UNIVERSIDAD DEL MAGDALENA

FACULTAD DE ESTUDIOS GENERALES

INFORME DE LABORATORIO N7
DIVERSIDAD CELULAR I. CLULAS PROCARIOTAS: TINCIN Y SU OBSERVACIN


Integrantes:

XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX



Presentado a:

XXXXXXXXXXXXXXXXXXX
BILOGO MAGSTER


LUNES, 17 DE ABRIL DE 2012
SANTA MARTA DTCH


DIVERSIDAD CELULAR I.
CELULAS PROCARIOTAS: TINCIN Y SU OBSERVACIN
DIVERSITY CELL I. PROKARYOTES CELLS: AND OBSERVATION
1

Pineda Tern, Alma G.*
Universidad del Magdalena.
Facultad de ciencias de la salud
Programa de Medicina

Resumen- Es estudio de las bacterias juega un papel fundamental en la biologa celular,
debido a la importancia del funcionamiento de estas en los procesos industriales, agrcolas y
mdicos-investigativos. El presente laboratorio tiene como finalidad observar algunas
caractersticas que presentan las bacterias que se desarrollan en bebidas lcteas, aplicar
una tcnica de coloracin para estudiar la estructura de las bacterias y si es posible su
fisiologa y finalmente reconocer las diversas formas y tamaos de las diversas clulas
procariotas contenidas en un frotis de kumis, bucal y vaginal. La metodologa de llevar a
cabo mediante una serie de facetas que incluyen la preparacin de un frotis, la tcnica para
la coloracin de bacterias (coloracin simple y tcnica de Hucker) y finalmente el anlisis a
travs de un frotis vaginal y bucal y un frotis de kumis de la relacin existente entre clulas
eucariontes y procariontes.

Palabras clave- Frotis, bacteria, lactococo, cocos, vibrin, estreptococos, estafilococos,
tincin, coloracin.

Abstract. The study of bacteria is essential in cell biology because its importance of the
operation of these industrial processes, agricultural and medical-research. This laboratory is
intended to point out some characteristics that have the bacteria growing in milk drinks, a
staining technique applied to study the structure of bacteria and if possible their physiology
and finally recognize the different shapes and sizes of the various cells prokaryotes contained
in a smear of buttermilk, oral and vaginal. Methodology carried out through a series of facets
including a smear preparation, the technique for staining bacteria (simple staining technique
and Hucker) and finally through an analysis vaginal and buccal swab kumis of the relationship
between eukaryotes and prokaryotes cells.
1


Keywords- Smears, bacteria, lactococo, coconuts, vibrio, streptococcus, staphylococcus,
staining, coloring.
1


INTRODUCCIN
El avance en el estudio de las clulas procariotas (dentro de la biologa celular) ha ido de la
mano con la mejora del microscopio y las tcnicas de microscopa
2
. Ya en 1676 Antonio Van
Leeuwenhoek, un pulidor de lentes holands, mezcl pimienta con agua y despus de una o
dos semanas observ una gota de esta infusin haciendo uso del microscopio simple, de
este modo fueron descubiertas las bacterias
2
, las cuales son importantes debido al papel que
cumplen en el mbito de la industria, la medicina, y la agricultura; la mayora de las bacterias
son unicelulares, sin embargo tienen la tendencia a la agregacin. Morfolgicamente (de
acuerdo a su forma), las bacterias se pueden clasificar en: COCOS cuando tienen forma
redondeada o esfrica, BACILOS cuando tienen forma de bastn, ESPIRILOS en forma de
espiral, VIBRIN cuando su estructura es anloga a la de una coma; cuando hay
agregaciones se pueden denominar ESTREPTOCOCO si los cocos se disponen linealmente
y ESTAFILOCOCOS si se agrupan en forma de racimos
3
. LAS TINCIONES para observar
las bacterias se preparan en soluciones acuosas y orgnicas de colorantes que confieren
una gran variedad de colores a los microrganismos y materiales biolgicos, y permiten
demostrar las funciones fisiolgicas de los microrganismos; en este caso, el objetivo es
observar algunas caractersticas de las bacterias que interactan en bebidas lcteas, aplicar
una tcnica de coloracin para estudiar la estructura de las bacterias y finalmente reconocer
las diversas formas y tamaos de las clulas procariotas
4
.

MATERIALES Y REACTIVOS
Los implementos usados para el siguiente laboratorio se han clasificado en tres grupos. 1)
De laboratorio: asa microbiolgica, caja de Petri, beaker, toallas de papel secante, aceite de
inmersin, microscopio, portaobjetos, bata de laboratorio, guantes, goteadores y mechero. 2)
Reactivos: Azul de metileno, solucin colorante de cristal violeta, colorante de Gram. 3)
otros: Kumis o yogurt, clulas bucales y vaginales, libreta de apuntes, gua de laboratorio y
bolgrafo.

MTODOS
A) preparacin de un frotis: Se limpia el porta objetos y los implementos a utilizar (si es
necesario esterilizar algunos, se procede), Se agrega kumis a una caja de Petri la cual
se manipula con la mano derecha de modo que solo se levante un poco, unos 40o
50 . Se toman dos beaker y se les vierte agua, se ingresa el asa microbiolgica a uno
de ellos, seguidamente se esteriliza en asa de inoculacin al ponerse en contacto con
la llama azul del mechero, tomando esta una coloracin rojiza, luego, se sumerge el
extremo esterilizado del asa, en uno de los beaker con agua (preferiblemente el que
no ha sido utilizado) y de aqu se procede a maniobrar la caja de Petri y a retirar con el
asa una muestra de kumis para hacer un frotis; la muestra de kumis se vierte sobre el
portaobjetos en forma de zig-zag, una sola vez, (proceso de extendido del material)
acto continuo se acelera el secado manteniendo la lmina a 15 centmetros sobre la
llama del mechero y finalmente se fija la muestra pasando el frotis seco tres veces con
rapidez y minuciosidad sobre la llama para que al momento de agregar el reactivo y
verter agua, la muestra no se arrastre (VER FIGURAS 1.1). B) 1- Coloracin simple
tincin sencilla: Se toma el frotis anterior y se ubica en un soporte de tinciones, se
vierten sobre la muestra fijada 3 gotas del colorante azul de metileno y se deja actuar
durante 1 minuto, luego se lava con agua (botella de lavado) hasta que el colorante
sobrante se fluya fuera, se pasa papel absorbente bajo el porta objetos para no daar
la muestra y se seca rpida y minuciosamente la misma encima del mechero, acto
continuo se observa al microscopio con el objetivo 100X donde se emplea el aceite de
inmersin y se procede a determinar y describir la forma y disposicin y la relacin de
tamaos entre las distintas bacterias del kumis (VER FIGURA 1.2). B) 2- Coloracin
de Gram o tcnica de Hucker: Se prepara un frotis segn la tcnica antes descrita, se
pone el portaobjetos en un soporte para tinciones, seguidamente, se cubre con
solucin de cristal violeta y se deja actuar durante 1 minuto, se procede a lavar
suavemente con agua, una vez hecho esto se cubre con lugol y se deja actuar durante
1 minuto, una vez cumplido el plazo se lava del mismo modo anterior, se vierte etanol
al 95% (decolorante de gram) y se deja actuar durante 30 segundos moviendo
suavemente la lmina, luego se sigue lavando hasta que esta no arrastre ms
colorante, se lava con agua, acto seguido se cubre con solucin de fuscina de gram y
se deja actuar durante un minuto, se lava, se seca y se observa con el objetivo 100X
en aceite de inmersin, se determina la forma, la disposicin y la relacin de tamaos
de las diversas bacterias (VER FIGURA 1.3 1.4 1.5). Las bacterias Gram+ se
vern de color azul-violeta y las Gram- rosadas. Se determina su forma, disposicin y
se detectan dos tipos de bacterias: ESTREPTOCOCO, la cual forma largas cadenas
de cocos lineales clulas esfricas y es responsable de la acidificacin y los
LACTOBACILOSBULGAROS compuesto por clulas bacilares largas a las cuales se
les atribuye la transformacin de la leche en yogurt. C) Relacin entre clulas
procariontes y eucariontes: Se toma un palillo de dientes y se realiza un frotis sobre el
epitelio interno de la mejilla y se coloca sobre un portaobjetos zigzagueando sobre l,
seguidamente se tie con azul de metileno, se observan los resultados y se describen
(VER FIGURA 1.8). Se toma un copito y se hace un frotis vaginal, el cual luego de
ubicarse en el portaobjetos se observa y se establece una comparacin entre las
clulas procariontes de kumis y las eucariontes de los dos ltimos frotis (ver figura
1.7).

RESULTADOS Y FIGURAS

PROCEDIMIENTO A) MONTAJE DE UN FROTIS:

(Figura 1.1)
(izq-der) beaker con agua destilada, caja Petri con kumis, beaker con asas microbiolgicas,
mechero de bunsen y kumis, Implementos en disposicin para hacer el frotis.
Toma: Martes, 10 de abril de 2012, 12:23:18 p.m. (por Alma Pineda Tern)


PROCEDIMIENTO B1 COLORACIN SIMPLE





(FIGURA 1.2)
14X
Se notaron los estafilococos de color azul debido
al colorante utilizado (azul de metileno).
Toma: Martes, 10 de abril de 2012, 2:23:18 p.m.
(por Guillermo Jimenez)







PROCEDIMIENTO B2 COLORACIN DE GRAM/ TCNICA DE HUKER



(Figura 1.3)
Frotis en solucin de cristal violeta
Toma: Martes, 10 de abril de 2012, 02:11:20 p.m. (por Alma Pineda Tern)



(Figura 1.4)
Frotis en lugol
Toma: Martes, 10 de abril de 2012, 12:23:18 p.m. (por Alma Pineda Tern)




(FIGURA 1.5)
Fijacin del frotis luego de haber agregado la fiscina
Toma: Martes, 10 de abril de 2012, 12:23:18 p.m. (por Alma Pineda Tern)


(FIGURA 1.6) (FIGURA 1.7)
Observacin de Observacin de frotis
Frotis vaginal en 40 X bucal en 100X

Fuente: http://ctadesegundo.blogspot.com/2011/03/practica-de-laboratorio-formas.html
10:29a.m martes



CONCLUSION: En sntesis, la tincin es un proceso que permite observar las bacterias, y se
preparan en soluciones acuosas y orgnicas de colorantes que confieren una gran variedad
de colores a los microrganismos y materiales biolgicos, y permiten demostrar las funciones
fisiolgicas de los microrganismos; en este caso, se cumpli el objetivo, que consisti en
observar algunas caractersticas de las bacterias que interactan en bebidas lcteas, aplicar
una tcnica de coloracin para estudiar la estructura de las bacterias y finalmente reconocer
las diversas formas y tamaos de las clulas procariotas (del kimis) y eucariotas, en el frotis
bucal y en el frotis vaginal.

5. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

1. por qu deben usarse coloraciones para observar microrganismos?
Rta/ La tincin es un mtodo utili zado para estudiar mi crorgani smos ya que se
observa la morfologa, est ructura y agrupaci n microbiana que exhibe las
muestras patolgicas l igeramente modificadas. Asimismo, es de anotarse que
este tipo de tincin toma un cristal i zado y un puente como base o sustento para
su observacin. Tambin se usan para resaltar las estructuras de las clulas por el
distingo que proporcionan las tinturas dismiles empleadas en el uso. Sobre la tincin cido
alcohol resistente, decir que se emplea para teir e identificar los microrganismos cuyo gnero es
identificado dentro de las microbacterium. Asimismo, se logra la visualizacin y el distingo que tiene
con el resto en cuanto a la pared celular se refiere. Con esta tincin, las acido alcohol
resistentes se tieran y visualizarn de color rojo, mientras tanto las no cido alcohol
resistentes lo harn en azul. Por ultimo, entre delas tinciones estructurales podramos
encontrar la tincin de cpsulas, importantsimo para observar el factor de virulencia
bacteriana.
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2. Para qu se usa la coloracin de azul de metileno?
Rta/ Esta coloraci n se usa para observar bacterias y levaduras las cuales
difieren desde el punto de vista qumico de su medio exterior y por eso se tien contrastando con
su alrededor. Del mismo modo, l as pr opi edades de l a par ed cel ul ar de l as
bact er i as l es dan l as l l amadas pr opi edades col or at i vas, si endo el azul de
met i l eno un r eact i vo no espec f i co ( t i e absolutamente todas las bacterias).
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3. Segn Gram como se dividen las bacterias?
Las bacterias se dividen en Gram positivas y Gram negativas. Tras la tincin, las bacterias
Gram positivas retienen el tinte y se colorean de violeta, mientras que las bacterias Gram
negativas liberan el tinte y se tien de color rosado. Las especies Gram positivas tienen
paredes celulares ms gruesas que l as Gram negati vas. El conocimiento de si
una enfermedad est ori ginada por una bacteria Gram positi va o Gram negati va
ayuda al mdico a prescribir el antibitico adecuado.
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4. Por qu se debe enfriar el asa antes de usarla?
Par a que el asa al t ener una t emper at ur a mayor no pueda mat ar a l as
bact er i as encontradas en el medio de cultivo por lo tanto debe procederse a enfriar.
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5. Cmo se clasifican las bacterias segn su forma?
Rta/ Describa las bacterias presentan una amplia variedad de tamaos y formas. La mayora presentan
un tamao diez veces menor que el de las clulas eucariotas, es decir, entre 0,5 y 5m. De
todas formas, podemos distinguir cuatro tipos de bacterias:

COCOS BACILOS

VIBRIOS ESPIRILOS

Coco: Tienen formas de esferas. (Diplococo: cocos en gr upos de dos) ; ( Tet r acocos:
en gr upos de cuat r o) ; ( est r ept ococos: cocos en cadenas) y
( Est af i l ococos, cocos en agr upaci ones i r r eg ul ar es o en r aci mo)
Bacilo: en forma de bastoncillo.
Vibrio: ligeramente curvados.
Espirilo: En f or ma hel i coi dal r gi da o en f or ma de tirabuzn.
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6. Por qu se dice que la coloracin con azul de metileno es una coloracin simple y
directa, y con Gram es una coloracin diferencial?
Como las coloraciones son de acuerdo a la complejidad, stas se subdividen en 2 tipos que
son la tincin simple y la tincin diferencial. En el primer tipo de tincin se llama as porque
slo se usa un solo colorante, que puede ser azul de metileno. Con este tipo de tincin se
puede crear un contraste con el medio donde se hace el frotis o tincin y se
observa la morfologa y la disposicin bacteriana. La importancia esta en que es muy fcil de
apl i car . Por ot r o l ado l a t i nci n di f er enci al es aquel l a donde se usa ms
de un colorante. Con esta tincin se puede verla morfologa, el tamao y la organizacin de
las bacterias adems categorizar los microrganismos en varios grupos, segn su afinidad
con el col or ant e que se est ut i l i zando. Ahor a, con l a t i nci n de GRAM
se puede diferenciar las bacterias en dos grupos: bacterias GRAM positi vas y
bacterias GRAM Negativas. Eso va a depender de si retienen o no el colorante cristal
violeta o el colorantes afranina. La capacidad que tengan de retener un colorante o
no va a depender de la composicin de la pared celular de la bacteria.
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7. Cul es la diferencia entre cpsula y capa mucosa en las bacterias?
La capa en bact er i as Gr am posi t i vas envuel ve a l a par ed cel ul ar ,
f or mada por el ensamblaje regular de subunidades idnticas de protenas o
glucoprotenas. En Gram negati vas la capa S se une a l a membrana externa,
mientras que el Gram positi vas lo hace al peptidoglucano. En muchas Arqueas es la
nica capa que rodea al protoplasto, por lo que en ellas cumple funciones de autntica pared
celular. En cambio la cpsula se puede definir como una estructura superficial que
presentan muchas bacterias en sus ambientes naturales, consistente en acumulacin de
material mucoso o viscoso, situado externamente respecto de la pared celular (o de la capa S y de la
vaina).
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8. Cul es la composicin qumi ca de la cpsula bacteriana?
En general, el material capsular se compone de macromolculas asimtricas que, en muchos casos
constan de una serie de unidades repetitivas: polisacridos o polipptidos.

Cpsulas polisacardicas:
A) Heteropolisacridos aninicos, cuyas unidades repetitivas constan de azcares(osas),
amino azcares, cidos urnicos, polioles (en muchos casos con radicales fosfato, formiato,
succinato, etc.).
B) homopolisacridos neutros,

Cpsulas polipeptdicas ( s l o e n c o n t r a d a s e n e l g n e r o bacillus) . Es t n
formadas por glutamil-polipptidos. As p. Ej., en Anthracis, El pptido es slo ded-glutmico
.Las cpsulas y capas mucilaginosas bacterianas constituyen el llamado

Antgeno k (capsular). Una misma especie puede constar de distintas razas, cada una de
ellas comn ag k di st i nt i vo, di st i ngui bl e del de l as dems por su
composi ci n qu mi ca y sin imunorreacti vidad. Por ejemplo, en la escheri chia
coli.
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9. Qu t i po de ant i bi t i co se conocen par a bact er i as GRAM
posi t i vas y GRAM negativas?
Existen multitud de clasificaciones de los antibiticos. La ms habi t ual l os agr upa
en funcin de su mecanismo de accin frente a los organismos infecciosos. Algunos lesionarla pared de
la clula; otros alteran la membrana celular, la mayor parte de ellos inhiben la s nt esi s de
ci dos nucl ei cos o pr ot e nas, l os pol mer os const i t uyent es de l a cl ul a
bacteriana. Otra clasificacin agrupa a los antibiticos en funcin de las bacterias contral as
que son ef i caces: est af i l ococos, est r ept ococos y Escher i chi a col i , por
ej empl o. Tambin se pueden clasificar en funcin de su estructura qumica, diferenciando
as las penicilinas, cefalosporinas, aminoglucsidos, tetraciclinas, macrolidos, sulfamidas u otros.
Mecanismo de accin.
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Los antibiticos pueden lesi onar de forma selecti va la membrana celular en al gunas
especies de hongos o bacterias; tambin pueden bloquear l a sntesis de protenas
bacterianas.
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AGRADECIMIENTOS
A la universidad del Magdalena por el apoyo prestado

REFERENCIA BIBLIOGRFICAS
[1] http://translate.google.com/?hl=es&tab=mT#. pg 1, 3. 01:24 a.m martes 17/04/2012
[2] http://www.slideshare.net/nini_lafarga/apuntes-microbiologia-2034216 01:27 a.m martes
17/04/2012
[3] http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap01/01_03_05.htm
01:32 a.m martes 17/04/2012
[4] http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm 02:39 a.m martes
17/04/2012
[5] http://samantiqa.blogspot.es/ 03:29 a.m martes 17/04/2012
[6] http://www.oocities.org/tallerdecienciascia1/Documentos/Generalidades_bacterias.html
03:40 a.m martes 17/04/2012
[7] http://es.scribd.com/doc/52968250/Marco-teorico 03:49 a.m martes 17/04/2012
[8] Docente: Bilogo y Magster Willinton Barranco Prez Martes 10 de Abril de 2012
[9] Microsoft Encarta 2009. 1993-2008 Microsoft Corporation. Reservados todos los
derechos. 17/04/2012

[10] CALLEN J. C. 2000. Clulas eucariotas. Biologa Celular 1. 38 39 p.p. 17/04/2012
[11] http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap01/01_03_05.htm
01:32 a.m martes 17/04/2012
[12] http://www.slideshare.net/nini_lafarga/apuntes-microbiologia-2034216 01:27 a.m martes
17/04/2012
[13] http://www.oocities.org/tallerdecienciascia1/Documentos/Generalidades_bacterias.html
03:40 a.m martes 17/04/2012.