MODIFICACIN GENTICA DE LAS PLANTAS

Melissa Sarmiento Ramrez Magdalena Reinoso Luca Quemada Garrido

BIOTECNOLOGIA VEGETAL

Tcnicas de ingeniera gentica + cultivo de tejidos vegetales in vitro

Ingeniera gentica: - Tcnicas de manipulacin ADN -Desarrollo (ADN-Watson y Crick):nueva o moderna biotecnologa Cultivo in Vitro: -Partes de plantas y plantas enteras en medios aspticos y ambientes controlados (luz y T) -Totipotencia: capacidad de clulas vegetales ( no todas) de regenerar plantas enteras. - Protoplastos: Biotecnologa de hibridacin somtica (hbridos entre especies diferentes que comienza con fusin de protoplastos y posterior regeneracin de plantas enteras).

TRANSFORMACIN GENTICA DE LAS PLANTAS Agrobacterium tumefasciens

Agallas de la corona (Plasmido Ti) Material gentico: cromosoma y varios plasmidos Transfiere porcin del plasmido Ti ( T-DNA) al genoma de la clula vegetal, donde se integra y expresan genes : divisin y proliferacin de cel vegetales sin control:Tumor

-Genes iaaM-iaatt -Gen ipt -Otros Particularidades nicas de Agrobactrium: - Transferir fragmento de DNA e integrarlo en cel vegetal. - Genes DNA reconocidos por cel vegetal. - Genes que codifican enzimas metabolismo de opinas.

PROCESO DE INFECCION: T-DNA y regin vir (plasmidoTi) + genes virulencia chv (cromosoma) -T-DNA delimitado por repeticiones de 25pb (borde derecho e izquierdo) -Regin vir fuera del T-DNA, formada por operones (genes cuyos productos regulan la expresin de otros genes)

ETAPAS DEL PROCESO

1._ Reconocimiento: genes chv, movimiento quimiotctico bacteriano y unin a receptores especficos de clula vegetal. 2._ Vir A se expresa. 3._ Unin Vir G a los dems genes vir y activacin 4._ Vir D1-D2 (endonucleasas) . Liberan cadena simple de DNA. Formacin del complejo T. 5._ Paso del complejo T por el canal formado por Vir B. 6._ Entrada al ncleo con previo reconocimiento de SLN por D2 y D1. 7._ Integracin del T-DNA al genoma vegetal.

GENES DE T-DNA-SUSTITUCION POR FORANEOS - Se demuestra que los genes forneos se pueden transferir, integrar y expresar en plantas usando Agrobacterium tumefasciens como vehculo.
- VECTORES DE TRANSFORMACION: plasmidos con informacin esencial para replicarse, transferirse e integrarse y posibilitar expresin de genes forneos en genoma de la cel vegetal.

TIPOS DE VECTORES:
1._ VECTORES COINTEGRADOS: Cuando plasmido de E.coli se transfiere en agrobacterium, el Dna forneo de coli se integra en los bordes de su T-DNA por recombinacin homologa dando lugar a: Plasmido con regin vir y el T-DNA con el Dna forneo

2._VECTORES BINARIOS: Plsmido Ti desarmado con solo regin vir y en un segundo plsmido bordes de l T-DNA con origen replicacin funcional en ambas bacterias. Este ltimo mas pequeo y manipulable para introducir genes forneos entre bordes.

Genes marcadores permiten reconocer y seleccionar clulas transformadas:

1.

Marcadores de seleccin: permiten a cel vivir en agente selectivo (antibitico o herbicida) Marcadores informadores: Codifican enzimas que con sustrato adecuado reaccionan dando una caracterstica nueva a las clulas. *Ejemplo: B-glucuronidasa con un sustrato da color azul y con otro fluorescente.

2.

LOS PROCESOS DE REGENERACIN Y TRANSFORMACIN SON DISTINTOS PARA CADA ESPECIE VEGETAL: - Transformar una planta no indica que por el mismo procedimiento se pueda transformar una especie muy prxima.

- Depende de la relacin patgeno/husped (mayora dicotiledneas)

- Genes regin vir y algunos del T-DNA como los de virulencia determinan genoma de especies especificas para cada cepa bacteriana.

APLICACIONES BIOTECNOLGICAS

-Resistencia a plagas y enfermedades

-Resistencia a condiciones ambientales extremas -Integracin planta y microorganismos -Las plantas como biofactoras -Mejora de la calidad en productos agrarios

Plagas y enfermedades
Estn sometidas a:
Agentes infecciosos

Organismos consumidores

Plagas y enfermedades

Agentes qumicos

Programas de control a plagas, mediante organismos depredadores al organismo perjudicial.

Mejoras genticas

Condiciones ambientales extremas

La disminucin en el rendimiento de cultivos se debe al estrs:

Bitico Abitico Este ltimo es el responsable de las mayores prdidas de productividad.

A travs de la ingeniera gentica, podr aumentar la torelancia y desarrollar estrategias hacia el estrs.

Para ello es necesario conocer los mecanismos de defensa de las plantas hacia el estrs

Interaccin planta-microorganismo
Los microorganismo se agrupan segn relacin: Perjudiciales Beneficiosas Sin efecto directo Compiten por nutrientes y espacio. Ej. Rizobacterias

Perjudiciales

Dalbulus maidys la chicharrita adulta del maz

Beneficiosas

Rhizobium en leguminosa

Las plantas como biofactoras

Las plantas son fuente de alimento, combustible, y fibras. Los avances en vitro del ADN y la transformacin de diferentes especies han permitido la creacin de plantas transgnicas.

Plantas de Ananas sativus

Agave sp.

Han ido encaminadas al desarrollo de plantas con caractersticas agronmicas mejoradas.

Plantas tolerantes a herbicidas, virus, insectos A mejorar el producto extrado de la planta: como en el tomate, las patatas

Tolerancia a los herbicidas

Parcela de soya infectada con herbicida Roundup (izquierda)

Cultivos Bt resistentes a los insectos

Maz hbrido con un gen Bt (izquierda) y un hbrido sensible al barrenador europeo del maz (derecha).

Sus esporas contienen una protena cristalina (Cry). En el intestino del insecto, la protena se descompone y libera una toxina que se une al revestimiento intestinal y crea poros as muere el insecto. En los cultivos Bt se ha incorporado una versin modificada del gen Cry bacteriano en el ADN de la propia planta, de tal modo que la maquinaria celular de la planta produce la toxina.

Otra utilidad en las plantas como biofactorias, es la de producir enzimas industriales, antgenos para las vacunas, anticuerpos, pptidos de uso farmacutico

Mejora de productos agrarios

Para el incremento de la produccin de las cosechas y la disminucin del uso herbicidas Beneficiados los agricultores y la sociedad Objetivos: obtencin de productos con menos contaminantes agroqumicos y de mejor calidad Mejorar en el tamao, valor nutritivo, extensin de vida

GENES EN ANTISENTIDO PARA RESTABLECIMIENTO DEL FRUTO

Muchos genes han sido introducidos en variedades de inters agrnomo con objetivos de mejora.

En plantas transgnicas se ha conseguido: - resistencia y mayor tolerancia a plagas, enfermedades, herbicidas. - mejora de la calidad nutritiva.

EL TOMATE DE LARGA VIDA

En tomates cosechados, la enzima poligalacturonasa degrada las pectinas (componentes esenciales de muchas frutas) Consecuencia: reblandecimiento del fruto y deterioros en su aroma y sabor.

Procedimiento: 1 Las plantas transgnicas de tomate se han transformado en la regin codificadora del gen de la enzima poligalacturonasa. 2 El gen se ha insertado al revs en el mdulo de expresin, es decir, en antisentido. *Antisentido: en la doble cadena de DNA: - la guanina se sustituye por citosina y la citosina por guanina. - la adenina se sustituye por timina y la timina por adenina.

3 El gen en antisentido transcribe un RNAm con secuencia complementaria al RNAm transcrito por el gen de la poligalacturonasa. 4 Se tiende a la formacin de una doble cadena entre ambos RNAm y as, bloquear parcialmente la sntesis del enzima. 5 Debido al efecto previo, se consigue un retraso en la degradacin de las pectinas y, por tanto, un tomate que tarda mucho ms tiempo en reblandecerse.

Retraso de la maduracin en el tomate

Maduracin: conjunto de cambios externos, de sabor y textura que un fruto experimenta cuando completa su crecimiento. Segn el proceso de maduracin, el tomate es un fruto climatrico, es decir, acumula almidn durante su crecimiento y, en la maduracin, lo hidroliza a monosacridos, glucosa y fructosa principalmente. Se produce mucho gasto de energa y se experimenta un aumento en la respiracin.

Por transformacin con genes en antisentido, se ha conseguido bloquear parcialmente la sntesis de etileno (hormona de la maduracin).
Procedimiento: - Mediante la tcnica antisentido, se ha conseguido bloquear la sntesis de ACC-sintasa no se sintetiza etileno no se produce maduracin. Restauracin de la maduracin: - por tratamiento con etileno exgeno cuando los frutos se ponen a la venta.