La biotecnologa no es, en s misma, una ciencia; es un enfoque multidisciplinario que involucra varias ciencias (biologa, bioqumica, gentica, virologa,

agronoma, ingeniera, qumica, medicina y veterinaria entre otras). Es el uso de organismos vivos o de compuestos obtenidos de organismos vivos para obtener productos de valor para el hombre.

suelen clasificar como:

Biotecnologa roja:
se aplica a la utilizacin de biotecnologa en procesos mdicos

Biotecnologa blanca:
conocida como biotecnologa industrial, es aquella aplicada a procesos industriales

Biotecnologa verde:
es la biotecnologa aplicada a procesos agrcolas

Biotecnologa azul:
tambin llamada biotecnologa marina, es un trmino utilizado para describir las aplicaciones de la biotecnologa en ambientes marinos y acuticos.

Es el proceso por el cual un nuevo gen es introducido en clulas de un individuo para producir un efecto teraputico. Dicho efecto puede ser una activacin o una supresin de alguna funcin fisiolgica que se est produciendo incorrectamente en el individuo a tratar.

Un aspecto bsico es disponer del gen o genes a utilizar

Otro aspecto fundamental es conseguir la transferencia del gen y lograr su expresin

Finalmente, no hay que olvidar la necesidad de tener un conocimiento ntimo de la patogenia de la enfermedad a tratar

En funcin del tipo celular diana

Terapia gnica de clulas germinales: Aquella dirigida a modificar la dotacin gentica de las clulas implicadas en la formacin de vulos y espermatozoides y, por tanto, transmisible a la descendencia.

Terapia gnica somtica: Aquella dirigida a modificar la dotacin gentica de clulas no germinales, es decir, de las clulas somticas o constituyentes del organismo. Por ello, la modificacin gentica no puede transmitirse a la descendencia.

En funcin a la estrategia aplicada:

Terapia gnica in vivo

Terapia gnica ex vivo:

Terapia gnica in vivo:

Ventaja: sencillez, adems que no es especfico para cada paciente, de manera que los costes de la terapia se reducen

Agrupa las tcnicas en las que el material gentico se introduce directamente en las clulas del organismo, sin que se produzca su extraccin ni manipulacin in vitro. La administracin puede ser local en una determinada rea u rgano o sistmica

Inconveniente: el grado de control sobre todo el proceso de transferencia es menor, la eficiencia global es tambin. Es difcil conseguir un alto grado de especificidad tisular.

Terapia gnica ex vivo:

ventajas son el permitir la eleccin del tipo de clula a tratar, mantener un estrecho control sobre todo el proceso, y la mayor eficacia de la transduccin gentica, adems es especfico para cada especie

Comprende todos aquellos protocolos en los que las clulas a tratar son extradas del paciente, aisladas, crecidas en cultivo y sometidas al proceso de transferencia in vitro. Una vez que se han seleccionado las clulas que han sido efectivamente transducidas, se expanden en cultivo y se introducen de nuevo en el paciente.

Problemas: mayor complejidad y coste de los protocolos, imposibilidad de transducir aquellos tejidos que no son susceptibles de crecer en cultivo; riesgo inherente a la manipulacin de las clulas en cuanto a problemas de contaminacin, adems muchas de las clulas manipuladas ex vivo no sobreviven mucho tiempo despus de la reimplantacin

Correccin de genes

Sustitucin de genes

Adicin de genes

Correccin de genes: La forma ideal de tratamiento de las enfermedades genticas sera la correccin de la secuencia defectuosa. Este objetivo es, no obstante, complicado de alcanzar debido a importantes dificultades tcnicas

Sustitucin de genes La sustitucin de genes presenta grandes dificultades tcnicas, pues implica la escisin del segmento de ADN anormal y la colocacin, exactamente en el mismo lugar y orientacin, de un segmento con la informacin correcta. No se dispone en la actualidad de mtodos lo suficientemente eficaces y precisos para llevarla a trmino de manera adecuada

Adicin de genes

Esta tcnica implica la insercin de la versin normal del gen defectuoso SIN MODIFICAR el gen alterado que permanece en la clula y su defuncin es superada por la copia del gen normal no requiere la misma precisin Es la modalidad tpica para el tratamiento de enfermedades sensibles a la actuacin del sistema inmunitario, como las enfermedades infecciosas, las autoinmunitarias o las oncolgicas.

Fsicos:

Qumicos

Biolgicos

la microinyeccin

precipitados de calcio

Adenovirus

la inyeccin de ADN desnudo

los liposomas

Retrovirus

la pistola gnica

las partculas de ADN condensado

Lentivirus

la electroporacin

los virusomas fusignicos

Virus adenoasociados

los ultrasonidos.

Herpesvirus

Microinyeccin

Se realiza manualmente con la ayuda de un microscopio y de una aguja muy fina que se utiliza para perforar las membranas celulares y, posteriormente, administrar la construccin gentica teraputica o profilctica.

Ventajas: especificidad celular

Inconvenientes: Tiempo requerido; es til slo en transformacin ex vivo, y el limitado volumen que puede administrarse para no reventar la clula.

Inyeccin de ADN desnudo

Consiste en la inyeccin intradrmica o intramuscular de plsmidos de ADN en suspensin que contienen el gen teraputico.

Ventajas: la simplicidad de produccin y de almacenamiento. Es el sistema de tranferencia in vivo ms eficaz de entre los no virales. Adems tiene capacidad inmunomoduladora, pero apenas inmungena, lo que ha hecho que se utilice mucho en el rea de las vacunas de ADN,

Inconvenientes: la bajsima eficacia de transferencia gnica que proporciona ex vivo. Un perodo muy corto de expresin del transgn y la nula selectividad de direccin.

Pistola gnica

En este mtodo, las molculas de ADN teraputico, generalmente plsmidos, recubren esferas microscpicas de oro, las cuales se impulsan mediante un gas comprimido o un lquido a presin contra los tejidos a transformar.

Ventajas

Inconvenientes

Electroporacin Este mtodo genera pequeos poros temporales en las membranas celulares. Estos poros se crean sometiendo las clulas a un campo elctrico durante un perodo determinado, que suele oscilar de microsegundos a milisegundos.

ventajas

inconvenientes

Es una tcnica utilizable tanto ex vivo como in vivo

baja eficacia

es muy reproducible y muy rpida

Limitado acceso la selectividad de direccin hacia determinados rganos y tejidos in vivo

Ultrasonidos

Se trata de un mtodo an en desarrollo que aprovecha el aumento de permeabilidad que se produce en las clulas cuando se someten a ultrasonidos. Esta permeabilidad es aprovechada por las macromolculas para penetrar pasivamente en el interior de las clulas. Parece ser que actan por los fenmenos de cavitacin que se producen en la membrana celular.

Precipitados de calcio

se basa en los precipitados que produce el ADN cuando interacta con iones de calcio. Utilizado en tcnicas ex vivo. La sal ms utilizada es el CaPCO4. Los precipitados de ADN entran en el interior de la clula mediante endocitosis.

ventaja

bajo coste y la simplicidad

no es aplicable in vivo . la eficiencia es muy baja.

desventajas

Liposomas

Los lpidos catinicos se unen con las molculas de ADN, quedando entonces los cidos nucleicos en el interior de las esferas formadas por capas de lpidos. Estos lpidos atraviesan con facilidad las membranas celulares y transportan el material gentico al interior de las clulas.
ventajas : el ADN est protegido en el interior de los liposomas y que puede administrarse de forma tanto general como local. la produccin y el almacenamiento son relativamente sencillos, ofrecen una buena tasa de transferencia gnica ex vivo, y apenas es inmungeno. Desventajas: la duracin de la expresin es corta. Adems, la eficacia in vivo disminuye considerablemente y es difcil obtener selectividad de direccin.

ADN condensado

Es una tcnica similar a la de los liposomas, pero que utiliza polmeros en lugar de lpidos. Los polmeros ms utilizados son polilisina, distintos oligopptidos y, especialmente, polietilenimina.

Las ventajas y los inconvenientes son similares a los de los liposomas, siendo su fabricacin ms delicada pero ofreciendo mayor selectividad de direccin en el proceso de transferencia gnica.

Virusomas fusignicos

Este mtodo trata de combinar las ventajas de los vectores virales con la simplicidad y la seguridad de los liposomas. Se obtienen mediante la combinacin de protenas de fusin de membranas virales, normalmente de virus Sendai, con liposomas de manera que la unin y la fusin a las membranas celulares resulta muy eficiente.

Ventaja supera el volumen de insercin, normalmente muy limitado, de los vectores virales tpicos

Inconveniente Complicada preparacin preparacin

Biolgicos

Los mtodos biolgicos utilizan fundamentalmente virus para transportar los genes de inters.

se suelen eliminar los genes implicados en la replicacin para hacerlos ms seguros, eficaces y aumentar el tamao del gen a transportar.

Entre las ventajas que tiene la utilizacin de virus estn su especificidad en la unin a las clulas, el eficaz transporte hacia el ncleo celular del gen transportado y la capacidad para evitar la degradacin intracelular.

son los vectores ms sencillos de producir y de obtener en grandes cantidades

Son de los vectores virales ms utilizados en la actualidad

provocan una importante respuesta inmunitaria e inflamatoria

pueden actuar tanto en clulas que estn proliferando como en aquellas que no lo estn.

Adenovirus

generan anticuerpos neutralizant es

gran eficiencia para transferir genes, especialment e in vivo.

poco indicados para tratar enfermedades crnicas.

No se integran en el genoma de las clulas diana.

Retrovirus

S que integran el transgn en el cromosoma de la clula diana, lo que produce una expresin ms prolongada del transgn introducido

La eficacia de la transfeccin es buena en los procedimientos ex vivo, en cambio, in vivo, es muy poco eficiente pues son inactivados rpidamente por el sistema del complemento

Slo penetran en el ncleo durante la fase de mitosis, de manera que la restringe a las clulas que estn proliferando.

Ejemplos de aplicaciones potenciales de los retrovirus son las enfermedades oncolgicas, las alteraciones hematopoyticas y el SIDA.

Lentivirus

Es especialmente notable su capacidad para introducir genes en clulas madre del sistema hematopoytico

Su resistencia a la inactivacin los hace tiles en aplicaciones in vivo

ventajas de los lentivirus es su facultad para integrarse y transferir genes tanto en clulas en proliferacin como en aquellas que no lo estn.

Virus adenoasociados

VENTAJAS

Destacan frente a los otros vectores virales en el hecho de que la expresin del transgn que transfieren dura varios meses e incluso aos in vivo (enfermedades crnicas)

Presentan como principales inconvenientes un tamao de inserto, que no supera las 4.5 kb, las dificultades de produccin.

DESVENTAJAS

Criterios para seleccionar una enfermedad humana como candidata al tratamiento mediante terapia gnica son:
Los rganos, tejidos y tipos celulares afectados por la enfermedad han de estar bien caracterizados.

La enfermedad ha de amenazar gravemente la vida del paciente.

La versin normal del gen defectuoso debe haber sido aislada y clonada.

El gen normal ha de poder ser introducido en una fraccin significativa de clulas del tejido afectado

El gen debe poderse expresar adecuadamente, generando una cantidad suficiente de protena normal.