-1PRACTICA N 6 MEDIOS SELECTIVOS Y DIFERENCIALES MICROBIOLOGA GENERAL

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1. OBJETIVO GENERAL Familiarizarse con el uso y funcin de medios especializados para la seleccin y diferenciacin de microorganismos. OBJETIVOS ESPECIFICOS Identificar los componentes de cada uno de los medios de cultivo ensayados los cuales permiten la seleccin y diferenciacin de microorganismos. Interpretar las reacciones bioqumicas asociadas a los componentes de los medios selectivos y diferenciales durante el crecimiento bacteriano. Reconocer las caractersticas metablicas (carcter fenotpico clasico) que permiten una identificacin microbiolgica preliminar. 2. MARCO TERICO Las bacterias son microorganismos muy verstiles que poseen una enorme capacidad de utilizacin de diversos compuestos nutritivos, desde molculas inorgnicas sencillas hasta compuestos orgnicos complejos. La diferencia en la capacidad del empleo de los nutrientes constituye parte de las bases para la identificacin tradicional de los microorganismos. Existen numerosos medios de cultivo que permitirn diferentes propsitos: Aislar tipos bacterianos de una poblacin mixta de microorganismos. Diferenciar grupos bacterianos cercanamente relacionados, con base en la apariencia microscpica de las colonias y las reacciones bioqumicas con el medio. Identificar microorganismos en alimentos, aguas, lodos o productos de uso diario. Ensayar el efecto de sustancias sobre los microorganismos. Caracterizar e identificar los microorganismos segn su habilidad para producir cambios qumicos en diferentes medios. Adems de permitir a los microorganismos su nutricin y crecimiento un medio de cultivo puede estar constituido qumicamente para obtener un solo propsito o combinar varios aspectos en un solo medio, aislando grupos especficos de microorganismos y diferencindolos de otros morfolgica y bioqumicamente semejantes. Algunos medios empleados para seleccionar y/o diferenciar grupos de bacterias son: Agar Salado Manitol: Este medio de cultivo contiene altas concentraciones de sal (7.5% de NaCl), lo cual inhibe el crecimiento de la mayora de las bacterias diferentes a los Staphylococcus. El manitol incorporado en el medio, realiza una funcin diferencial pues solo algunos Staphylococcus pueden fermentarlo. La adicin de rojo de fenol, como indicador de pH, permite detectar la produccin de cido como resultado de la via fermentativa para el metabolismo del manitol, estos microorganismos forman una zona amarilla perifrica a su crecimiento. Staphylococcus que no fermenten el manitol no producirn este cambio de coloracin. Agar Mac Conkey: La presencia de cristal violeta en su composicin permite una inhibicin del crecimiento de organismos Gram positivos permitiendo el aislamiento de bacterias Gram negativas. La inclusin de lactosa, sales biliares y rojo neutro como indicador de pH, permite la diferenciacin de bacterias entricas con base en su habilidad para fermentar la lactosa en dos grandes grupos: fermentadores (bacilos coniformes) y no fermentadores (bacilos disentrico, tifoideo y paratifoideo) de lactosa. Los entericos fermentadores de lactosa producen cido como producto final de su metabolismo, creciendo con la formacin de colonias de color rojo-

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rosado, si la cantidad de cido se producida es en grandes cantidades la zona perifrica al crecimiento apreciar como una zona roja causada por la precipitacin de las sales biliares y la absorcin del rojo neutro. Las entericas no fermentadoras de lactosa, no producirn cido formndose colonias incoloras y frecuentemente transparentes. Agar Eosina-azul de metileno (EMB): La lactosa y los colorantes eosina y azul de metileno permiten la diferenciacin entre entericos fermentadores de lactosa y entericos no fermentadores, adicional a la identificacin de Escherichia coli. Escherichia coli crece formando colonias azul oscuro con un brillo verde metlico causado por la gran cantidad de cido producido por la fermentacin y la precipitacin de los colorantes en la superficie de su crecimiento. Otras bacterias entricas como las del gnero Enterobacter, producirn colonias rosadas, mucoides y densas. Bacterias entericas que no fermentan la lactosa crecern como colonias incoloras, las cuales debido a su transparencia, parecern tomar el color prpura del medio de cultivo. Este medio tambin inhibe parcialmente el crecimiento de organismos Gram positivos permitiendo un crecimiento abundante de los Gram negativos, si ambos estn presentes en la muestra. Agar Fluorocult ECD: La mezcla de sales biliares dentro de sus componentes permite el aislamiento de E. coli e inhibe la microbiota acompaante, las colonias de E. coli se detectan por su fluorescencia azulclaro bajo la luz Ultra Violeta directamente sobre la caja de petri y confirmando con la prueba de Indol. Agar Xilosa- Lisina- Desoxicolato de sodio (XLD): La degradacin de cido de xilosa, lactosa y sacarosa produce un viraje a amarillo del indicador de pH. El tiosulfato y la sal de hierro revelan la formacin de cido sulfhidrico por la precipitacin de sulfuro de hierro, formando colonias negras. Las bacterias que decarboxilan la lisina producen cadaverina y se reconocen por la presencia de un color rojo prpura alrededor de sus colonia, causado por el aumento de pH. Varias de estas reacciones pueden presentarse simultneamente o sucesivamente dando lugar a diversos matices de color del indicador de pH o a un viraje de amarillo a rojo durante una incubacin prolongada. Este medio posee poca capacidad inhibidora. 3. MATERIALES, EQUIPOS E INSUMOS Asa microbiolgicas. Mechero de bunsen. Lmpara de Luz U.V. 4. REACTIVOS Agar salado manitol en caja de petri. Agar Mac Conkey en caja de petri. Agar Eosina - azul de metileno en caja de petri. Agar Fluorocult ECD en caja de petri. Agar XLD en caja de petri 5. PROCEDIMIENTO 1. Reconozca e identifique la composicin, apariencia y color de cada uno de los medios de cultivo a emplear.. 2. Marque cada una de las zonas con el microorganismo indicado para la inoculacin. 3. Siembre realizando una lnea, segn el diagrama, del microorganismo indicado en cada seccin empleando las tcnicas microbiolgicas adecuadas. 4. Incube a 37C por 24 horas en aerobiosis. 5. Lea los resultados: Analizar el crecimiento observado tomando como referencia el catalogo del proveedor del medio de cultivo. Cultivos de diversos microorganismos. .

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6. NIVEL DE RIESGO Medio 7. BIBLIOGRAFIA. Quinn P. J,. Markey B. K Elementos de microbiologa veterinaria Zaragoza : Acribia, D.L. 2005 Koneman J. Diagnstico microbiolgico : texto y atlas color / Elmer W Buenos Aires : Ed. mdica panamericana, 1992 8. ANEXOS CUESTIONARIO 1. Completa el siguiente cuadro: Agar Salado Manitol
Clase de medio de cultivo Indicador de pH Otros indicadores de reacciones bioqumicas (si los tiene) Fuente de carbono del medio Inhibidor (si lo tiene) Uso Tipos de bacterias que pueden crecer en l Reacciones qumicas que suceden (Redox de fermentacin, deaminacin, decarboxilacin, etc.)

Agar Mac Conkey

Agar EMB.

Agar Fluorocult

Agar XLD.