You are on page 1of 20

UNIWERSYTET OPOLSKI Wydzia Przyrodniczo Techniczny Samodzielna Katedra Samodzielnej Katedry Biotechnologii i Biologii Molekularnej

PROJEKT Olga Kalinowska

PRODUKCJA KWASU CYTRYNOWEGO PRZEZ ASPERGILLUS NIGER SZCZEP C-12 METOD WGBN OKRESOW Praca wykonana pod kierunkiem dr in. Jadwigi Farbiszewskiej Kiczmy

SPIS TRECI WSTP...........................................................................................................................................3 WZE I........................................................................................................................................4 WZE II.......................................................................................................................................6 WZE III.....................................................................................................................................8 OBLICZENIA PODSTAWOWYCH PARAMETRW BIOSYNTEZY KWASU

CYTRYNOWEGO......................................................................................................................11 WZE IV...................................................................................................................................12 DYSKUSJA..................................................................................................................................15 WNIOSKI.....................................................................................................................................16 BIBLIOGRAFIA.........................................................................................................................17 SPIS RYSUNKW......................................................................................................................18 SPIS TABEL................................................................................................................................19

WSTP Niniejszy projekt dotyczy produkcji kwasu cytrynowego metod wgbn okresow. Metoda ta zostaa przez nas wybrana spord wszystkich metod stosowanych do produkcji kwasu cytrynowego, gdy pozwala na uzyskanie najwikszej wydajnoci procesu produkcyjnego. W celu wytworzenia produktu stosujemy fermentacj w bioreaktorze z cigym mieszaniem. Mikroorganizmem uytym do biosyntezy kwasu jest grzyb strzpkowy Aspergillus niger szczep C12. Wybr szczepu C12 jest uargumentowany badaniami laboratoryjnymi, w ktrych tene szczep uzyska najwysze wartoci wydajnoci produkcji kwasu cytrynowego. Wytwarzany w procesie fermentacji kwas zostanie wykorzystany w przemyle spoywczym jako: inhibitor enzymw, gwnie oksydaz powodujcych utlenianie polifenoli, co objawia si ciemnieniem owocw i warzyw, skadnik do produkcji napojw, sodyczy, owocw kandyzowanych i win, rodek zakwaszajcy i stabilizujcy.

W wyniku przeprowadzania jednego cyklu produkcyjnego otrzymamy 100 kg kwasu cytrynowego. Surowcem, ktry jest najczciej uywany w metodzie wgbnej jest sacharoza, mczki cukrowe, soki cukrownicze, hydrolizaty skrobiowe, melasa buraczana lub trzcinowa. W tym projekcie kwas cytrynowy bdzie wytwarzany przy uyciu odpadu cukrowniczego melasy. Taki wybr surowca uzasadniamy korzystnymi aspektami ekonomicznymi i dbaoci o rodowisko naturalne. Poniej przedstawiamy ideowy schemat produkcji kwasu z uwzgldnieniem poszczeglnych wzw technologicznych, ktre bd omwione szerzej w kolejnych czciach projektu. Przygotowanie
podoa WZE I Przygotowanie inokulum WZE II

para _ wodna
Fermentacja w bioreaktorze WZE III

powietrze
Wydzielanie kwasu cytrynowego WZE IV

Rys.1. Schemat produkcji kwasu cytrynowego metod wgbn okresow.

WZE I Wze I jest etapem, gdzie sporzdzane jest podoe do hodowli Aspergillus niger. Gwnym skadnikiem poywki jest melasa produkt odpadowy w produkcji cukru Cukrowni PUSTKW S.A. Wykorzystanie tego skadnika podyktowane jest wzgldami ekonomicznymi produktywno jest porwnywalna z wykorzystaniem cukru biaego jako substratu, natomiast koszty s nisze. Dodatkowo uycie melasy jest spowodowane trosk o stan rodowiska, gdy melasa jako produkt uboczny jest substancj o wysokim CHZT (50000 60000 mg O2/dm3). Przy przerobie burakw, melasa stanowi okoo 4% ich masy. W skad melasy wchodz cukry i wszystkie substancje niecukrowe nie usunite wraz z wysodkami i szlamem defekacyjnym podczas produkcji cukru. Jest ciecz ciemno brunatn, bardzo gst ( = 1,35 g/cm3) o swoistym zapachu z wyczuwalnym aromatem karmelu, sodk o gorzkim posmaku. Skad chemiczny melasy zaley od gatunku burakw, warunkw gruntowych i klimatycznych ich wegetacji a take rodzaju procesu technologicznego produkcji cukru [1].
melasa H2O H2SO4 Poywka melasowa do wza III

Rys. 2 Schemat wza I. Tab. 1 Skad melasy wykorzystanej do produkcji kwasu cytrynowego: skadnik Sucha substancja Cukry, w tym: Sacharoza Rafinoza Cukier inwertowany Azot ogem Substancje redukujce kwasy lotne Sole Mg i Ca pH Wspczynnik czystoci Kwasy organiczne Rafinoza Koloidy Popi, w tym: K2O CaO MgO P2O5 Na2O zawarto % 80 53 51 1,0 1,0 1,7 0,8 2,31 1,2 8,0 61 8,2 2,1 3,8 8,2 5,0 0,3 0,16 0,06 1,0 4

chlorki Karmel i melanoidy

1,6 1,6

Zawarto oglnego azotu powinna wynosi nie niej ni 1,6 %. Z azotowych zwizkw organicznych melasa zawiera gwnie betain, kwas asparaginowy i glutaminowy. Melasa zawiera skadniki koloidowe, zarwno w postaci zawiesin, jak i czstek rozpuszczonych. Maj one adunek ujemny (wytrcaj si przy odczynie kwanym, jaki jest wymagany do hodowli Aspergillus niger) jak i dodatni [2]. Zawarto skadnikw koloidowych waha si w granicach 0,2-6%. Wytrcaj si gwnie skadniki barwne, humusowe, karmelowe oraz melanoidy. Substancje barwne wystpujce w melasie to kompleksy pirokatechinowo elazowe, pochodzce z burakw, melanoidy (nadajce barw melasie, powstaj w procesie kondensacji cukru, zwaszcza inwertu z aminokwasami gwnie kwasem asparaginowym) i melaniny (produkt utlenienia polifenoli burakw). Intensywno zabarwienia zaley od pH i temperatury soku w cukrowni. Oglna ilo skadnikw mineralnych wyraona jest jako popi wglanowy i waha si w granicach od 7 do 11,5%. W skad jego wchodz K2CO3, Na2CO3 i CaCO3 . Melasy zawieraj lotne i nie lotne kwasy organiczne. Gwnym kwasem nielotnym jest kwas mlekowy, a ponadto wystpuj kwas cytrynowy, szczawiooctowy, szczawiowy oraz kwasy huminowe. W melasie wystpuj take zwizki biologicznie czynne, a wrd nich witaminy [3]. Tab. 2 Skad witamin oraz czynnikw wzrostu [3] skadnik Witamina B1 Witamina B2 Witamina B6 niacyna Kwas pantotenowy Kwas foliowy biotyna Zawarto [mg/100 g melasy] 130 41 540 5100 130 21 5,3

Melasa stanowi 10% skadu poywki. Ponadto, dodaje si inne sole nieorganiczne oraz wod. Oglna masa przygotowanego podoa to 1,2 . 104 kg.

Tab. 3 Skad poywki przygotowanej do hodowli Aspergillus niger:


skadnik Melasa, w tym: sacharoza Sole Mg i Ca Zawarto [%] 10 51 1,2 Masa [kg/104 kg poywki] 1000 510 12

Kwasy organiczne K2O CaO MgO P2O5 Na2O Witamina B1 Witamina B6 Niacyna Kwas pantotenowy K4Fe(CN)6 H3PO4 Wgiel aktywny Woda

8 4,5 0,3 0,16 0,06 0,8 0,13 0,54 0,51 0,013 6 0,2 2 81,8%

80 45 3 1,6 0,6 8,0 1,3 5,4 5,1 0,13 600 20 200 8180

Otrzyman poywk zakwasza si 1 M H2SO4(98%) do pH 2,6. Ilo potrzebna do osignicia wymaganego pH to 12,6 litra. Ilo ta moe si nieznacznie zmieni ze wzgldu na niestao pH pod wpywem czasu przechowywania melasy i temperatury [3]. Dlatego te, zarwno przed rozpoczciem procesu, jak i w trakcie, kwasowo jest cile kontrolowana. Grzyby Aspergillus niger wykazuj tolerancj pH 2,6 2,8. Niewskazane jest zbytnie podwyszenie kwasowoci ani doprowadzenie do pH powyej 3. Skutkiem mogoby by ograniczenie aktywnoci Aspergillus, a zatem mniejsza wydajno. Przygotowanie poywki polega na zmieszaniu odpowiednich iloci podanych skadnikw. Istotnym etapem jest sterylizacja. Wykonuje si j w temperaturze 121oC przez 30 minut. Obecno innych mikroorganizmw, (szczeglnie z rodzaju Saccharomyces) znacznie obnia wydajno.

WZE II W drugim wle, przygotowywanym rwnoczenie z wzem I przygotowuje si inokulum. Szczepem wykorzystywanym do produkcji jest szczep Aspergillus niger C12. Szczepy wyizolowane z naturalnego rodowiska charakteryzuj si najczciej ma zdolnoci 6
NH4NO3, KH2PO4 MgSO4. 7 H2O

wytwarzania kwasu cytrynowego. Otrzymanie wysoko produktywnych szczepw jest moliwe dziki wieloetapowej mutacji, skriningu, a take metod inynierii genetycznej. Szczepy aktywnie syntetyzujce kwas cytrynowy w procesie hodowli wgbnej, w poywce syntetycznej z sacharoz (cukrem biaym, handlowym), nie mog by stosowane w metodzie powierzchniowej (LFS) na poywce melasowej. Zbyt wysoka zawarto zwizkw mineralnych, aminokwasw i innych stymulatorw wzrostu w melasie powoduje nadmierna produkcj biomasy grzybni, przy rwnoczenie osabionej syntezie kwasu cytrynowego. Szczepy przemysowe wymagaj waciwych metod przechowywania zapewniajcych stabilno cech. Do powszechnie przyjtych dla Aspergillus niger naley liofilizacja bd przechowywanie suchych konidiw w temperaturze 4 oC, w mieszaninie ze sterylnym piaskiem, wglem aktywnym bd cytrynianem wapnia.

Konidia H2O

inokulum do wza III

Rys. 3 Schemat wza II Szczepy do wgbnego procesu biosyntezy kwasu cytrynowego w poywkach syntetycznych powinny by hodowane na agarze ziemniaczano-glukozowym o wartoci pH 6,0-7,0, co indukuje w konidiach aktywno podstawowych enzymw glikolizy. Szczep zastosowany w technologii produkcji kwasu cytrynowego pochodzi z Kolekcji Czystych Kultur Instytutu Biotechnologii Przemysu Rolno- Spoywczego w Warszawie. Jako podoe do wytworzenia szczepionki stosuje si podstawowe podoe hodowlane o skadzie podanym w tabeli 4. W celu przygotowania inokulum, do kolb paskodennych o pojemnoci 750 cm3 wprowadza si 100 cm3 podstawowego podoa i sterylizuje si w temperaturze 121oC przez 30 minut. Po ochodzeniu, wprowadza si konidia Aspergillus niger. Po godzinnym wstrzsaniu oznacza si stenia konidiw. Tak przygotowane zawiesiny inkubuje si w temperaturze pokojowej okoo 6 godzin. Wymagane jest wstrzsanie co pewien czas. W tym czasie nastpuje pcznienie konidiw, ktrymi nastpnie szczepi si hodowle [1]. Stenie konidiw w hodowli to 105/cm3. Dlatego te, poywk inokulacyjn po ocenie iloci, rozciecza si pynem fizjologicznym, albo dokonuje si przeszczepienia na skosy ziemniaczane i namnoenia grzybw do wymaganego stenia konidiw.

Tab. 4 Skad poywki do namnaania Aspergillus niger: skadnik Cukier biay NH4NO3 MgSO4 . 7 H2O KH2PO4 Woda Ilo [g/dm3] 150 2 0,2 0,2 1 dm3

Do hodowli na wysterylizowanej poywce melasowej przenosi si konidia w takiej iloci aby stenie w poywce wynioso 105. Nie jest moliwe jednoznaczne okrelenie stenia konidiw po hodowli inokulacyjnej, gdy potencja wzrostowy grzybw w duej mierze zaley od warunkw, od ich kondycji i od iloci konidiw, ktre posiadaj zdolno przeycia po liofilizacji. Szczepy otrzymane s bowiem w formie zliofilizowanej. Zakada si, i otrzymuje si inokulum o steniu 108 kom/cm3. Do hodowli waciwej (12 t poywki) dodaje si wic 1000 litrw inokulum. Podsumowujc; gwnym skadnikiem do namnaania grzybw jest sacharoza (cukier biay), podoe do produkcji kwasu cytrynowego oparte jest na melasie, ze wzgldw ekonomicznych. Stenie konidiw w poywce do produkcji kwasu cytrynowego to 105/cm3.

WZE III W III wle zachodzi fermentacja w bioreaktorze. Do produkcji kwasu cytrynowego stosowan metod jest hodowla wgbna okresowa.

poywka melasowa inokulum H2SO4 Surowy produkt do wza VI

Rys. 4 Schemat wza III W produkcji kwasu cytrynowego zastosowane zostay tradycyjne fermentory

zbiornikowe z mieszadem o poj. 12,5 m3. Bioreaktory te zostay wykonane ze stali kwasoodpornej oraz zostay wyposaone w oprzyrzdowanie pomiarowe

poywka inokulum powietrze


pH = 2,6 T = 32oC Surowy produkt

Rys. 5 Schemat bioreaktora z mieszadem mechanicznym do hodowli wgbnej, wykonanego ze stali nierdzewnej Proces hodowli okresowej wgbnej przebiega nastpujco. Do czystego bioreaktora wprowadzane jest 1,2104 kg podstawowego podoa hodowlanego. Kolejno zamykane s wszystkie otwory i krce, tak aby powietrze nie dostawao si do rodka. Na krcach, ktre doprowadzaj powietrze i odprowadzaj gazy pofermentacyjne umieszczone s filtry membranowe, ktre su do wyjaawiania powietrza. Jeli bioreaktor jest szczelnie zamknity, to naley podda go sterylizacji w temperaturze 121 C przez 30 minut. Jednoczenie poddany sterylizacji zostaje rodek przeciwpianowy, podoa zasilajce oraz we do pomp i inny sprzt. Nastpnie po sterylizacji wczane jest mieszanie, napowietrzanie oraz chodzenie. W wyniku przeprowadzonych zabiegw dochodzi do obnienia temperatury do okoo 32 C, kontrola temperatury jest moliwa dziki zamontowanej elektrodzie pomiarowej, ktra wczeniej zostaa wyjaowiona z uyciem 70% wodnego roztworu alkoholu etylowego. Pniej nastpuje uruchomienie i kalibrowanie aparatury pomiarowo-regulacyjnej, ktra suy do pomiarw oraz kontroli przebiegu procesu hodowli. 9

Kolejnym krokiem jest umieszczenie danej objtoci inokulum do podoa w bioreaktorze, tak aby dane inokulum zawierao 105/cm3 stenia konidiw. Po tym pobierana jest prba zerowa i wanie ten moment traktowany jest jako pocztek hodowli. Hodowla prowadzona w temperaturze 32 C, przy czym dochodzi do cigego mieszania oraz napowietrzania. Jeeli dojdzie do duego spadku aktywnoci oddechowej grzybni oraz braku przyrostu kwasowoci oglnej to wiadczy to o doprowadzeniu hodowli do koca. Czas trwania procesu biosyntezy, ktry liczony jest do chwili wyczerpania rda wgla trwa od 120 do 180 godzin w temperaturze 30-32C, stosujc kontrolowane napowietrzanie. Z hodowli okresowych zostay pobrane na pocztku prby zerowe, czyli nastpio to zaraz po wprowadzeniu inokulum do podoa. Kolejne prby zostay pobrane po kadej czwartej dobie hodowli. Objto pobranych prb wynosia 5 cm3. Nastpnie prbki zostay poddane analizie laboratoryjnej. W prbie zerowej zostao oznaczone pH, stenie konidiw, stenie sacharozy (S0). W prbach, ktre zostay pobrane w czasie hodowli oznaczone zostay: kwasowo oglna (K0), stenie kwasu cytrynowego (P), stenie sacharozy (S), a take obserwacji poddana zostaa morfologia grzybni. Gdy hodowla zostaa doprowadzona do koca zmierzona zostaa kocowa objto podoa (Vk), ktra znajdowaa si w kolbie, do ktrej wanie dodawano sumaryczn objto prb pobranych w czasie trwania hodowli (Vpr). Dziki temu uzyskano skorygowan objto kocow podoa hodowlanego (Vks), ktra posuy w kolejnych obliczeniach kocowych wynikw hodowli okresowych. Dodatkowo produktem ubocznym bya para wodna, ktra nie stanowi wikszych problemw [1].

Tab. 5 Ksztatowanie si podstawowych parametrw kinetycznych, ktre charakteryzuj wzrost biomasy, zuywanie sacharozy i biosyntez kwasu cytrynowego we wgbnych hodowlach okresowych Aspergillus niger C-12.

Ilo poywki Ilo inokulum Pocztkowe stenie sacharozy Kocowe stenie sacharozy rednia szybko objtociowa zuywania sacharozy

1,2 . 104 1000 612 14,57 4,27

kg dm3 3 kg/10 kg melasy kg/103 kg melasy kg/103 kg melasy h 1

Kocowe stenie biomasy rednia szybko objtociowa wzrostu biomasy Kocowe stenie kwasu cytrynowego rednia szybko objtociowa biosyntezy kwasu Cakowita wydajno biomasy Cakowita wydajno produkcji kwasu cytrynowego

61,2 0,44 413 2,96 10 % 67,6 %

g g/103 kg melasy h kg/103 kg melasy kg/103 kg melasy h

Rys.6. Wykres ilustrujcy zmiany stenia substratu, produktu i biomasy w czasie procesu OBLICZENIA PODSTAWOWYCH PARAMETRW BIOSYNTEZY KWASU

CYTRYNOWEGO Tab. 6 Podstawowe parametry biosyntezy kwasu cytrynowego w hodowli okresowej wgbnej
jednostka Parametr czas h Masa poywki kg Pocztkowe stenie kg sacharozy w podou

wzr mpo S0 =0,51% mpo Sk

obliczenia

wynik 140 12 000 612 14,57

12 000 . 0,51%
Na podstawie proporcji, korzystajc z wynikw laboratoryjnych

Kocowe stenie sacharozy w podou rednia szybko objtociowa zuywania sacharozy

kg

kg/m3h

Rts = 1

4,26

rednia szybko waciwa zuywania sacharozy Kocowe stenie biomasy rednia szybko objtociowa wzrostu biomasy Kocowe stenia kwasu cytrynowego rednia szybko objtociowa biosyntezy kwasu cytrynowego rednia szybko waciwa biosyntezy kwasu Cakowita wydajno biomasy Cakowita wydajno kwasu cytrynowego

kg/kg h kg/m3 kg/m3h kg/m3 kg/m3h kg/kg h % %

Qs = Xk RtX = Pk RtP = QP = YtX/S = YtP/S =


Na podstawie proporcji, korzystajc z wynikw laboratoryjnych Na podstawie proporcji, korzystajc z wynikw laboratoryjnych

0,03 61,2 0,44 413,8 2,96 0,048 10 67,6

WZE IV Wze IV obejmuje wszystkie procesy jednostkowe majce na celu wydzielenie kwasu cytrynowego z pynu pohodowlanego i standaryzacj jego parametrw do wartoci, ktre pocztkowo zostay przez nas okrelone. Metoda zastosowana przez nas do wydzielania kwasu cytrynowego z cieczy pofermentacyjnej jest metod klasyczn. Na pocztku nastpuje odfiltrowanie grzybni, ciecz pofermentacyjna jest ogrzewana do 70-75C i doprowadzana wodorotlenkiem wapnia do pH = 2,7 - 2,9 w celu wytrcenia wspsyntetyzowanego kwasu szczawiowego w postaci szczawianu wapnia, ktry nastpnie jest usuwany metod filtracji lub wirowania. Tworzcy si jednoczenie monocytrynian wapnia pozostaje w roztworze. Ogrzanie roztworu z wydzielonym osadem szczawianu wapnia do 90C zwiksza wielko jego krysztaw i przyspiesza mechaniczn separacj. Kwas cytrynowy jest wytrcany z cieczy pofermentacyjnej w postaci trudno rozpuszczalnej soli cytrynianu trjwapnia po neutralizacji do pH 7,0 (przy pH < 7,0 wzrasta rozpuszczalno soli, a przy pH > 7,0 pogarszaj si warunki filtracji oraz zwiksza si zawarto zwizkw barwnych powstajcych w egzotermicznej 1

reakcji cytrynianu trjwapnia z kwasem siarkowym(VI)). Odfiltrowane krysztay soli s przemywane wod o temp. 90C. Cytrynian trjwapnia w 32-33-procentowym. roztworze jest rozkadany kwasem siarkowym(VI) do kwasu cytrynowego i trudno rozpuszczalnego siarczanu(VI) wapnia (gipsu). Usunicie metali cikich z roztworu kwasu osiga si poprzez odmineralizowaniem na jonitach. W tym celu roztwr odbarwiony wglem aktywnym jest kierowany kolejno na kolumn z kationitem o silnie kwanych grupach funkcyjnych i na kolumn z anionitem o sabo zasadowych grupach. Krysztay kwasu cytrynowego otrzymane po krystalizacji w oczyszczonym roztworze zagszczonym w wyparkach prniowych do zawartoci 71-72% mas. w przeliczeniu na kwas bezwodny s odwirowywane, a nastpnie suszone w suszarkach fluidyzacyjnych i pakowane w worki [4].

Ciecz pofermentacyjna

H2O

Oddzielenie grzybni

Grzybnia

Ca(OH)2

Neutralizacja

H2O

Filtracja cytrynianu trjwapnia

Odciek

H2SO4

Rozszczepianie cytrynianu trjwapnia

H2O

Oddzielenie gipsu

Gips

Kationit Anionit Wgiel aktywny

Oczyszczanie na jonitach

Zagszczanie

H2O

Krystalizacja

Oddzielenie krysztaw

Suszenie i pakowanie

Krystaliczny kwas cytrynowy

Rys.7. Schemat wydzielania kwasu cytrynowego metod klasyczn [4]. DYSKUSJA Do przemysowej produkcji kwasu cytrynowego, stosowana jest gwnie metoda wgbnej hodowli okresowej Aspergillus niger, poniewa wystpuje wwczas najwiksza wydajno produkcji oraz mniejsze zagroenie zakaenia innymi mikroorganizmami. Zastosowanie szczepu Aspergillus niger C-12 pozwolio osign wydajno rzdu 68%. Szczep charakteryzuje si take du szybkoci produkcji kwasu cytrynowego (2,96 kg/1,2 .104 kg poywki/h), wysokim stopniem homofermentatywnoci oraz stabilnoci cech biochemicznych w czasie hodowli i przechowywania. Badania laboratoryjne, z zastosowaniem szczepu C-12 wykazay, e wanie metoda wgbna charakteryzuje si du szybkoci objtociow produkcji kwasu i wysok wydajnoci [1, 2]. Przewiduje si prace badawcze w celu zoptymalizowania warunkw, aby poprawa efektywnoci fermentacji zmierzaa do uzyskania maksymalnej szybkoci biosyntezy kwasu przez jak najduszy okres.

Analiza wynikw bada prezentowanych w wielu publikacjach [3] wykazaa, e kwas cytrynowy zaczyna si gromadzi w reaktorze w fazie intensywnego wzrostu grzybni (trofofazie), kiedy w podou byy obecne jony amonowe i azotanowe. Wyniki przekadaj si na produkcje kwasu w skali makro, opisan w tym projekcie. Najwiksza szybko objtociowa wzrostu biomasy uzyskuje si w drugiej dobie hodowli, wtedy te uzyskuje si najwiksz szybko objtociow biosyntezy kwasu. Due szybkoci, zarwno wzrostu jak i biosyntezy utrzymuj si do czwartej doby. Wwczas, stenie jonw azotanowych i amonowych, jest na tyle mae, e hamuje procesy. Wzrost biomasy jest nadal widoczny, lecz jego szybko malej , a do cakowitego ustania w 140 godzinie procesu. Szybko biosyntezy kwasu rwnie si obnia. Spowodowane jest to ze stopniow zmian skadu chemicznego podoa hodowlanego. Zwizki wymagane do wzrostu wystpuj w maych steniach, natomiast nagromadzona jest dua ilo produktw metabolizmu. W celu podtrzymania wysokiej szybkoci produkcji kwasu cytrynowego wielu publikacjach stosuje si dodatkowe zasilanie podoa hodowlanego rda azotu. Uzyskano nawet niemal dwukrotnie wysze kocowe stenie kwasu cytrynowego, w porwnaniu z hodowl okresow. Hodowle cige zasilane , stwarzaj jednak wiele problemw konstrukcyjnych oraz wysze koszty (dodatkowy zakup substratw) i trudniejsz izolacj.

WNIOSKI 1.
2.

Do produkcji kwasu cytrynowego stosuje si metod wgbn okresow. Zastosowany szczep Aspergillus niger C-12, wywodzcy si ze szczepu B-64-5

moe by z powodzeniem zastosowany do produkcji kwasu cytrynowego, gdy pozwala to na opacalno produkcji. 3. Podczas hodowli nie mona oddzieli od siebie fazy wzrostu grzybni i

nagromadzenia kwasu cytrynowego, poniewa intensywnemu przyrostowi biomasy towarzyszy proces biosyntezy kwasu. Najwiksz szybko produkcji kwasu uzyskuje si w trzeciej dobie hodowli w okresie szybkiego przyrostu.

BIBLIOGRAFIA [1] Pietkiewicz Jerzy, Biosynteza kwasu cytrynowego przez Aspergillus niger w warunkach jedno- i wielostopniowych hodowli cigych, Wydawnictwo Akademii Ekonomicznej im. Oskara Langego, Wrocaw 2002. [2] Wierzba S., Instrukcja do wicze z biotechnologii. Produkcja biomasy cz.2 Wersja 1.2, Opole 2010. [3] Olbrich H., The molasses, Fermentation Technologist, Institut fur Zuckerindustrie, Berlin 1963. [4] Bednarski W., Fiedurk J., Podstawy biotechnologii przemysowej, Wydawnictwo NaukowoTechniczne, Warszawa 2007 1

SPIS RYSUNKW Rys.1. Schemat produkcji kwasu cytrynowego metod wgbn okresow...........................3 Rys.2. Wykres ilustrujcy zmiany stenia substratu, produktu i biomasy w czasie procesu.11 Rys.3. Schemat wydzielania kwasu cytrynowego metod klasyczn.....14

SPIS TABEL Tab.1. Skad melasy wykorzystanej do produkcji kwasu cytrynowego...4 Tab.2. Skad witamin oraz czynnikw wzrostu..5 Tab.3. Skad poywki przygotowanej do hodowli Aspergillus niger...5

Tab.5.Ksztatowanie si podstawowych parametrw kinetycznych, ktre charakteryzuj wzrost biomasy, zuywanie sacharozy i biosyntez kwasu cytrynowego we wgbnych hodowlach okresowych Aspergillus niger C-1210 Tab.6. Podstawowe parametry biosyntezy kwasu cytrynowego w hodowli okresowej wgbnej...12

You might also like