SELECCION, MANTENIMIENTO Y MEJORAMIENTO DE MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Debido a que el xito o fracaso de un proceso

fermentativo comienza con el microorganismo

utilizado, en la eleccin del mismo se deberan tener en cuenta ciertos criterios generales que se indican a continuacin:

 1. La cepa a utilizar debe ser genticamente estable.

2. Su velocidad de crecimiento debera ser alta. 3. La cepa debe estar libre de contaminantes, includos

fagos

 4. Sus requerimientos nutricionales deberan ser

satisfechos a partir de medios de cultivo de costo reducido.

5. Debe ser de fcil conservacin por largos perodos

de tiempo, particulares

sin

prdida

de

sus

caractersticas

 6 .Debera llevar a cabo el proceso fermentativo

completo en un tiempo corto.

7. Si el objetivo del proceso es un producto, ste

debera ser de alto rendimiento y de fcil extraccin del medio de cultivo

A nivel industrial, en general, cada firma posee su propia

coleccin de organismos, muchos de los cuales han sido mejorados a travs de tcnicas clsicas de mutacin o de ingeniera gentica

Los microorganismos que se utilizan en un proceso, pueden ser obtenidos por :

a) Aislamiento a partir de fuentes naturales b) De una coleccin de cultivos

 Sin embargo, estas cepas slo son empleadas por la

industria que las posee, debido al gran valor comercial de las mismas

En algunos casos se dispone de organismos modificados genticamente para llevar a cabo reacciones especficas de

biosntesis, degradacin o biocatlisis, los cuales estn

protegidos por patentes.

Existen en el mundo un gran nmero de colecciones depositarias de cultivos. Entre la diversidad de colecciones se destacan: 1. "American Type Culture Collection: USA, la cual mantiene bacterias, levaduras, algas, actinomycetes, mohos, protozoos, virus y lneas celulares.

2. "Colletion Nationale de Cultures de Microorganismes del Institut Pasteur, Francia. 3. Northern Regional Research Laboratory (NRRL), de Peoria, USA. 4. "National Collection of Type Cultures", Londres, Inglaterra.

Si el organismo a utilizar es aislado de fuentes naturales como agua, suelo, plantas y desechos, la eleccin del

material de partida puede hacerse teniendo en cuenta que

el organismo exprese en ese ambiente las propiedades que son de inters.

Elegida la fuente de aislamiento, las posibilidades de xito dependen de la tcnica elegida para el mismo; en este caso las alternativas son: a) Aislamiento directo b) En enriquecimiento del cultivo con o sin pre tratamiento de la muestra

a) Aislamiento directo: En este caso es deseable que el medio que se utiliza para el aislamiento permita la mxima expresin del material gentico del organismo. Si se busca por ejemplo un organismo con accin antimicrobiana, se puede crecer al potencial productor, en una caja de petri en presencia del o los organismos contra los cuales se requiere la accin antimicrobiana, observndose la produccin del inhibidor por las zonas de inhibicin de crecimiento

b)Enriquecimiento del cultivo: Esta tcnica consiste en incrementar en una poblacin mixta el nmero de organismos de inters en relacin al resto. De esta forma se busca favorecer el crecimiento de un tipo dado de microorganismos mediante condiciones de cultivo adecuadas al mismo, o de condiciones inapropiadas para el desarrollo de los otros

Mantenimiento o conservacin de los cultivos

Los objetivos de la conservacin de los cultivos se podran resumir en los siguientes aspectos: a) Preservar la pureza gentica del cultivo sin prdida de ninguna de sus propiedades bioqumicas; b) Preservar los niveles de su productividad inicial; c) Lograr que el cultivo pueda ser transportado y manejado con facilidad.

En todo trabajo de Microbiologa se deben conocer las caractersticas de la poblacin con la cual se va a trabajar (propiedades morfolgicas y bioqumicas).

En este sentido, tanto en la conservacin como en el desarrollo del cultivo, ya sea el que suministra o el que recibe la cepa, deberan usar las mismas tcnicas metodolgicas

Los mtodos de preservacin o mantenimiento ms importantes son los siguientes:

Subcultivos

Mantenimiento bajo capa de aceite

Congelacin

Cultivos en tierra
Preservacin en celulosa

Liofilizacin

Subcultivos
Es un mtodo comn de conservacin, que consiste en el repique

peridico del cultivo en un medio nutritivo fresco.

El intervalo de transferencia vara con el microorganismo, debiendo

considerarse el medio adecuado para cada especie.

Una vez desarrollados los cultivos se mantienen a 4 C durante lapsos

que oscilan entre 15 das y 2 meses.

Los inconvenientes que presenta son varios:

a) Incremento de la posibilidad de mutacin con cada

transferencia, con prdida de las caractersticas del organismo.

b) Riesgo de contaminacin.

c) Alteraciones en el medio de cultivo, durante la estada en

fro, en la cual se produce una desecacin gradual del mismo.

Mantenimiento bajo capa de aceite Es una tcnica simple y efectiva para prolongar la conservacin de muchos

organismos y consiste en cubrir completamente el cultivo despus de su

desarrrollo en medio slido, con una capa de aceite mineral o vaselina estril. Los cultivos en esta forma se pueden conservar a temperatura ambiente o an mejor en heladera por perodos de varios aos.

Congelacin Debido a que la actividad metablica de una clula se reduce

considerablemente por mantenimiento a muy baja temperatura, la

congelacin es una tcnica de eleccin, ya sea para cortos o largos perodos de tiempo. A esto ha contribuido tambin la mayor disponibilidad de nitrgeno lquido (-196 C) y el mejoramiento de los equipos de refrigeracin.

La tcnica involucra el crecimiento del cultivo hasta la fase estacionaria,

ya que en general en esta etapa las clulas son ms resistentes a los daos por congelacin y descongelacin, que las de fase exponencial.

Tambin es aconsejable utilizar una densidad celular elevada en la congelacin, debido a que, cuando parte de las clulas se lisan se liberaran sustancias crioprotectoras que aumentaran el porcentaje de clulas sobrevivientes.

Cultivos en tierra

La tierra estril puede ser inoculada con un cultivo e incubada varios das para inducir esporulacin de bacilos aerobios y anaerobios.
Una vez que la misma se manifiesta, la tierra es secada (desecador) y el cultivo mantenido de esta forma en una atmsfera seca o en refrigerador. El mtodo ha sido utilizado ampliamente con hongos y actinomycetes, los cuales han sido mantenidos en estas.

Preservacin en celulosa El empleo de un soporte de papel para el mantenimiento de clulas en condiciones de ausencia de agua es un procedimiento adecuado y sencillo, para conservar cepas.

La tcnica consiste en embeber tiras de papel de filtro con una suspensin densa de organismos en suero, glutamato de sodio u otro agente, las mismas son posteriormente colocadas en tubos para su posterior secado bajo vaco.

De esta forma se han logrado conservar cepas de Streptomyres y Salmonella por perodos de hasta 2 aos a temperatura ambiente.

Liofilizacin

La liofilizacin est considerada como el mtodo ms adecuado para la preservacin de microorganismos. La tcnica involucra el congelamiento de un cultivo seguido por un secado bajo vaco, lo cual resulta en la sublimacin de agua de la suspensin celular. La ventaja es que la mayora de los organismos sobreviven al secado y el cultivo es fcilmente mantenido an a temperatura ambiente sin prdida significativa de viabilidad.

Mejoramiento de microorganismos industriales

En general los organismos aislados de la naturaleza productores de metabolitos de inters industrial producen a los mismos en niveles muy bajos, por lo tanto se hace necesario incrementar estos rendimientos para lograr una mayor rentabilidad de los procesos

Una forma de mejorar el rendimiento es mediante la optimizacin del medio de cultivo y de las condiciones de

operacin, pero esto est limitado por la capacidad de

sntesis mxima del producto deseado que tiene el organismo. La otra posibilidad es el mejoramiento gentico de la cepa.

La obtencin de cepas modificadas genticamente se puede realizar por

1) Seleccin natural de variantes

2) Mutacin inducida,.

3) Recombinacin gentica.