BIOLOGA DE PLANTAS II

PRTICA 2

DETERMINACIN DEL POTENCIAL DE SOLUTO POR EL MTODO PLASMOLTICO

Para conocer y entender la forma en la cual se mueve el agua en una planta, entre los tejidos y entre sus clulas, se han desarrollado una serie de tcnicas. Una de ellas est basada en el potencial qumico del agua y se denomina Potencial Hdrico (H2O) = la energa potencial del agua. El potencial hdrico parte del principio de saber cual es la capacidad de un sistema de ceder agua a otra parte del sistema. Por ejemplo de una clula a otra, de un conjunto de clulas a otras, de una parte de la planta a otra. Para ello se parte de considerar los componentes de una clula vegetal tpica: vacuola, pared celular y citoplasma. La vacuola que abarca casi todo el volumen celular y contiene una solucin acuosa; el citoplasma con sus organelos formado por un coloide hidroflico y la pared que puede presionar sobre el contenido celular e inducir una presin hidrosttica dentro de la vacuola. De esta manera el H2O est conformado por: H2O = s + M +P s = potencial de solutos (depende del nmero de partculas disueltas en solucin) M = potencial mtrico (expresa la afinidad adsortiva del agua a las sustancias coloidales, por ejemplo a los materiales citoplasmticos y de la pared celular) P = potencial de presin (es la presin ejercida por la pared celular sobre la vacuola, tambin conocida como presin de turgencia) La plasmlisis es un fenmeno que tiene lugar en clulas vegetales vivas cuando las mismas se ponen en contacto con soluciones cuyo H2O sea menor al H2O en el interior de la clula. De acuerdo a esto las soluciones se clasifican dependiendo de si provocan plasmlisis, turgencia o no provocan cambios como hipertnicas, hipotnicas o isotnicas, respectivamente. El mtodo plasmoltico est basado en conocer que concentracin tiene una solucin que apenas comienza a provocar plasmlisis ya que bajo estas condiciones se puede decir que la concentracin de dicha solucin (expresada en trminos de potencial osmtico o de solutos) es igual al potencial de solutos en el interior de la clula, ya que: H2O exterior = H2O interior (p s) ext = (P - s ) int P ext = 0 ya que no hay membranas Por lo que: s ext = s int Considerando que las observaciones se realizan en clulas de diferentes cortes (con diferente contenido osmtico) que se sumergen en soluciones de distintas concentraciones, la solucin isotnica ser aquella que produce el 50% de plasmlisis. El potencial osmtico o de soluto de una solucin se define por: s = -RTCi Donde R = Constante de los gases (0.082 atm mol L K ) T = Temperatura absoluta (273K)
1 -1

P int = 0 porque comienza a ocurrir plamlisis

C = Concentracin (mol L ) i = Coeficiente isotnico Valores de coeficiente isotnico de soluciones de NaCl (sustancia que se ioniza) a concentraciones -1 0.1 a 0.7 M L Concentracin 0.1 Coeficiente. 1.80 isotnico 0.2 1.78 0.3 1.75 0.4 1.73 0.5 1.70 0.6 1.68 0.7 1.66

-1

Metodologa 1. Haga cortes de epidermis inferior de hojas de Rhoeo y pngalos en una caja petri con agua destilada unos minutos. 2. Saque y seque los cortes con papel filtro y colquelos en una caja petri con solucin 0.7 M NaCl 3. Despus de 5 minutos observe al microscopio ptico 3 campos en 3 cortes diferentes. Utilice un aumento tal que el nmero de clulas por campo no sea ni demasiado pequeo ni demasiado grande. Observe el grado de plasmlisis; cuente el nmero total de clulas del campo y las plasmolizadas (solamente considere las coloreadas). Obtenga promedios de ambos datos. Se considera que hay plasmlisis cuando hay un separacin del citoplasma de la pared celular. 4. Repita la misma operacin para las concentraciones 0.6 a 0.1 M de NaCl. 5. Calcule para cada concentracin el % de clulas plamolizadas 6. Grafique el % de clulas plamolizadas vs concentracin. Trace una curva y busque a que concentracin se obtiene el 50% de clulas plamolizadas y su correspondiente coeficiente isotnico en la tabla. 5 7. Calcule el potencial de solutos expresando los resultados en Pascales (1 atm = 10 Pascales.

Materiales: Navajas de rasurar con uno o dos filos 7 Cajas Petri (pueden utilizar las de la prctica de germinacin, bien limpias y secas). Resultados Concentracin 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 Campos Campos Campos Campos Campos Campos Campos 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 total de

Nmero clulas Nmero de clulas plasmolizadas

Promedio del total de clulas Promedio del total de clulas plasmolizadas % clulas plasmolizadas s =

Conclusiones