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2. 3.
Un sensor, que sirve como elemento de reconocimiento (Por ejemplo: anticuerpos, protenas receptoras, cidos nucleicos, antgenos o enzimas), que detectan la "seal. Un transductor, que traduce la seal emitida por el sensor. Un procesador de seal que transmite y muestra los resultados
Los biosensores se pueden clasificar de la siguiente forma, en base el tipo de transductor: Biosensores pticos (fluorescentes). Biosensores a base de masa (acsticos de ondas) Biosensores electroqumicos y calorimtricas (Conductimtrica)
Biosensores pticos
stos miden la luz observada o emitida como resultado de una reaccin biolgica y /o qumica. Adems de que se pueden clasificarse basndonos en su luminiscencia , fluorescencia , colorimetra o interferometra . Debido que son muy sensibles, se pueden utilizar por ejemplo pre - tratamiento de las dosis efectivas de drogas
Del mismo modo, los biosensores de ondas acsticas conduce a un cambio en la frecuencia de salida ,que se puede utilizar para medir la concentracin de un analto indirectamente. Son muy fciles de usar y ms baratos que los anteriores, pero carecen de especificidad , selectividad y sensibilidad
Biosensores calorimtricos
Son menos comunes que los otros tipos, miden los cambios en el calor debido a reacciones exotrmicas entre la biomolcula sobre los sensores de temperatura y el analto , determinando as la concentracin de este. Son insensibles a las propiedades pticas y electroqumicas de la de la muestra , y se han utilizado para analizar alimentos y cosmticos farmacuticos
Biosensores electroqumicos
Miden la seal electroqumica producida durante una interaccin bioqumica entre una sustancia biolgicamente activa y un sustrato en el que las especies electroqumicas se consumen o se generan. Se pueden dividir en biosensores amperomtricos, potenciomtricos y de conductividad en funcin de la propiedad electroqumica miden.
Los dos primeros son los ms utilizados : Biosensores potenciomtricos tienen electrodos selectivos de iones que permiten detectar una respuesta elctrica en el elemento de reconocimiento molecular , Biosensores amperomtricos, miden la corriente producida por el potencial situado entre dos electrodos.
Biosensores conductomtricos , miden la resistencia de una solucin determinada, por los cambios en la funcin de los iones o electrones, producidos durante el curso de una reaccin bioqumica entre el biocomponente y el analito
ENZIMAS
utilizan las capacidades catalticas y de unin de enzimas para la deteccin especfica, son mucho ms sensibles que otros biosensores; los productos de las reacciones catalizadas por enzimas se pueden detectar directamente o por medio de un marcador .
Biosensores antigeno/anticuerpo
Utilizan
el enlace altamente especfico entre un antgeno y su anticuerpo; esta unin (puede ser detectado por medio de marcaje fluorescente) debe ocurrir bajo condiciones en las que se minimizan las interacciones no especficas .
cidos nucleicos
Utilizan las relaciones complementarias especficas de pares de bases de ADN, por ejemplo, pueden detectar pequeas cantidades de ADN bacteriano al hibridarlo con una cadena complementaria de ADN conocida.
Las
tres tcnicas fundamentales para excitar la resonancia de plasmn de superficie son: acoplamiento prisma gua de ondas de acoplamiento el acoplamiento de rejilla : la ms ampliamente utilizado es el mtodo de Kretschmann , que hace uso de un acoplador de prisma y la pelcula metlica delgada
SPR por s mismo no es una tcnica selectiva , los componentes de reconocimiento molecular a menudo se inmovilizan en la superficie de deteccin con el fin de aumentar el rendimiento.
Los ms recientes aplicaciones clnicas de los biosensores SPR incluyen la evaluacin de la diferenciacin osteognica de las clulas madre mesenquimales en la base de las diferencias en las propiedades pticas de la superficie de la clula causado por la unin especfica antgenoanticuerpo.
Tcnica en la que un fluorforo donante transfiere su energa a un aceptor fluorforo vecino, haciendo as que el aceptor emita fluorescencia en su longitud de onda caracterstica, la luz emitida puede ser capturado por un sensor y ser medido . El xito de la transferencia de energa entre el donante y el aceptor requiere tres condiciones:
el donante y el aceptor deben estar en estrecha proximidad ( 1-10 nanmetros ) tener una alineacin dipolo - dipolo favorables compartir superposicin espectral significativas ( al menos 30 % )
FRET
fluorforos donador y aceptor pueden ser conjugados para formar mltiples biomolculas, permitiendo el diseo de ensayos funcionales que se pueden utilizar para estudiar diferentes tipos de unin, incluyendo la unin protena-protena, unin antgenoanticuerpo, la unin ligando-receptor, ADN o ARN hibridacin, y el ADN o ARNprotena de unin.
Se asemeja FRET en muchos aspectos, pero no requiere una fuente de luz externa para la excitacin del donante. El donante es generalmente una enzima que emite luz durante la catlisis de la oxidacin de su sustrato y el aceptor es una protena fluorescente que absorbe la energa del donante y emite luz a una ya longitud de onda. El cambio en la relacin de luminiscencia puede ser analizada cuantitativamente.
Dos
ejemplos de las ms recientes aplicaciones de biosensores BRET son la monitorizacin en tiempo real de procesamiento de citoquinas IL - 1 en los macrfagos, y el anlisis de los cambios inducidos por agonistas en la compartimentacin de los receptores de angiotensina de tipo I.
Aplicaciones clinicas
Los biosensores estn involucrados en muchas reas de trabajo: en la industria alimentaria, en ciencias forenses, en seguridad
Endocrinologa
El
primer sensor para medir glucosa fue construido en 1962 por Clark y Lyons. aplicacin principal de un biosensor es la medicin de carbohidratos en sangre. basan en una reaccin donde participa la oxido-reductasa.
La
Se
Endocrinologa
El primer biosensor exitoso de glucosa apareci en
Endocrinologa
En
dispositivos de segunda generacin el oxgeno fue reemplazado por aceptores de electrones no fisiolgicos como ferroceno, tionina o azul de metileno.
Endocrinologa
La
tercera generacin no requiere de reactivos y se basa en la transferencia directa entre las enzimas y el electrodo; monitoreo en casa.
Endocrinologa
Los
biosensores actualmente desarrollados pretenden usar celobiosa deshidrogenasa como una alternativa para oxidar glucosa. biosensores de glucosa acaparn el 90% del mercado de biomarcadores.
Los
Microbiologa
Las
infecciones bacterianas, por ejemplo en tracto urinario, son una causa frecuente de morbilidad y procesar muestras de orina puede ser tardado y costoso. identificacin de bacterias puede llevarse a cabo con biosensores electroqumicos de DNA.
La
Microbiologa
Liao
et al. Utilizo 16 sensores electroqumicos diferentes, cada uno consiste en 3 electrodos de oro de una capa y se inserta una secuencia de DNA para un patgeno especifico.
Se obtiene el RNA16s por lisis y luego hibridado y detectado con una molcula fluorescente (HRP)
Microbiologa
Se
pueden identificar mas de 2,500 especies uropatognicas de bacterias en 45 minutos sin necesidad de llevar a cabo tcnicas como PCR
Oncologa
Un diagnostico rpido es crucial para el bienestar del paciente as como el control de la enfermedad.
El
Oncologa
Los
biomarcadores pueden ser detectados por bio-sensores que se basan en el reconocimiento de anticuerpos y antgenos. Sus interacciones forman inmunocomplejos y tienen la ventaja de ser mas baratos, rpidos y flexibles que otros mtodos.
actividad proteosomica es considerada un biomarcador para el monitoreo de pacientes con varios tipos de cncer u otras enfermedades. desarroll un SPRI que mide la interaccin entre la unidad B% y un inhibidor inmovilizado.
Gorodkiewicz,
en una serie de electrodos, cada uno contiene un antgeno inmovilizado y es capaz de detectar un marcador especifico. especificidad es comparable con la que se obtiene con ELISA y realizarlo de forma simultanea reduce su costo.
La
requiere detectar VEGFR-1 el cual esta asociado a leucemia mieloide aguda y sndromes mielodisplasicos. desarroll un mtodo basado en la inmovilizacin del ligando fisiolgico VEGF-A utilizando SPR.
Pimkova,
unin del analito al elemento de reconocimiento molecular en la superficie del sensor causa un cambio en la refraccin, y la cantidad de analito es cuantificado midiendo el cambio en la longitud de onda resonante. 25n/mL por lo que puede utilizarse este estudio como modelo para futuros biosensores.
Aplicaciones en Oncohematologa
Biosensores para el diagnstico de leucemia
Medley desarroll un ensayo colorimtrico basado en aptmeros conjugados con nanopartculas de oro que son capaces de distinguir las muestra cancerosas de las que no lo son.
La tecnologa de deteccin colorimtrica utiliza las propiedades pticas de las nanopartculas de oro y de resonancia de plasmones, que mide la variacin en los espectros de absorcin y perfiles de dispersin cuando dos nanopartculas estn cerca la una de la otra, y conduce a cambios en el color y en el espectro de absorcin de la muestra.
En este experimento, once muestras de aspirado de mdula de pacientes con leucemia se diluyeron en una solucin tampn de fosfato estril, y luego se introdujeron en los diferentes puntos de deteccin de un sensor en los que los anticuerpos monoclonales anti-CD33 se fijaron anteriormente.
Despus de 30 minutos de interaccin, las soluciones de muestras se retiraron y se encontr que las longitudes de onda haban aumentado como resultado del cambio en el ndice de refraccin causado por la afinidad de unin de las clulas.
Ventajas en comparacin con la citometra de flujo: El sistema es ms barato ms barato Es ms fcil de construir ya que no requiere la separacin de clulas ni del marcaje. Deventajas: La prdida completa de los parmetros morfolgicos. Dificultad terica de desarrollo de biosensores que pueden detectar mltiples marcadores de superficie celular.
Biosensores microbianos bioluminiscentes para la evaluacin de la sensibilidad de AraC de las clulas leucmicas
Cualquier alteracin en el metabolismo de las clulas de las bacterias bioluminiscentes provoca un cambio en la emisin de luz , que se incrementa en el caso de dao en el DNA. Por consiguiente, las concentraciones intracelulares de Ara - CTP y sus efectos farmacolgicos sobre el ADN se detectaron por medio de la salida de luz desde el biosensor bacteriano.
El
ensayo de biosensor basado podra ser utilizado de forma rutinaria en la prctica clnica para predecir la sensibilidad de las clulas leucmicas a Ara - C antes de exponer a los pacientes a la quimioterapia.
FRET biosensor para la evaluacin de la eficacia de imatinib en pacientes con leucemia mieloide crnica
La leucemia mieloide crnica ( LMC ) es un trastorno mieloproliferativo citogenticamente se caracterizan por la presencia del cromosoma Filadelfia ( Ph ) , que se origina a partir de una translocacin recproca entre los brazos largos de los cromosomas 9 y 22 y conduce a la formacin de un nuevo gen de fusin llamado BCR-ABL.
Inhibidores de la tirosina cinasa ( ITC) actan bloqueando el sitio de unin del ATP de BCR- ABL , y son medicamentos esenciales para el tratamiento de la LMC y otros tumores malignos como los tumores del estroma gastrointestinal
Representacin esquemtica de las salmueras fosforilados y no fosforilados. P e Y representan, respectivamente, un grupo fosfato y un residuo de tirosina. Al Y de fosforilo-cin, el dominio SH2 que se une a la tirosina fosfoilada, lo que aumenta la eficiencia de FRET de ECFP a Venus.
medida que estas clulas pueden ser la causa principal de la LMC recada y fracaso teraputico, Pickles podran ser usados para cuantificar la presencia de clulas resistentes a los diferentes TKIs en muestras de mdula sea de pacientes con LMC, por lo tanto posiblemente ayudando a los mdicos para optimizar la terapia de TKI y maximizar las posibilidades de xito