Universidad veracruzana Facultad de Bioanlisis Bioqumica Laboratorio

Practica: No. 1 Espectrofotometra Fundamento: La espectroscopia o espectrofotometra en fsica y qumica es el estudio de los espectros. La espectroscopia se basa en que cada elemento qumico tiene su espectro caracterstico.

Los espectrmetros son instrumentos que generan, analizan y registran espectros. Aqu se ilustra el uso de un espectrmetro de absorcin para determinar el espectro creado por una sustancia desconocida. Las lentes del instrumento enfocan la luz, mientras que un prisma central la divide en el espectro de los colores que la constituyen. Los colores que aparecen en la pantalla representan las longitudes de onda no absorbidas por la muestra.

El espectrofotmetro se usa para medir la intensidad de un espectro determinado en comparacin con la intensidad de luz procedente de una fuente patrn. Esta comparacin permite determinar la concentracin de la sustancia que ha producido ese espectro. Los espectrofotmetros tambin son tiles para estudiar espectros en las zonas no visibles porque sus elementos de deteccin son bolmetros o clulas fotoelctricas. Los primeros se aplican especialmente al anlisis de espectros de infrarrojos, y los segundos al de espectros ultravioletas. Las redes de difraccin pueden

emplearse, igual que los prismas, tanto en los espectrgrafos como en los espectrofotmetros. El color es la sensacin resultante de la estimilacion de la retina por la luz en longitudes de onda comprendidas dentro del espectro visible. Los rayos de luz de diferentes longitudes de onda excitan a los mecanismos receptores del ojo en grados diferentes produciendo colores especificos, la longitud de onda en el rango visible para el ojo esta entre los 380 700 nm. Las longitudes de onda comprendidas a los extremos de ste rango no son detectados por el ojo humano. La radiacin electromagntica esta compuesta por paquetes discretos de energia llamados fotones y recorren un camino ondulante, describiendo en su trayectoria crestas y valles.

APLICACIONES DEL ANLISIS ESPECTRAL Anlisis qumico El espectro de un elemento determinado es absolutamente caracterstico de ese elemento. Sin embargo, elementos distintos producen en ocasiones lneas que estn muy juntas, lo que lleva a posibles errores. Por ejemplo, la lnea G de Fraunhofer, situada aproximadamente en 430,8 nm, corresponde a dos lneas diferentes, una debida al calcio, con una longitud de onda de 430,7749 nm, y la otra causada por el hierro, con una longitud de onda de 430,7914 nm. Lneas de Fraunhofer). Con un espectroscopio ordinario sera difcil distinguir estas dos lneas. Las otras lneas del calcio, sin embargo, son muy distintas de las otras lneas del hierro. Por tanto, la comparacin del espectro completo de un elemento con un espectro conocido simplifica su identificacin. Cuando se excita una sustancia desconocida mediante una llama, un arco voltaico, una chispa u otro mtodo apropiado, un anlisis rpido con un espectrgrafo suele bastar para determinar la presencia o ausencia de un elemento determinado. Los espectros de absorcin son muchas veces tiles para identificar compuestos qumicos.

Tcnica:

T1

T2

T3

T4

T5

T6

Fotocolormetro ABSORBANCIA

.4 .3 70 .2 .1 0 60

.5 50 40

.6 .7 30 .8 20 10 0 .9 1.0

TRASMITANCIA

80 90 100

Tabulacion: Fotocolormetro Tubos Absorbancia 1 0

Trasmitancia 100

Blanco

2 3 4 5 6

.800 .700 .530 .351 .215 .660

15 20 29 44 61 22

Tubo Problema

Graficacin:

Universidad veracruzana Facultad de Bioanlisis Bioqumica Laboratorio

Practica: No. 2 Mtodo de Dacie y Lewis Fundamento: Eritrocitos Los glbulos rojos, o clulas rojas de la sangre, tienen forma de discos redondeados, bicncavos y con un Los eritrocitos, o glbulos rojos de la micras. En dimetro aproximado de 7,5 sangre, son los transportadores primarios el ser humano y la mayora de los mamferos los eritrocitos maduros del oxgeno de clulas y de carecen de ncleo. En algunos vertebrados lasforma bicncava nucleados. La son ovaleslos tejidos y del corporales. La eritrocito es una adaptacin que hace que hemoglobina, una protena de las clulas rojas de la sangre, es el pigmento el sanguneo especial ms importanterea superficial, a travs dixido que y su funcin es de la transporte de el intercambia el oxgeno por de
carbono, sea la mxima posible. Su forma y la membrana plasmtica flexible del eritrocito, le permite penetrar en los capilares ms pequeos.

oxgeno desde los pulmones a las clulas del organismo, donde capta dixido de carbono que conduce a los pulmones para ser eliminado hacia el exterior, su periodo de vida es de 120 dias.

En condiciones normales los eritrocitos se encuentran rodeados de un lquido extracelular isotnico, el plasma. Sin embargo, si se introducen en un medio hipotnico o disolvente puro, tienden a tomar agua y aumentar su volumen, producindose el fenmeno de turgencia, que lleva consigo la destruccin total de la clula a sta ruptura se le conoce con el nombre de hemlisis. Material y equipo: Fotocolormetro corning filtro verde. Centrfuga Clnica. 7 tubos de ensaye. Jeringa. Ligadura y torunda de alcohol Gradilla. Pipetas. Dos mililitros de sangre con una gota de EDTA (anticoagulante). Soluciones salinas amortiguadoras con fosfatos con un pH de 7.4 de las siguientes concentraciones: 0.85%, 0.55%, 0.50%, 0.45%, 0.35% y 10% Tcnica: Siete tubos a) Depositar 5ml. De solucin salina a cada tubo, con distintas concentraciones. -

5 ml.

0.10%

0.35%

0.40%

0.45%

0.50%

0.55%

0.85%

b) Colocar 0.05 ml. De sangre a cada tubo, agitar y dejar reposar. Reposar durante 30 minutos

0.05 ml de sangre a cada uno

Agitar

c) Centrifugar y aspirar el sobrenadante.

d) Lectura de absorbancia en el fotocolorero. ABSORBANCIA

.4 .3 70 .2 80 .1 0 90 100 60

.5 50 40

.6 .7 30

TRASMITANCIA

20 10 0

.8 .9 1.0

Tabulacin: Tubos 1 2 3 4 5 6 7 Resultados: Tubos 1 2 3 4 5 6 7 Grfica: Observaciones: Porcentaje normal de hemlisis. Solucin salina % Hemlisis % 0.30% 97 100 0.35% 90 99 Resultados 87.0 91.6 81.6 37.0 0 1.14 Concentracin 0.30% 0.35% 0.40% 0.45% 0.50% 0.55% 0.85% Absorbancia 0.870 0.800 0.710 0.333 0.0 0.01 Trasmitancia 13 15 19 47 100 98

0.40% 0.45% 0.55% Universidad veracruzana Facultad de Bioanlisis Bioqumica Laboratorio

50 95 5 45 0

Practica: No. 3 Escala calorimtrica de pH Objetivo: Aplicacin de la ecuacin de Henderson Hasselbalch e interpretar el mecanismo de accin de las soluciones amortiguadoras en presencia de cidos y lcalis.

Fundamento: pH, trmino que indica la concentracin de iones hidrgeno en una disolucin. Se trata de una medida de la acidez de la disolucin. El trmino (del francs pouvoir hydrogne, 'poder del hidrgeno') se define como el logaritmo de la concentracin de iones H+ (protones) cambiado de signo: pH = -log [H+], donde [H+] es la concentracin de iones H+ en moles por litro. Debido a que los iones H+ se asocian con las molculas de agua para formar iones hidronio, (H3O+), el pH tambin se expresa a menudo en trminos de concentracin de iones hidronio. En agua pura a 22 C de temperatura, existen cantidades iguales de iones H3O+ y de iones hidroxilos (OH-); la concentracin de cada uno es 10-7 moles / litro. Por lo tanto, el pH del agua pura es -log (0.107), que equivale a 7. Sin embargo, al aadirle un cido al agua, se forma un exceso de iones H3O+ en consecuencia, su concentracin puede variar entre 10-6 y 10-1 moles / litro, dependiendo de la fuerza y de la cantidad de cido. As, las disoluciones cidas tienen un pH que vara desde 6 (cido dbil) hasta 1 (cido fuerte). En cambio, una disolucin bsica tiene una concentracin baja de iones H3O+ y un exceso de iones OH- y el pH vara desde 8 (base dbil) hasta 14 (base fuerte).

La concentracin molar del agua se obtiene dividiendo el nmero de gramos de agua contenidos en un litro entre el peso molecular gramo, o sea, 1000 / 18 = 55.5 molar. Dado que la disolucin inica del agua es: Constante de ionizacion del agua: Kw es el producto de las concentraciones molares de los iones H y OH- a una temperatura en particular. H2OH + OH Kw = [H] [OH] = 1.0X10-14 H2O H+ + OH-

La importancia del conocimiento del pH radica en que determina varias de las caractersticas de la estructura y actividad de las macromolculas biolgicas, y por lo mismo determina la conducta de las diferentes clulas. As en nuestro organismo, el pH del plasma sanguneo y del liquido intersticial debe mantenerse entre 7.3 y 7.4 para que se conserve normal la actividad celular. Los lquidos intracelulares del msculo, por ejemplo, tienen un pH de 6.1 y los del hgado de 6.9; las secreciones del estmago tienen un pH de 1.2 a 3.0 y las del pncreas de 7.8 a 8.0 (Esquema 1). Para mantener estos valores constantes el organismo utiliza las llamadas soluciones buffer. Esquema 1: Escala de pH 1 2 3 4 5 6 7 neutra 8 9 10 11 12 13 14

cida pH Solucin Sangre L. intracelulares del msculo Hgado Estmago pncreas

alcalina

Ecuacin de Henderson Hasselbalch La cual nos permite calcular la modificacin del pH que puede producir el par amortiguador, cuya formula es: pH = pK + [cido] log
[sal]_

Material y equipo: Tubos de ensaye de 13 X 100. Pipetas graduadas de 1.2 y 5ml. Gradilla metlica. Colormetro.

Tcnica:

1 2 3 9 8 7 1 gota a todos. 1 gota a todos. 10 ml. A todos.

4 6

5 5

6 4

7 3

8 2

9 1

Naranja de metilo. HCl NaOH (ml) H2O (destilada)

Resultados: Ecuacin de Henderson Hasselbalch La cual nos permite calcular la modificacin del pH que puede producir el par amortiguador, cuya formula es: pH = pK + log [cido] Serie de tubos Tubo 1: [1]_ [9] pH = 3.7 + log Tubo 2: [2]_ pH = 3.7 +[8] log Tubo 3: [3]_ pH = 3.7 +[7] log Tubo 4: = 3.3 = 3.09
[sal]_

= 2.7

[4]_ pH = 3.7 +[6] log

= 3.5

Tubo 5: [5]_ pH = 3.7 +[5] log Tubo 6: = 3.7

[6]_ pH = 3.7 +[4] log Tubo 7: [7]_ [3]

= 3.8

pH = 3.7 + log Tubo 8:

= 4.0

[8]_ [2] pH = 3.7 + log Tubo 9:

= 4.3

[9]_ [1] pH = 3.7 + log

= 4.6

Propiedades fsicas: En la serie de tubos con HCl se observ que el color disminuy de intensidad del tubo 1 al 9 y en la serie de NaOH, el color se intensifico del tubo 1 al 9. Tabulacin: Tubos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Grfica: pH 2.7 3.09 3.3 3.5 3.7 3.8 4.0 4.3 4.6 Absorbancia

Universidad Veracruzana Facultad de Bioanlisis Bioqumica (laboratorio) Prctica: No.4

Determinacin de glucosa Fundamento: Glucosa, azcar monosacrido, de frmula C6H12O6. Se encuentra en la miel y en el jugo de numerosas frutas. El nombre alternativo azcar de uva proviene de la presencia de glucosa en las uvas. Se produce en la hidrlisis de numerosos glucsidos naturales. La glucosa est presente en la sangre de los animales. Es un slido cristalino de color blanco, algo menos dulce que el azcar destinado al consumo. Las disoluciones de glucosa giran el plano de polarizacin de la luz a la derecha; de ah el otro nombre alternativo dextrosa (del latn dexter, 'derecha'). La glucosa cristaliza en tres formas diferentes y cada una de ellas gira el plano de polarizacin de la luz en distinto grado. Es un cuerpo de sabor dulce, muy soluble en agua, pero poco soluble en los disolventes orgnicos, y no es voltil. Cristaliza con una molcula de agua en forma de prismas monoclnicos o bien anhidra en cristales rmbicos (p. f., 146,5 C). Presenta birrotacin. Es reductora y se oxida con gran facilidad. Es fermentada por las zimasas segregadas por la levadura de la cerveza. La glucosa se forma en la hidrlisis de numerosos hidratos de carbono, como la sacarosa, maltosa, celulosa, almidn y glucgenos. La fermentacin de la glucosa por la accin de levaduras produce alcohol etlico y dixido de carbono. Industrialmente, la glucosa se obtiene en la hidrlisis del almidn bajo la accin de cido diluido, o ms frecuentemente, de enzimas. Su aplicacin ms importante es como agente edulcorante en la elaboracin de alimentos. Tambin se emplea en curtidos y tintes, y en medicina para el tratamiento de la deshidratacin y alimentacin intravenosa.

Molcula de glucosa: (representacin lineal)

Reactivos:

Filtrado de Folin. Sol. Cuproalcalina. Sol. Fosfomolibdica. Sol. Patron de glucosa equivalente a 200 mg. / 100m.

Tcnica:

Agregar patron glucosa

0.25

0.5

Solucin cuproalcalina 1 ml. Mezclar y ebullir 5 min.

0.25

0.5

Tabulacin:

Tubos 1 2 3 4 5 6 7 Tubos 1 2 3 4 5 6 7 Grfica:

Patron de glucosa Agua destilada 0 1 0.25 0.25 0.5 0.5 1 0 0 0 0 0 0 0 Absorbancia 0 0.03 0.05 0.08 0.07 -

Filtrado de Folin 1 1 1

Universidad Veracruzana Facultad de Bioanlisis Bioqumica (laboratorio) Prctica: No.5 Medicin de la presin parcial simulada de CO2 pulmonar alveolar Objetivo: Establecer la importancia del mecanismo respiratorio en el ajuste de la ventilacin para mantener la presin de CO2 alveolar constante. Fundamento: La regulacin respiratoria del equilibrio acido base constituye un sistema de amortiguacin de tipo fsico de importancia casi igual a los sistemas amortiguadores. A pesar de la amortiguacin de la sangre, se produce cierta desviacin del pH normal cuando existen factores que aumentan y disminuyen la ventilacin pulmonar. En primer lugar, el centro respiratorio es estimulado debido a un aumento en la presin de CO2 en sangre y de acuerdo con la ecuacin de Henderson est conducira a un pH ms bajo y a una acidosis. Esta estimulacin acelera y profundiza los movimientos respiratorios para eliminar el exceso de acido y CO2. En el caso contrario se daria lugar a una alcalosis, induciendo a una respiracin lenta y superficial. En general, la tensin de oxigeno altera la tasa de ventilacin, slo cuando la tensin de CO2 es anormalmente baja o excesivamente alta. Material y equipo: - Matraz Erlenmeyer 125 ml. - Pipetas de 1,2,3 y 5 ml. - Perillas de caucho. - Manguera de caucho. - Colormetro. - Tiras de pH. Reactivos: - NaHCO3 58 mg. / 500 ml.______0.50M. - Rojo de fenol. Tcnica: Pipetear 5 ml de NaHCO3 y 200 mM y un ml de rojo de fenol y agua hasta un volumen de 10 ml Soplar con la perilla de caucho, medir pH y absorbancia. Despus soplar con la boca, medir pH y absorbancia.

Tabulacin: Matraz Caso 1 (perilla) Caso 2 (boca) Conclusin: Nos pudimos dar cuenta que la solucin baj en su concentracin y aumento en su pH, dando lugar a una alcalosis respiratoria simulada. Graficacin: pH 7 9 Absorbancia 0.28 0.13

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANLISIS REGIN XALAPA Practica No. 9 Preparacin de extracto de lpidos totales Objetivo: Obtencin de extracto de lpidos a partir de tejidos animales. Establecer los procedimientos ms comunes para la hidrlisis de las grasas. Identificar los productos de la saponificacin de las grasas y su aplicacin en la actualidad. Hacer la correlacin bioqumica de la importancia del anlisis de los lpidos con relacin al cuerpo humano. Fundamento: Lpidos, grupo heterogneo de sustancias orgnicas que se encuentran en los organismos vivos. Los lpidos estn formados por carbono, hidrgeno y oxgeno, aunque en proporciones distintas a como estos componentes aparecen en los azcares. Las grasas y aceites, tambin llamados triglicridos, son tambin otro tipo de lpidos. Sirven como depsitos de reserva de energa en las clulas animales y vegetales. Cada molcula de grasa est formada por cadenas de cidos grasos unidas a un alcohol llamado glicerol o glicerina. Cuando un organismo recibe energa asimilable en exceso a partir del alimento o de la fotosntesis, ste puede almacenarla en forma de grasas, que podrn ser reutilizadas posteriormente en la produccin de energa, cuando el organismo lo necesite. A igual peso molecular, las grasas proporcionan el doble de energa que los hidratos de carbono o las protenas. Material y Equipo: Pipetas graduadas Matraces Elermeyer Vaso de precipitado Probeta graduada Embudo de vidrio Tripie Tela de asbesto Mechero Bunsen Papel filtr

Tcnica (algoritmo):

Pasarlo a un matraz de 125 ml Ponerlo a calentar sin que hierva.

Aadir 5 ml de alcohol.

Enfriar con agua de la llave.

Aadir 5 ml de ter etlico.

Reposar hasta que sedimente.

Evaporar sin hervir.

Filtrar, repitiendo el procedimiento de 3 a 4 veces. Agregando cada vez 10 ml de ter.

Enfriar y agregar 10 ml de ter agitando para disolver los lpidos.

5ml del filtrado + 10 ml de KOH

Titular con HCl 0.1 N, hasta que aparezcan un color rojo.

En otro matraz agregar 5 ml de eter + 10 ml de KOH

RESULTADOS: Mililitros gastados de HCl gastados tubo problema blanco 11 =1 1 x .1 = 0.1 0.1 x 255 = 25.5 mililitros de HCl tubo 10

5ml 8grs. 25ml 100 % x = 127.5 1.593

25.5 x

127.5 x x=

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANLISIS REGIN XALAPA Practica No. 10 Fundamento: Cuando se hacen variaciones discretas de las concentracin de hidrgenos en medio donde se encuentran actuando las enzimas, la actividad de esta disminuye de una manera reversible si el cambio de pH no es muy importante: si la modificacin de pH es grande puede provocar la desnaturalizacin de la enzima, con perdida irreversible de su actividad. Material y Equipo: Vaso pp 50 ml Tripie

Pinzas para bureta Tiras pH reactivas Pipetas Fenolftaleina Alanina 0.1m NAOH HCL Bureta. Titular hasta observar un viraje de color rojo y anotar los ml de NAOH gastados.

Algoritmo: En un vaso p.p 50 ml colocar 10 ml se alanina 0.1m y agregar 1 gota de fenolftaleina.

Al primer viraje pk1 se le mide el pH y se le agregan 2 gotas de timol hasta que observe un segundo viraje de color violeta y anotar los ml de NAOH gastados midiendo el pH.

Resultados: Pk1=23.5 pH=2 Pk2=18.5 pH=9

Clculos: PI = pk1+ pk2/2 PI = 23.5 + 18.5/2 = 42.0 pH = 5

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANLISIS REGIN XALAPA Practica No. 11 Cromatografa Objetivos: Aprender el concepto bsico de lo que es la cromatografa. Comprender que la cromatografa s un mtodo para separar las sustancias. Fundamento:

Cromatografa, tcnica de anlisis qumico utilizada para separar sustancias puras de mezclas complejas. Esta tcnica depende del principio de adsorcin selectiva (no confundir con absorcin). En la cromatografa en papel, una muestra lquida fluye por una tira vertical de papel adsorbente, sobre la cual se van depositando los componentes en lugares especficos. Otra tcnica conocida como cromatografa gas-lquido permite la separacin de mezclas de compuestos gaseosos o de sustancias susceptibles de vaporizarse por calor. El uso de la cromatografa est ampliamente extendido en el anlisis de alimentos, medicinas, sangre, productos petrolferos y de fisin radiactiva. Material y Equipo: Papel filtro Capilares Pinzas para tubo de ensaye Tapon Algoritmo: En otro papel filtro En un papel filtro agregar anaranjado de agregar fenoftalena metilo y en otro tubo de y en un tubo de ensaye amonaco. ensaye amonaco.

En otro papel filtro agregar juntos la fenoftalena y naranja de metilo. Resultados RF = mm de distancia del origen al centro de la mancha_______ mm de distancia del origen del origen al frente del solvente FENOFTALENA 8 .8 = 10 3= .31 9.5

ANARANJADO DE METILO MEZCLA

3.5 = .38 9 4.5 = .5 9

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANLISIS REGIN XALAPA Practica No. 12 Separacin de Aminocidos por Cromatografa de particin de papel

Objetivos: Establecer la relacin del grupo amino de los AA reactivo de Ninhidrina. Identificar el compuesto analizado en base a la posicin en el cromatograma. con el

Fundamento: Aminocidos, importante clase de compuestos orgnicos que contienen un grupo amino (8NH2) y un grupo carboxilo (8COOH). Veinte de estos compuestos son los constituyentes de las protenas. Se los conoce como alfaaminocidos (-aminocidos) y son los siguientes: alanina, arginina, asparagina, cido asprtico, cistena, cido glutmico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptfano, tirosina y valina. Todos ellos responden a la siguiente frmula general:

Aparte de los aminocidos de las protenas, se han encontrado en la naturaleza ms de 150 tipos diferentes de aminocidos, incluidos algunos que contienen los grupos amino y carboxilo ligados a tomos de carbono separados. Estos aminocidos de estructura poco usual se encuentran sobre todo en hongos y plantas superiores. Material y Equipo: Tiras de papel Whatman Pipetas Pasteur Frasco grande Parrilla elctrica Algoritmo: En tres tubos de ensaye agregar de1 a 1.5 ml de propanol

Marcar con un punto el papel filtro donde se colocara la gota

Colocarlos en los tubos de forma que no se contaminen

Resultados:

mm de distancia del origen al centro de la mancha RF = mm de distancia del origen al frente del solvente

LEUCINA

6 = 10

0.6

ACIDO ASPARTICO

4.5 = 0.47 9.5

CIDO ASPARTICO

6.5 9

= 0.7

LEUCINA

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANLISIS REGIN XALAPA Practica No. 13 Hidrlisis de las protenas, titulacin con formol Objetivos: Describir el fenmeno qumico de la hidrlisis de protenas. Describir cuales son los productos de obtencin al final de una reaccin de hidrlisis de las protenas. Describir cuales son los grupos qumicos funcionales al final de la hidrlisis en aminocidos y pptidos. Describir los diversos procesos de hidrlisis proteica. Fundamento: Las protenas pueden romperse por hidrlisis en ppticos y aminocidos. El tamao y nmero de los fragmentos obtenidos ( grado de hidrlisis ), depende de diversos factores como la temperatura, tiempo de reaccin o la naturaleza del catalizador. Existen varios tipos de hidrlisis: Hidrlisis, tipo de reaccin qumica en la que una molcula de agua, con frmula HOH, reacciona con una molcula de una sustancia AB, en la que A y B representan tomos o grupos de tomos. HIDRLISIS ACIDA: Consiste en el tratamiento de las protenas con cidos minerales concentrados en presencia de calor. HIDRLISIS ALCALINA: Consiste en que se obtiene la roptura de los enlaces peptidicos por la accin de soluciones alcalinas fuertes.

HIDRLISIS ENZIMATICA: Este mtodo es el preferido, porque no destruye los aminocidos Material y Equipo: Tripie Bureta Soporte Universal Termmetro Pipetas Mechero Bunsen matraz Tela de alambre conasbesto 1 vaso de precipitado 1 recipiente para Bao Mara NaOH 0.02 N Tripsina Fenoftalena Gelatina 5% Formol neutro Algoritmo: 50 ml de gelatina + 10 ml de tripsina

Pipetear 10 ml de la mezcla

Enfriar

Hervirlo durante 2 min.

Agregar 15ml de formol + 3 gotas de fenoftalena

Titular con NaOH 0.02 N, hasta color rosa

Todo el tiempo mantener a B.M. , la mezcla inicial a 37 o C Resultados:

Tomar muestras cada 20 min

TIEMPO 0 min. 20 min 40 min 60 min

TUBO 1 2 3 2

Ml GASTADOS DE NaOH 24.3 28.2 29.6 29.8

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANLISIS REGIN XALAPA Practica No. 14 Efecto de la concentracin de sustrato sobre la velocidad de reaccin enzimtico Objetivos: Describir el papel que juega la formacin del complejo en cintica enzimtica. Interpretar los cambios que ocurren en la velocidad de reaccin al aumentar la concentracin de enzima. Fundamento: Las enzimas se clasifican en varias categoras: hidrolticas, oxidantes y reductoras, dependiendo del tipo de reaccin que controlen. Las enzimas hidrolticas aceleran las reacciones en las que una sustancia se rompe en componentes ms simples por reaccin con molculas de agua. Las enzimas oxidativas, conocidas como oxidasas, aceleran las reacciones de oxidacin, y las reductoras las reacciones de reduccin en las que se libera oxgeno. Otras enzimas catalizan otros tipos de reacciones. Las enzimas se denominan aadiendo asa al nombre del sustrato con el cual reaccionan. La enzima que controla la descomposicin de la urea recibe el nombre de ureasa; aquellas que controlan la hidrlisis de protenas se denominan proteasas. Algunas enzimas como las proteasas tripsina y pepsina, conservan los nombres utilizados antes de que se adoptara esta nomenclatura. Material y Equipo. Tubos de ensaye

Matraz Elermeyer Soporte Universal Bureta Pinzas para Soporte Universal Pizeta con agua destilada Soluciones Buffer Urea Bicloruro de mercurio Ureasa

Algoritmo:

Agregar Urea 0.25 M 7.5 ml a todos menos el tubo # 1

Agregar 1gota de solucin de Buffer pH 7.2

Agregar 4 gotas de bicloruro de mercurio solo al uno

Agregar 2 ml de Agua Destilada a todos

Agregar a todos los tubos 0.5 ml de ureasa a todos

Incubar 30 min.

Agregar 4 gotas de bicloruro de mercurio excepto al tubo # 1 Tomar 5 ml de cada tubo y agregar 2 gotas de rojo de metilo y titular con HCl

Resultados: TUBO 1 HCl gastados .1

2 3 4 5 6 0.1 1 1.5 2.0 2.0 .5 .5 .5 .5 .5 = = = = = .2 x .5 x 1 x 1.5 x 1.5 x 50 50 50 50 50

.7 1.0 1.5 2.0 2.0 = = = = = 10 25 50 75 75

250 x .5 = 12.5 10 250 x 1 10 250 x 2 = 25 = 50 10

250 x 50 = 125 10 250 x 7.5 = 187.5 10

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANLISIS REGIN XALAPA Practica No. 15 Efecto de la Temperatura en la Velocidad de la Reaccin Enzimatica Objetivos: Interpretar el efecto del tiempo de accin enzima sobre la velocidad de reaccin Fundamento: En reaccin enzimatica se mantienen en condiciones optimas todos los factores que le afectan y solo se varia en el tiempo de la accin de la enzima, tendremos que la transformacin de sustrato en producto aumenta en forma directamente proporcional al tiempo de la incubacin . El factor por el cual la velocidad de un proceso biolgico aumenta con un incremento de la temperatura de 10. la velocidad de numerosos procesos biolgicos, como la contraccin del corazn de un corazn fuera de la actividad torcica, casi se duplica con una elevacin de 10c en la temperatura(Q10=2). Material y Equipo: Tubos de ensaye Gradilla metlica Ureasa Tripie Mechero Bunsen Tela de asbesto Algoritmo:

Agregar Urea 0.25 M 7.5 ml a todos menos el tubo # 1

Agregar 1gota de solucin de Buffer pH 7.2

Agregar 4 gotas de bicloruro de mercurio solo al uno

Agregar 2 ml de Agua Destilada a todos

Agregar a todos los tubos 0.5 ml de ureasa a todos

Incubar 30 min, excepto el tubo 0, 18, 37, 50, y 80 grados

Tomar 5 ml de cada tubo y agregar 2 gotas de rojo de metilo y titular con HCl Clculos
Q10
=

Agregar 4 gotas de bicloruro de mercurio excepto al tubo # 1

80 70

60 56

1.67

Q10 = 70 = 56 = 1.67 60 52 Q10 = 60 50

=

52 45

1.15