrato puede despla-zar el equilibrio, favoreciendo la
adopcin de una de ellas, de acuerdo con el esquema siguiente:


La ecuacin simplificada de Hill explica matemticamente la cintica sigmoidea al
suponer la capaci-dad preferente de la enzima para unirse simultneamente a n
molculas de sustrato, segn la ecuacin

Por un razonamiento anlogo al seguido con la deduccin de la ecuacin de Michaelis
se llega a lo si-guiente:

| |
| | S Km
S V
Vo
+
=
max

El sentido qumico de K
0.5
(anlogo al descrito para K
m
) es el de aquella concentracin
de sustrato que permite a la enzima trabajar a la mitad de la mxima velocidad. Al
operar matemticamente la ecuacin tenemos

P E + +
n
ES S n E
n n
0.5
n
max
[S] K
[S] V
V
+
=
( ) | | S V [S] K V
n
max
n
0.5
n
= +
| | S V V[S] VK
n
max
n
0.5
n
= +
| | V[S] - S V VK
n
n
max
0.5
n
=
[S] V) - (V VK
n
max
0.5
n
=
n n
0.5
n
max
[S] K
[S] V
V
+
=

Al aplicar logaritmos se obtiene

A n se le denomina coeficiente de Hill. Si su valor es 1, no existe cooperatividad; si es
mayor que 1, hay cooperatividad positiva; y si es menor que 1, la cooperatividad es
negativa. Sus valores habituales en las enzimas reguladoras oscilan entre 2 y 3

Efectores alostricos
Las enzimas alostricas modifican su actividad cataltica al fijar determinados ligandos
sobre el centro activo: sustrato natural, sustrato anlogo, inhibidores competitivos,
entre otros. Estos ligandos se podran denominar ligandos homotrpicos, pero con
frecuencia estos u otros compuestos pueden fijarse a centros diferentes del centro

V
[S] V) - (V
K
n
max
0.5
n
=

V
V) - (V

S
K
max
n
0.5
n
=
n
K
S
V
(
5 . 0 max

V
V
5 . 0
max
log log
V
V
log k n S n
V
=
b mx Y =

cataltico, llamados centros alostricos. Estos ligandos sern heterotrpicos y
tambin son capaces de modificar la actividad cataltica de las enzimas reguladoras.
Los inhibidores alostricos disminuyen o anulan la actividad cataltica de la enzima y
los activadores alostricos la aumentan.
La activacin o inhibicin puede afectar a diversos parmetros de la cintica
enzimtica. Entre los modelos clsicos se consideran los sistemas K en los que se ve
afectada la K
0.5
y los sistemas V, en los que resulta alterada la velocidad mxima.
En el esquema A es activador o modulador positivo e I es modulador negativo o
inhibidor.

En la figura anterior se representan las modificaciones cinticas producidas por un
activador (A) o un inhibidor (I) en los dos sistemas considerados.

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1Recopilado por Luz del Carmen Ornelas Hernndez Profesora de Bioqumica.

Instituto Tecnolgico de Morelia

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