Prctica sangunea

1.

Obtencin

de

una

muestra

Puncin venosa
Material: Jeringas y agujas endovenosas de todas las medidas. Tubos de vacio o Vacutainer ( Con EDTA). Torundas de algodn Alcohol etlico al 70 % Ligadura o cinta elstica Toalla Contenedor para residuos Biolgicos Infecciosos- Punzocortantes Guantes Oxalato sdico

Preparacin: Para realizar esta puncin elegimos una de las venas que tenemos en el antebrazo, la ms visible, o palpable (entre la baslica, ceflica o medial cubital). La puncin puede ser a lo largo de todo el brazo, aunque es recomendable que se haga en la zona de la fosa del codo. Pero no se debe de llevar a cabo la puncin si la zona tiene algn tipo de herida ya sean cortes, quemadurasetc. Para llevar a cabo la puncin se debe de llevar puesta una bata y guantes para evitar mancharse o infectar la zona. Tambin se debe de tener todo el material preparado para evitar por ejemplo tener la aguja incrustada y echar en falta un algodn. Mtodo: Pedir al paciente que se siente con el brazo elegido apoyado sobre la mesa. Utilizar el algodn para limpiar la zona con alcohol. Preparar la aguja. Colocar la goma elstica para hacer el torniquete, 2 o 3 dedos por encima de la fosa del codo. Asegurarse de que la aguja no tiene aire, y realizar la puncin con pulso seguro en unos 45 en relacin al brazo. Extraer la sangre hasta llegar al lmite de la aguja. Retirar el torniquete Situar un algodn encima de la punta de la aguja y retirar la aguja rpidamente del brazo.

 Doblar el brazo del paciente situando un algodn en la zona de extraccin de sangre.

Puncin Capilar Materiales: Lanceta Capilar Portaobjetos

Mtodo: Primero se desinfecta la zona para evitar infeccin Se masajea el dedo elegido para realizar la puncin Se realiza la puncin en los dedos Se recoge la sangre con una pipeta y se coloca la muestra de sangre en un portaobjetos. Se coloca una tirita o una gasa en la zona.

Prctica 2: Obtencin de un frotis sanguneo.

Objetivos: Conocer las propiedades de las diferentes tinciones usadas para realizar el frotis sanguneo. Conocer y entender cada uno de los pasos necesarios para realizar el frotis sanguneo. Familiarizarse con el material de laboratorio y aprender su manipulacin Realizar un frotis sanguneo con sangre del alumno, etiquetarlo y guardarlo para analizarlo ms adelante.

Material: Dos portaobjetos. Lanceta para puncin digital Mtodo: Primero se desinfecta la zona para evitar infeccin Se masajea el dedo elegido para realizar la puncin Se realiza la puncin en los dedos Se coloca una tirita o una gasa en la zona

 Se recoge la sangre con una pipeta y se coloca una gota de sangre en un portaobjetos, pero en un extremo de este. Deslizar por encima del portaobjetos, otro portaobjetos, por la parte anterior a la gota y con una inclinacin de 45. Al encontrarse el 2 portaobjetos con la gota y expandirla, deslizarlo de manera continuada (sin frenar-reanudar) en el sentido contrario de manera a dejar sobre el porta una fina capa de sangre. Antes de llegar al final del portaobjetos dejar de expandir la sangre levantndolo. Dejar secar la preparacin.

Tincin del frotis sanguneo:

Tincin de Giemsa

Material:
Frotis sanguneo Colorante de Giemsa (Constituido por una mezcla de azul de metileno, eosina y varios azures en solucin acuosa). Alcohol metlico absoluto (libre de acetona) Microscopio de inmersin Aceite de inmersin Tampn PBS Agua destilada

Mtodo:
Dejar secar el frotis a temperatura ambiente Fijar el frotis con alcohol metlico absoluto. Dejar durante 3 minutos para que se fije bien. Meter el porta en una solucin de Giemsa /tampn PBS (1 volumen de colorante y 9 de PBS) y dejarlo durante 10 minutos. Lavar el frotis con agua destilada y dejar secar. Poner el cubreobjetos sobre la preparacin. Fijaremos la preparacin con DPX.

Prctica 3: Recuento Celular Sanguneo

Objetivos: Conocer el concepto de hemograma. Conocer los valores normales del hemograma Conocer los mtodos bsicos de recuento celular. Realizar un recuento celular con la cmara de Neubauer y anotar los resultados. Conocer los valores patolgicos de Leucocitos y hemates y su importancia clnica Familiarizarse con la nomenclatura de estos trastornos (anemia, poliglobulia, leucopenia y leucocitosis).

Material: Sangre capilar Lquido de dilucin: PBS (Solucin salina fisiolgica) para visualizar eritrocitos Lquido de dilucin (Lquido de Trck) para visualizar leucocitos Pipetas dilutorias o microcapilar calibrado. Cmara cuentaglbulos (de Neubauer) Microscopio

La pipeta dilutoria tiene una dilatacin proximal que permite realizar una dilucin 1/100. Si solo se enrasa la pipeta hasta 0,5 el valor de dilucin ser 1/200. Mtodo: Desinfectar el dedo con alcohol que va a ser punzado. Con una lanceta, llevar a cabo la puncin en un lateral de la punta del dedo (es recomendable en el lateral en vez de en el centro), presionar el dedo y masajearlo para que la sangre fluya. Coger sangre con una pipeta calibrada a 0,5 l y meterla en los tubos eppendorf que contienen lquido de Turk y PBS. Poner 1 l de sangre en un portaobjetos, a continuacin colocar un cubreobjetos y mirar por el microscopio los leucocitos. Coger sangre mezclada con lquido de Trk y colocarla en la cmara de Neubauer hasta que quede llena la parte central. Colocar un cubreobjetos. Tras el recuento de leucocitos, lavar convenientemente la cmara de Neubauer. Repetir el mismo mtodo con el PBS.

Mtodo de recuento:

Mirar al microscopio la cmara de Neubauer, y realizar el recuento segn los cuadraditos. Para no confundirnos contando, deberemos incluir aquellos ncleos que estn en el interior del cuadro y slo aquellos que estn entremedio de los lmites del cuadrado superior o izquierdo. Contar los leucocitos en un cuadrado grande (En rojo), aplicar la frmula una vez contados los leucocitos. El valor normal est entre 5000 y 10000. La frmula es: ()

Prctica 5: Hematocrito
Objetivos de la prctica: Entender los conceptos de hematocrito, volumen cropuscular medio y hemoglobina cropuscular media y su importancia en la prctica clnica. Entender los clculos que relacionan el hematocrito y el nmero de hemates para obtener el volumen cropuscular medio y el volumen de hemoglobina cropuscular media. Conocer las tcnicas para la obtencin del hematocrito. Realizar el hematocrito con la sangre del alumno.

El ndice hematocrito:

Es el porcentaje del volumen de la sangre que ocupa la fraccin de los glbulos Rojos. Las cifras normales de hematocrito son: ombres: 40,8 a 50,3% ujeres: 36,1 44,3% Material:

Centrifuga de alta velocidad (8.000 12.000 rpm) Plastilina Tubos capilares de 75 mm de largo y 2 mm de dimetro interior y heparina desecada Lector de hematocrito

Mtodo: Realizaremos una puncin capilar con una lanceta, siguiendo el procedimiento que hemos detallado en la prctica 1. Se puede utilizar tambin sangre venosa haciendo una puncin venosa que tambin hemos descrito en la prctica 1. Tras haber extrado la sangre llenamos el capilar. Colocamos plastilina en uno de los extremos del capilar para taponarlo. Lo situaremos en la centrifugadora de forma que no se derrame la sangre. Centrifugamos la sangre de 5 a 10 min. Medimos el hematocrito.

Volumen Corpuscular Medio (VCM)

VCM=

( )

Concentracin de la hemoglobina cropuscular media (CHCM)

CHCM=

(/100 )100 (%)

Prctica 6: Velocidad de sedimentacin globular

Objetivos de la prctica: Comprender el concepto de VSG y su importancia clnica. Conocer los procesos en que la VSG se altera. Aprender a realizar una lectura de VSG a la 1 hora. Realizar la lectura de la VSG del alumno.

Velocidad de Sedimentacin: Se basa en medir a qu velocidad sedimentan los eritrocitos tras extraer una muestra sangunea. Se utiliza para diagnosticar enfermedades inflamatorias o crnicas, y para realizar el seguimiento de stas y otras enfermedades. La sedimentacin globular se realiza en tres etapas: 1. Hemaglutinacin o tendencia a formar pilas de monedas. 2. Sedimentacin de los hemates hacia el fondo del recipiente. 3. Acmulo de los hemates en el fondo del recipiente. Material: Mtodo: Llevamos a cabo una extraccin venosa con agujas que contengan anticoagulante. Una vez tenemos la sangre, el tubo se pone en el soporte Westerngreen para que no se mueva, y apuntamos la hora. Al cabo de una hora se mide la distancia de sedimento en el tubo, para esto se calcula la diferencia entre el volumen de eritrocitos y el total de sangre (que es los eritrocitos sedimentados ms el plasma.) Sangre total. Solucin anticoagulante (citrato trisdico 109 mmol/L) Pipeta de eritrosedimentacin (pipeta de Westergreen) longitud 300 mm y calibre 2,5 mm. En su superficie tiene grabada la escala en mm. Soporte que inmovilice la pipeta en posicin vertical. Cronmetro

Interpretacin de los resultados.La VSG en nios es inferior a 15 mm. En adultos varones menor de 14 mm. En mujeres adultas menor de 20 mm. La VSG vara segn edad y sexo. Hay situaciones fisiolgicas que tambin la pueden modificar como el embarazo. En condiciones patolgicas el aumento de protenas plasmticas sobretodo IgM propios de procesos agudos, enfermedades reumticas y la presencia de para protenas determinan un aumento de la hemaglutinacin y por tanto aumento de la VSG.

Prctica 7: Fisiologa de la Hemostasia.

Objetivos de la prctica: Conocer las pruebas para el estudio de las diferentes vas coagulacin y su significado clnico.

Adquirir los conceptos de tiempo de sangra, tiempo de trotrombina, tiempo de cefalina y tiempo de trombina. Aprender los pasos para realizar las tres tcnicas. Procesos que alteran las pruebas de coagulacin. Determinar el tiempo de cefalina y de sangra del alumno.

Tiempo de Sangrado o Hemorragia

Concepto Esta tcnica mide el funcionamiento de las plaquetas que son las primeras en acudir para formar un tapn temporal. Material: Lanceta de puncin. Papel de secar. Cronmetro.

Mtodo: Se pincha al paciente. Calculamos el tiempo que tarda en dejar de sangrar.

Tiempo de protrombina o Tiempo de Quick Exploracin de la va extrnseca: Es el tiempo necesario para la coagulacin de un plasma recalcificado en presencia de un exceso de tromboplastina hstica. Material:

Plasma pobre en plaquetas a partir de sangre recogida en citrato sdico 0,1 mol/L en proporcin 1 volumen de citrato 9 volmenes de sangre. Suspensin de tromboplastina hstica. Aparato de incubacin clot 1 A. Imn activador del coagulo. Pocillos especiales para colocar muestra en incubacin.

Mtodo:

Llevamos a cabo una extraccin sangunea con una jeringa que contenga citrato. Colocamos el pocillo en la centrifugadora para saber la coagulacin sin que afecten las plaquetas. Pipeteamos 100 lambas de plasma que se localiza en la parte superior tras la coagulacin. Colocamos los pocillos en la incubadora a 37 para imitar la temperatura del cuerpo. Ponemos a 0 la centrigugadora para que quede a. Introducimos 200

lambas de solucin de tromboplasmina.

Medimos el tiempo que tarda en aparecer el cogulo.

Interpretacin Si la tromboplastina es adecuada, el valor correspondiente al plasma testigo debe variar entre 12 y 14 segundos. Valores de referencia: Tiempo de protombina: 12.00 - 14.00 Actividad de la protombina: 110% - 85%

Prctica Sanguneos.

8:

Determinacin

de

grupos

Objetivos de la prctica. Comprender el concepto de grupo sanguneo y conocer los tipos sanguneos ms importantes. Conocer la importancia de determinar el grupo sanguneo en la terapia transfusional y el sistema de compatibilidades e incompatibilidades transfusionales. Determinar el grupo sanguneo ABO y Rh del alumno. Determinacin del sistema ABO Material: Mtodo: Realizamos una extraccin sangunea. Colocamos una gota de reactivo con suerto anti-A en el porta marcado con la letra A, hacemos lo mismo para los reactivos anti-b y anti-D. Ponemos una gota de sangre en cada porta y mezclamos cada gota con el reactivo utilizando la punta de la pipeta. Si la sangre aglutina con el suero A, podemos decir que es del grupo A, si lo hace con el suero B, ser grupo B, si lo hace con suero A y B ser grupo AB, y si no lo hace con ninguna ser grupo 0. sangre total suero anti-A suero anti-B suero anti-A1 Portaobjetos

La sangre problema es del grupo Rh+ si aglutina a los 3 minutos con el suero anti-D. La sangre problema es del grupo Rh- si no aglutina a los 3 minutos con el suero anti-D.