Universidad Nacional Mayor De San Marcos

Universidad del Per, Decana de Amrica FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA E.A.P. DE FARMACIA Y BIOQUMICA Departamento Acadmico de Qumica Bsica y Aplicada

INFORME I

D4 I

INFORME I RECONOCIMIENTO Y ANLISIS DE FENITONA SDICA.

CALIXTO FLORES, David ESPINOZA MINAYA, Mara Isabel ROMERO BUSTINZA, Isabel SENZ HOLGUN, Vanessa

MESA 4

QUMICA MEDICINAL

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INTRODUCCIN
La fenitona sdica es un antiepilptico de uso comn. Es un compuesto aprobado por la FDA en 1953 para su uso en convulsiones. La fenitona acta bloqueando la actividad cerebral no deseada mediante la reduccin de la conductividad elctrica entre las neuronas, bloqueando los canales de sodio sensibles al voltaje. Como bloqueador de los canales de sodio cardacos, la fenitona tiene efectos como agente antiarrtmico. Su espectro antiepilptico es similar al de la carbamazepinay ms limitado que el del valproato: es eficaz frentea convulsiones tnico-clnicas generalizadas y frente acrisis parciales, y no lo es frente a ausencias, mioclonas,ni convulsiones febriles. La fenitona represent un notable avance en el tratamientode la epilepsia y contina utilizndose ampliamenteen el tratamiento de las epilepsias parciales. Sinembargo, est siendo sustituida como primera opcin detratamiento por la carbamazepina y el valproato, especialmenteen nios y en mujeres, debido a sus efectos secundariosy a la dificultad en ajustar su dosis.La fenitonaes uno de los pocos antiepilpticos en los que puedeempezarse el tratamiento con la dosis estndar de300 mg/da o 5 mg/kg/da en adultos y con 5-10 mg/kg/daen el nio, repartidos en dos tomas al da, sin necesidadde aumentar gradualmente la dosis; sin embargo, la granvariabilidad individual en su metabolismo y la existenciade una cintica no lineal saturable hace muy difcilajustar la dosis, por lo que debe recurrirse a la monitorizacinde los niveles sricos y a la utilizacin de nomogramasespeciales. Inhibe los canales de sodio, bloqueando selectivamentelas descargas de alta frecuencia. Adems, la fenitona regula la actividadde la ATPasa-Na+/K+ y tiende a restablecer eldesequilibrio inico provocado por un exceso de despolarizacin.A concentraciones altas inhibe la entradade calcio durante la fase de despolarizacin y su movilizacinintracelular, interfiriendo con los sistemas dependientesde la calmodulina y de los nucletidos cclicose inhibiendo la liberacin de neurotransmisorestanto excitadores como inhibidores. Acta ms en cortezacerebral que en diencfalo. Afecta ms las neuronasnormales que propagan las descargas que las delfoco epilptico y las que descargan anormalmente msque la transmisin normal, careciendo de accin sedante.

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MARCO TERICO
Nombre DCI: Estructura Qumica: Fenitona Sdica

Nombre Qumico:Sal monosdica de 5,5-difenil-2,4-imidazolidinodiona Frmula:

Peso molecular: Sntesis:

274,25 Se trata el benzoaldehdo con una solucin de cianuro sdico, dos molculas de benzoaldehdo se condensan (condensacin benzonica) en una molcula de benzona, la que luego se oxida a bencilo con cido ntrico o sulfato de cobre. El bencilo se calienta con rea en presencia de etxido o isopropxido de sodio para formar fenitona sdica.

Benzona Benzaldehdo Urea

Bencilo

Bencilo

etxido de sodio Fenitona Sdica

Solubilidad:

Soluble en agua y en alcohol, prcticamente insoluble en cloruro de metileno.

Anlisis microscpico: Cristales amorfos

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ANALITO: Tabletas de Fenitona Sdica

Fecha de anlisis: Lugar:

15 de abril del 2011. Laboratorio de Qumica Medicinal de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos.

Forma farmacutica: Tabletas. Concentracin: N de Lote: 100 mg 10102654

Fecha de vencimiento:Octubre del 2012.

OBJETIVOS DE LA PRCTICA:
Determinar la concentracin y naturaleza del analito Comprobar si la muestra cumple con las especificaciones de la Farmacopea Inglesa. Reconocer los procedimientos de los anlisis cualitativos mediante reacciones de identificacin necesarios para controlar el buen estado de la muestra. Reconocer los procedimientos de los anlisis cuantitativos necesarios para controlar el buen estado de la muestra.

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MATERIALES Y METODOS
A. Materiales Tabletas de Fenitona sdica Pipeta Cuba cromatogrfica Capilar Sistema de Solventes (Agua/alcohol) Reactivo de Mayer Reactivo de Dragendorff Formol cido sulfrico Microscopio.

B. Mtodos Anlisis cualitativo Para el anlisis cualitativo del analito se realizaron tres pruebas: Reacciones de reconocimiento Reaccin de Le Rosen Prueba con el Reactivo de Le Rosen: A la muestra triturada en una cpsula blanca de porcelana se le aadi el reactivo de Le Rosen en cantidad de 2 a 3 gotas hasta evidenciar cambio de coloracin.

mg de Fenitonasdica + gta de formol + gta de cido sulfrico

Coloracin marrn

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Reaccin de Dragendorff

Prueba con el reactivo de Dragendorff: A 1 mL de la muestra disuelta en una solucin de alcohol y agua, se le aadi el reactivo de Dragendorff en cantidad de 2 a 5 gotas hasta notar cambio de coloracin.

Miligramos de solucin problema

2 gotas de reactivo de Dragendorff

Precipitado naranja

Reaccin de Mayer
Prueba con el Reactivo de Mayer: A 1 mL de la muestra disuelta en una solucin de alcohol y agua, se le aadi el reactivo de Mayer en cantidad de 4 a 5 gotas hasta notar cambio de coloracin.

Miligramos de solucin problema

2 gotas de reactivo de Mayer

Precipitado blanco

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Anlisis cuantitativo Se procedi por el mtodo de valoracin de bases en medio no acuoso. Para el anlisis cuantitativo se utiliz volumetra de bases en medio no acuoso, para lo que se procede a estandarizar el cido perclrico tomando como patrn primario al biftalato de potasio, donde se obtuvo una normalidad de 0.1 N. Luego se procede a titular la fenitona sdica, para lo cual se pulveriza la tableta con ayuda del mortero y pilon, luego se procede a colocar el polvo dentro del matraz, se agrega cido actico y disolver; aadir 5 gotas de Naftol bencena (indicador) y proceder a titular con el cido perclrico previamente estandarizado, la solucin cambiar de un color rojo a uno verde. Debido a ser una titulacin en medio no acuoso se utiliz como valorante el cido perclrico, este mtodo se basa en el nitrgeno amnico (que se encuentra encerrado en el crculo); en la titulacin se puede observar las siguientes reacciones:

H N

+ CH3COOH

CH3COO- +
O N H

O Na

HClO4 + CH3COOH CH3COO- + CH3COOH2+

CH3COOH2+ + ClO4 2 CH3COOH

Por consiguiente el gasto obtenido del cido perclrico es igual a la cantidad de Fenitona sdica que hay en la muestra problema.

Anlisis microscpico Se procedi a la disolver la tableta en agua, luego se realiz un filtrado con la finalidad de separar las partculas groseras de los cristales en solucin. Se depositel filtrado en un portaobjetos y se procedi a secar. Una vez evaporada toda el agua se coloc una lmina cubreobjetos y se llev la muestra para su observacin en el microscopio. Se observaron cristales amorfos con bordes irregulares.

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Anlisis Cromatogrfico Segn farmacopea:

La fase mvil de la cromatografa es una mezcla filtrada y desgasificada de agua, metanol, acetonitrilo, Solucin de trietilamina al 1% y cido actico (500:270:230:5:1). Para el estndar se disuelve una cantidad de ER Fenitona USP pesada con exactitud en la mezcla anterior, hasta obtener una solucin con una concentracin conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL.

Para valorar se pesa y pulveriza finamente no menos de 20 Tabletas, se transfiere una porcin del polvo, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 250 mg de fenitona, a un matraz volumtrico de 500 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mvil y mezclar.

Equipar un cromatgrafo de lquidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm x 25 cm rellena con material L1. La velocidad de flujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Cromatografiar el estndar y registrar el cromatograma. Para proceder se debe inyectar por separado volmenes iguales (aproximadamente 25 mL) del estndar y de la solucin que contiene las tabletas a analizar en el cromatgrafo, luego se registra los cromatogramas y se mide las respuestas de los picos principales. La cantidad en mg de C15H12N2O2 en la porcin de Tabletas tomada se calcula por la frmula: 500C(rU/rS)

En donde C es la concentracin en mg por mL de ER Fenitona USP en la solucin estndar; rU y rS son las respuestas de los picos obtenidas a partir de la solucin a valorar y la solucin estndar respectivamente. La eficiencia de la columna no es menor de 6500 platos tericos; el factor de asimetra no es mayor de 1,5 y la desviacin estndar relativa para inyecciones repetidas no es ms de 2,0%. En la prctica: Sin embargo en la prctica se utiliz agua-alcohol (3:1) como fase mvil, un cromatofolio para fase estacionaria, solucin de tabletas de fenitona sdica en agua y estndar de fenitona y como revelador vapores de yodo.

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Anlisis Espectrofotomtrico Transiciones electrnicas en molculas orgnicas. Las bandas de absorcin en las regiones Ultravioleta y Visible que presentan los compuestos orgnicos se asocian con transiciones electrnicas en la capa de valencia. Los electrones involucrados en dichas transiciones corresponden a aquellos mas dbilmente atrados por el conjunto de ncleos atmicos que componen la molcula y cuyos estados pueden ser descritos a travs de orbitales moleculares que se expresan como combinaciones lineales de orbitales atmicos de la capa de valencia. Las transiciones electrnicas a orbitales moleculares ms externos dan lugar a las denominadas transiciones Rydberg presentes en el Ultravioleta de Vaco. Por otra parte las transiciones electrnicas que involucran a los electrones de las capas internas son muy energticas y se presentan en la regin de los rayos X del espectro electromagntico. Nuestro anlisis se reducir a las transiciones electrnicas en la capa de valencia. A estos efectos resulta conveniente recordar la clasificacin convencional de los orbitales moleculares en la capa de valencia de los compuestos orgnicos. Orbitales y *. Son orbitales moleculares localizados a lo largo del eje de unin de los tomos. Los orbitales generan una densidad electrnica elevada en la regin internuclear teniendo un carcter fuertemente enlazante. Los orbitales *, como todos los orbitales antienlazantes, presentan un plano nodal perpendicular al eje del enlace en la regin internuclear y tienen un acentuado carcter antienlazante. Orbitales y *. Estos orbitales se emplean en la descripcin de los enlaces mltiples. Las regiones de mayor densidad electrnica correspondiente a los mismos son aquellas colaterales al eje del enlace. El carcter enlazante o antienlazante de estos orbitales es menos acentuado que el de los orbitales .

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Orbitales n. Estos orbitales moleculares tienen un acentuado carcter local y describen pares electrnicos libres asociados con heterotomos (O, S, N, Hal). Energticamente tienen carcter no-enlazante.

Segn el esquema anterior las transiciones electrnicas posibles dentro de la capa de valencia son: 1. Transiciones *. Se presentan en todos los compuestos orgnicos. Son en general de gran energa (UV de vaco) e intensidad. 2. Transiciones * y *. Son posibles solo en compuestos insaturados. Son transiciones de baja intensidad (regiones de definicin de los orbitales involucrados diferentes)en el UV lejano. Carecen de inters prctico. 3. Transiciones n*. Se presentan en compuestos con heterotomos (O, N, S, Hal), generalmente en la regin cercana a los 200 nm. La intensidad es variable dependiendo de la naturaleza del orbital n. 4. Transiciones *. Presentes solo en compuestos insaturados. En ausencia de conjugacin estas transiciones se presentan en UV de vaco. Dan lugar a bandas intensas que `pueden aparecer en UV cercano si est presente insaturacin conjugada. 5. Transiciones n*. Presentes en compuestos insaturados con heterotomos (grupos carbonilo, nitro, azo, tiocarbonilo). Dan lugar a bandas dbiles usualmente en la regin UV-cercana (baja energa de transicin). Hidrocarburos saturados. Los hidrocarburos saturados presentan todos sus electrones de la capa de valencia en orbitales por lo tanto las nicas transiciones en ellos son las del tipo * que se presentan en el Ultravioleta de vaco. Estos compuestos son transparentes en toda la regin Ultravioletacercano y en el visible y son utilizados ampliamente como solventes. Compuestos con pares electrnicos libres.

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Los compuestos saturados que contienen heterotomos tales como oxgeno, nitrgeno, azufre o halgenos presentan transiciones de tipo n*. Estas transiciones se ubican generalmente en la regin cercana a los 200 nm dando lugar a la denominada absorcin final, un incremento en la absorcin hacia el lmite de deteccin del equipo a longitudes de onda inferiores a 200 nm, sin mximo definido. Las caractersticas de absorcin en esta regin dependen de la naturaleza especfica del heterotomo y en particular de la energa del par electrnico libre que disminuye al aumentar la electronegatividad. En los compuestos con azufre y yodo las bandas de absorcin de origen n* pueden aparecer con mximos bien definidos en la regin del UV-cercano. Compuestos aromticos. El cromforo aromtico es mucho ms complejo que los anteriormente estudiados. Esto se debe a la presencia de varios orbitales y * muy cercanos en energa (o degenerados) que hacen al modelo orbital de descripcin de las transiciones electrnicas poco viable. La interaccin electrnica juega Aqu un papel muy importante, complicando la descripcin de los estados del sistema Figura: Espectro UV del benceno en hexano. El benceno presenta en la regin UV tres bandas de absorcin de origen *. Estas bandas han recibido histricamente diferentes denominaciones (una definicin ms rigurosa, basada en los elementos de simetra molecular, queda fuera de este tratamiento).

1. Banda secundaria, bencenoide o (max = 254 nm max= 250). Esta banda de origen * resulta de muy baja intensidad por ser prohibida por simetra. Su presencia en el espectro se debe a la reduccin de simetra por movimiento vibracional (banda vibrnica) por lo que muestra una estructura fina vibracional caracterstica. La banda secundaria se hace ms intensa en los derivados bencnicos por reduccin de la simetra molecular. Asimismo se mantiene en los derivados bencnicos como una transicin de los orbitales locales del benceno por lo que su posicin muestra relativamente poca sensibilidad a la sustitucin (efectos batocrmicos moderados). 2. Banda primaria o p (max = 204nm max= 8800). Esta banda de origen * es tambin relativamente dbil pero mucho ms intensa que la anterior. Esta banda se desplaza batocromicamente en los bencenos sustituidos por presentar carcter de transferencia de carga entre el anillo aromtico y el sustituyente y puede llegar a sumergir a la ms dbil banda bencenoide. 3. Segunda banda primaria o (max = 184nm max= 68000).

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Esta intensa banda presente en el UV lejano puede desplazarse hacia el UV cercano en el caso de bencenos sustituidos por cromforos de extensa conjugacin (aromticos policondensados).

PARTE EXPERIMENTAL

Acidoperclrico

Gasto: 3.33 ml Clculos: mg = N x ml x Peq mg = 0.1 x 3.33 x 274

Muestra problema + cido actico (solvente) + naftolbencena (indicador)

mg = 91.27 mg/tab

Como se puede apreciar la cantidad de 91.27% de principio activo por tableta no cumple con los requisitos puestos en la farmacopea que dice que el valor debe variar entre el 95 % y el 105%.

RESULTADOS
Anlisis cualitativo: En el anlisis cuantitativo se obtuvo los siguientes resultados: Prueba con el reactivo de Dragendorff: Agregado el reactivo se form un precipitado de color naranja. Prueba con el Reactivo de Mayer: Se evidencia un cambio notorio de coloracin a amarillento. Prueba con el Reactivo de Le Rosen: Se forma una ligera cristalizacin de color amarilla notoria en la cpsula blanca.

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Anlisis cuantitativo: Valorante: HClO4 0.104 N Gasto = 3.2 mL. mg = N x mL x PEq mg = 0.104 x 3.2 x 274.25 mg = 91.25 100 mg Fenitona sdica 91.25mg Fenitona sdica 100% x M.P: Fenitona sdica Masa = 274.25 Peso equivalente = 274.25

Hay 91.25 % de Fenitona sdica por tableta.

Anlisis Cromatogrfico Se obtuvo el siguiente Rf para la muestra: RfMP = 0.3/3.2 = 0.09

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Anlisis Espectrofotomtrico

Ultravioleta: Absorcin 254: Transicin * del bencil (banda secundaria o )

Absorcin UV de Fenitona sdica: UV 254

Absorcin 260: Transicin n * del par de electrones del Oxgeno

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FENITONA EN HPLC
Bombas : (#3) Shimadzu LC-6 Detector : UV-VIS Shimadzu SPD6AV Horno :Shimadzu CTO-6A Columna analtica :ODS RP,150 x 4.6mm, 5mcm, Waters Controlador : Shimadzu SCL-6 Integrador :Shimadzu CR-6A Cromatopac Fase mvil: agua-metanol (50:50 v/v) Ajuste de ph=4,9 Buffer fosfato 0.052Mph=4,9 Membrana: 0.45mcm Millipore Flujo: 1ml/min Longitud de onda : 214 nm Temperatura :37+-1C

FENITONA EN IR
Absorcin infrarroja <460> en fase slida

Pesar exactamente alrededor de 300 mg de Fenitona Sdica y disolver en 50 ml de agua en una ampolla de decantacin.

Agregar 10 ml de cido clorhdrico 3 N y extraer con tres porciones sucesivas de 100, 60 y 30 ml, respectivamente, de una mezcla de ter y cloroformo 1 en 2.

Evaporar los extractos combinados y secar el residuo de Fenitona a 105 C durante 4 horas: el espectro de absorcin infrarroja de una dispersin en bromuro de potasio del residuo as obtenido debe presentar mximos slo a las mismas longitudes de onda que el de una preparacin similar de Fenitona SR FA.

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(3) Tensin =C-H (4) R2NH (2) -C=CAromtico (1)Amida Huella Digital

(1) La absorcin a 1650 cm-1 es intensa lo que probablemente nos indique la presencia de un grupo carbonilo (-C=O), pero a esta baja frecuencia sugiere que se trata de una amida. (2) , (3) La combinacin de la tensin aromtica C=C aproximadamente a 1600 cm-1 y la tensin =C-H por encima de 3000 cm-1 son diagnsticos sobre la presencia de un anillo aromtico. (4) Presenta una tensin N-H, cuando aparece esta tensin a una frecuencia q vara entre 3200 y 3500 cm-1 se est observando una amina primaria o secundaria; pero al presentar solo un pico se puede decir que se est presente a una amina secundaria (R2N-H).

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CONCLUSIONES

El porcentaje de fenitona sdica encontrado en un comprimido de 100mg analizado fue de 91.2704%, dicho valor no se encuentra dentro del rango establecido por la Farmacopea Americana; por lo tanto se concluye que los comprimidos de fenitona sdica procedentes del laboratorio Marfan. Corporacin Medco, no cumplen con las exigencias porcentuales de principio activo por comprimido establecidos. Las reacciones de identificacin cualitativa (Dragendorff, Mayer y Le Rosen) resultaron positivas, lo cual indica que efectivamente los comprimidos contienen fenitona sdica y no otro compuesto; puesto que dichas reacciones detectan el grupo funcional que distingue a la fenitona de otras sustancias qumicas.

DISCUSIONES
Las tres reacciones realizadas (Dragendorff, Mayer y Le Rosen) evidencian cambios notorios en la coloracin inicial de amarillo opaco original de la muestra a tonalidades diferentes e incluso ligera cristalizacin, esto evidencia la presencia de alcaloides que son el objetivo de reconocimiento de estas reacciones. Como se puede apreciar la cantidad de 91.24% de principio activo por tableta no cumple con los requisitos puestos en la farmacopea que dice que el valor debe variar entre el 95 % y el 105%.

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BIBLIOGRAFA
The United States Pharmacopeial Convention. Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica USP 30 NF 25. Baltimore: Port City Press; 2006. Ashnagar, A., GharibNaseri, and Amini, M. Synthesis of 5,5-diphenyl-2,4imidazolidinedione (Phenytoin) from Almond. ChemTech. 2009 March;1(1):47-52. L. G. Wade, Jr. Espectroscopa de infrarrojo y espectrometra de masas. Qumica Orgnica. 5ta ed. Madrid: Pearson Prentice Hall; 2004. p. 490-519. Flores, Jess. Frmacos antiepilpticos y anticonvulsivos. Farmacologa Humana. 3ra ed. Barcelona: Masson, S.A.; 1997. p. 489-511

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