Universidade Federal de Pelotas Centro de Biotecnologia Biologia Molecular

REGULAO DA EXPRESSO GNICA EM PROCARIOTOS

Regulao da expresso gnica

Mecanismos que regulam o processo de transcrio do DNA para sintetizar RNA e a traduo desses para gerar protenas

Abordagens...
A estrutura gnica

Controle da expresso (transcrio) Controle da Expresso (traduo)

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Estrutura de um Gene A estrutura de um gene de procarioto

Promotor
DNA Ribossomo

Regio Codificadora

Terminador

RNA

PROTENA
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ESTRUTURA DE UM GENE DE estrutura EUCARIOTO de um gene de

eucarioto

DNA

Promotor

Regio Codificadora

Stio de PoliA

hnRNA RNA

Exon
AAAAAAAAAA

Intron
mRNA
AAAAAAAAAA

Organizao na forma de operons

Promotor/operador Regies Codificadoras Terminador

OPERON
RNA MENSAGEIRO POLICISTRNICO E. coli
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Porque Regular?????
Qual o custo (em termos de energia e recursos) para fazer uma protena?
Para uma protena de tamanho mdio (300 aminocidos)? - 1350 molculas de ATP - 1650 tomos de carbono - 540 tomos de Nitrognio

E. coli tem cerca de 4000 genes que codificam

aproximadamente 2000 protenas.

Imaginem o custo se todas essas protena fossem produzidas ao mesmo tempo !

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Quem, Quando e Quanto:

A sntese de protenas requer grandes quantidades de energia assim, os procariotos desenvolveram mecanismos elaborados para controlar a escolha de quais protenas so feitas em diferentes momentos, sob diferentes condies ambientais.

Isso regulao Gnica

Fatores que determinam a quantidade de cada protena

Concentrao de mRNA

Eficincia da traduo do mRNA

Estabilidade da protena extrada

Genes constitutivos
Genes que so constantemente expressos

Genes induzveis
Genes cuja expresso varia de acordo com as condies da clula

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Regulao primria: RNA Polimerase

Genes constitutivos: interao promotor/RNA polimerase Genes induzveis: protenas reguladoras afetam a transcrio pela RNA polimerase

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O CONTROLE TRANSCRICIONAL EXERCIDO POR CASCATA DE FATORES SIGMA

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RNA Polimerase

Fator (sigma)

Core

Holoenzima

Especificidade de ligao da RNA polimerase nos diferentes promotores dada pela interao com diferentes espcies de fatores sigma

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BACTERIFAGO SPO1
Genes de expresso imediata Genes de expresso intermediria Genes de expresso tardia

28
RNA pol Fator a

33

34

gp28 gp33/34

se multiplica em

Bacillus subtilis

TRANSCRIO DOS GENES DE EXPRESSO TARDIA

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Bacillus subtilis

ESPORULAO

Seqncia de genes expressa com a finalidade de formar o esporo

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OS MECANISMOS DE CONTROLE TRANSCRICIONAL

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Controle por ativadores e repressores

CONTROLE POSITIVO
Ativador ligado facilita a transcrio

Induo Represso

CONTROLE NEGATIVO Repressor ligado inibe a transcrio

Induo Represso
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REGULAO NEGATIVA
Repressor ligado inibe a transcrio Induo

indutor

REPRESSOR INATIVO

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REGULAO NEGATIVA
Repressor ligado inibe a transcrio Represso

Co-repressor

REPRESSOR INATIVO
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REGULAO NEGATIVA: a transcrio pode

ser favorecida ou bloqueada, dependendo da ao da molcula sinal sobre a protena repressora

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REGULAO POSITIVA: a expresso est na

dependncia da presena das protenas reguladoras ativadoras.

Os ativadores unem-se a stios adjacentes ao promotor, aumentando a afinidade da RNA Polimerase por ele e favorecendo a transcrio

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REGULAO POSITIVA
Ativador ligado facilita a transcrio Induo

INDUTOR

ATIVADOR INATIVADO
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REGULAO POSITIVA
Ativador ligado facilita a transcrio Represso

Co-repressor ATIVADOR INATIVADO

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SISTEMAS INDUZVEIS: expresso dos genes somente ocorre quando da presena de um indutor

SISTEMAS REPRIMVEIS: a expresso somente ocorre na ausncia do co-repressor.

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Operon lac

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Regulao do operon lac

CONTROLE NEGATIVO
REPRESSOR

CONTROLE POSITIVO
COMPLEXO CAP:cAMP
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Estrutura do Operon lac

Operon Lac: ~6000 bp

Metabolismo da lactose
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Operon lac - Enzimas

PERMEASE

-GALACTOSIDADE

TRANSACETILASE

A lactose induz a sntese de enzimas envolvidas no seu prprio metabolismo

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PERMEASE
CITOPLASMA
Transporta lactose

PERIPLASMA
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-Galactosidase
Clivagem da lactose

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Controle negativo do Operon lac

Ausncia de lactose

Presena de lactose

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Controle positivo do operon lac

Glicose CAP Protena ativadora de catablito AMPc

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Operon lac

PRESENA DE LACTOSE: inativar o repressor

AUSNCIA DE GLICOSE: aumentar a concentrao de cAMP, permitir a ligao a CAP e assim, ao DNA
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Operon trip
Operon Trip

Regulao Gnica em E.coli

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Regulao do Operon trp

trpR

P\O

trpE trpD

trpC

trpB trpA

ter

Repressor

Triptofano

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Regulao do Operon trp

Regulao Regulao

por represso por atenuao

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Regulao do operon do Triptofano

ATENUADOR: Controla a capacidade da RNA Polimerase em continuar o alongamento da transcrio alm de determinados stios
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OPERON TRIPTOFANO
RNA polimerase

SEM CO-REPRESSOR

DNA Transcrio mRNA Traduo mRNA Traduo

Repressor inativo

Transcrio

Protena Repressora inativa

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Regulao por atenuao

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O CONTROLE DO OPERON DA ARABINOSE

GENE REGULADOR

SITIOS DE CONTROLE

GENES ESTRUTURAIS

ENZIMAS ENVOLVIDAS NO METABOLISMO DA ARABINOSE

RIBULOSE - QUINASE ARABINOSE ISOMERASE RIBULOSE 5 FOSFATO - ISOMERASE

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O CONTROLE DO OPERON DA ARABINOSE

Ligao de AraC

AraC

Operador

Na presena de arabinose, a protena AraC se liga a regio araI; a protena CAP, ligada a cAMP, se liga a um stio adjacente regio araI; TRANSCRIO DE araB, araA e araD
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O CONTROLE DO OPERON DA ARABINOSE

Na ausncia de arabinose, a protena AraC se liga a ambas as regies de araI e araO formando uma ala no DNA.

IMPEDE A TRANSCRIO DO OPERON

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Os mecanismos de controle pstranscricional

RNA anti-senso

(RNAs reguladores)

Eficincia

de ligao do ribossomo

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RNA DsrA

Atuando em reguladores transcricionais

Controle por RNAs reguladores

NEGATIVO RBS RBS

HNS (proteina reguladora de transcrio)

POSITIVO

RBS

RpoS (fator sigma)

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Controle da traduo de operons de protenas ribossmicas

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Regulao da Expresso Gnica

Procariotos: Resposta direta a variaes nas condies nutricionais (genes ativados e reprimidos) Transcrio pode ser acoplada com a traduo (simultnea)

Eucariotos multicelulares: Limitao na resposta direta s variaes nas condies nutricionais (clulas esto organizadas em tecidos e orgos meios uniformes) Transcrio ocorre em compartimento distinto da traduo eliminando a possibilidade de acoplamento
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REGULAO DA EXPRESSO GNICA EM EUCARIOTOS

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Tipos de Sinais no Controle da Expresso

HORMNIOS ESTERIDES: Complexo receptor-hormnio reconhece sequncias especficas no ncleo das clulas. PEPTDICOS: se liga a receptores de superfcie da clula desencadeando uma cascata de sinalizao MUDANAS NUTRICIONAIS E AMBIENTAIS: Limitada

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Nveis do Controle da Expresso

1 Transcrio 3

2 Processamento 4

Estabilidade do mRNA

Traduo do mRNA
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Regulao da Transcrio
Regulador TATA box
Iniciador +1 Promotores Proximais

Reforadores (enhancers)
Fatores de transcrio: gerais e especficos Ativadores (ligao DNA e ativao da transcrio) e Repressores
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Fatores Gerais de Transcrio RNA Polimerase II

Holoenzima da RNA Polimerase II

SRB mediador (co-ativador)

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Motivos presentes em protenas que se ligam ao DNA

Homeodomnio Dedo de Zinco

Ligao com o DNA

Zper de Leucina
Hlice-ala-hlice

Domnios de ativao

Ativa a transcrio
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Complexos com mltiplos componentes

Reforadores

+
Fatores de Transcrio

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Regulao Ps-Transcricional

Splicing Alternativo

Diferenciao de neurnios
Mudanas nos padres de splicing alternativo

Apoptose
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Regulao em nvel de Traduo

mRNAs que codificam ferritina e do mRNA do receptor de transferritina Transporte, uso e armazenamento do ferro

Embriognese

Reativao de mRNAs dormetes no ocito

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