Luis Alberto Condezo Hoyos. Eduardo Ramirez Asquieri CENTRO DE INVESTIGACIN: Universidad Nacional Agraria De La Selva (UNAS) Tingo Mara- Per EXPOSITORES: Pablo Serrano, Elizabeth Katherin Sucasaca Quispe, Dianeth Vilcayauri Delgado, Ana
ANTOCIANINAS, CIDO ASCRBICO, POLIFENOLES TOTALES Y ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE, EN LA CSCARA DE Myrciaria dubia RESUMEN
Este trabajo fue realizado en la UNAS, Tingo Mara, Per. Evaluaron el contenido de antocianinas, cido ascrbico, y polifenoles totales, en la cscara fresca y seca de camu-camu en diferentes estados de madurez; usando diferentes tipos de radicales y correlacionaron el valor de cido ascrbico y polifenoles totales con la actividad antioxidante. La extraccin fue realizada en medio acuoso. El extracto de la cscara madura fresca mostr las concentraciones ms elevadas de cido ascrbico y antocianinas, mientras que el extracto de la cscara seca del pintn mostr el mayor valor de cido ascrbico y polifenoles totales. La mayor actividad antioxidante, fue el extracto de la cscara seca de muestra pintn, frente a los radicales utilizados.
OBJETIVOS ESPECFICOS Evaluar el contenido de cido ascrbico, antocianinas y polifenoles totales, en la cscara fresca y seca de camu-camu (Myrciaria dubia) en diferentes tiempos de maduracin. Evaluar la actividad antioxidante usando diferentes tipos de radicales en la cscara seca y correlacionar el contenido de cido ascrbico y polifenoles totales con la actividad antioxidante.
OBJETIVOS GENERAL Cuantificar el contenido de polifenoles totales y la actividad antioxidantes. INTRODUCCIN El camu-camu (Myrciaria dubia) es una fruta nativa que se encuentra en la Amazonia Peruana; esta se caracteriza principalmente por su alto contenido en cido ascrbico, que supera significativamente a otros ctricos. Los antioxidantes naturales son apreciados porque pueden ser usados en el diseo de alimentos benficos para la salud, debido a su capacidad de neutralizar radicales libres, que contienen uno o ms electrones desapareados porque al colisionar con el Radical Libre (RL) le cede un electrn, oxidndose a su vez y transformndose en un RL dbil no txico.
Reino: Plantae Divisin: Magnoliophyta Clase: Magnoliopsida Subclase: Rosidae Orden: Myrtales Familia: Myrtaceae Subfamilia: Myrtoideae Tribu: Myrteae Gnero: Myrciaria Especie: M. dubia TAXONOMIA DE LA ESPECIE VEGETAL
Figura 1. Myrciaria dubia DIFERENCIAS DE METABOLITOS Figura n2: muestras de metabolitos primarios Figura n3: muestras de metabolitos secundarios. Figura n4: RUTAS BIOGENTICAS DE METABOLITOS SECUNDARIOS Flavonoides Antocianinas Taninos condensados METABOLISM O SECUNDARIO RUTA AC.SHIKIMATO Fenoles simples cidos fenolicos Cumarinas Taninos glicos Lignanos
AMINOCIDOS Alcaloides RUTA AC. MEVALONICO Terpenos Esteroi des RUTA ACETATO MALONATO Quinonas Antraquinonas Figura n5: RUTA DEL CIDO SHIKMICO POLIFENOLES TOTALES
Conjunto heterogneo de molculas que comparten la caracterstica de poseer en su estructura varios grupos bencnicos sustituidos por funciones hidroxilicas.
Clasificacin de los compuestos fenolicos NO FLAVONOIDES Serie Benzoico Serie Cinmica Estilbenos Taninos hidrolizables FLAVONOIDES Antocianos Flavanoles Oligmeros Flavonas Flavonoles Monmero s Taninos Condensados Isoflavonas Figura n6: 1- fenolbenceno Esquema n1: Clasificacin de los polifenoles Figura n8 :Estructura qumica y ejemplos de pelargonidina (geranios), cianidina (ciruelas negras) y delfinidina en especies como las violetas Figura n7: Estructura y sustituyentes de las antocianinas COMPUESTOS FENOLICOS DEL TIPO FLAVONOIDES ANTOCIANINAS Las antocianinas son los responsables de la gama de colores desde rojo-azul, pertenecientes a la familia de los flavonoides, compuestos por dos anillos aromticos A y B unidos por una cadena de 3 C. EFECTO DEL pH Figura n9: Estructura y estabilidad de las antocianinas a diferentes valores de pH. La acidez tiene un efecto protector sobre la molcula. En soluciones acuosas a valores de pH inferiores a dos, s encuentra en su forma ms estable de catin flavilio de color rojo intenso. Tanto la pseudobase como la chalcona, son formas incoloras y bastante inestables. ANTOCIANINAS DELFIDINA-3-GLUCOSIDO Frmula estructural: 2-(3,4,5- trihydroxyphenyl)chromenylium-3,5,7-triol Figura n 10: Estructura de la delfidina-3-glucosido ANTOCIANINAS cianidina-3-glucosido Frmula estructural: 3,5,7,3',4'- Pentahidroxyflavilium, 2-(3,4-Dihidroxifenil)-3,5,7- trihidroxi-1-Benzopirilium
Figura n11: Estructura de la cianidina-3- glucosido ANTIOXIDANTES Son compuestos que inhiben o retrasan la oxidacin de otras molculas mediante la inhibicin de la propagacin de la reaccin de oxidacin. Figura n12: reaccin qumica de la molcula antioxidante
ACIDO ASCRBICO Figura n13:Oxidacin del acido ascrbico El cido ascrbico (AA) es muy sensible a la oxidacin, el calor y la luz aceleran el proceso. En tanto que factores como el pH, la concentracin de oxgeno y la actividad del agua, influyen poderosamente en la actividad de la reaccin. MTODO pH Diferencial Permite la estimacin del contenido de antocianinas mediante el empleo de un agente blanqueador (sulfito de sodio, perxido de hidrgeno), y la medicin por espectroscopia de UV- VIS. MTODO REPORTADO POR HUNG Y YEN Determinacin del cido ascrbico por titulacin con el reactivo 2,6-diclorofenolindofenol, la que se reduce por medio del cido ascrbico. Figura n13 : reaccin del 2,6-diclofenolindofenol frente al cido ascrbico. MTODO DE AZUL DE PRUSIA Este mtodo se basa en la reduccin de los iones Fe 3+ a Fe 2+ , por los polifenoles mostrando una coloracin azul conocido como azul de prusia formando el complejo ferrocianuro ferroso. Tiene como ventaja la rapidez de la prueba debido a la formacin del color azul, lo que ofrece versatilidad para la determinacin espectrofotomtrica. MTODO PARA CUANTIFICAR ANTIOXIDANTES 1.- DDPH El mtodo se basa en la capacidad del radical libre estable 1,1-difenil-2- picrilhidrazilo para reaccionar con donadores de H. Presenta un mximo de absorbancia a 515 nm y genera un producto incoloro cuando captura un antioxidante.
Figura n 14: Reaccin del DPPH 2.- ABTS + Mide el tiempo que tarda el radical ABTS en ser oxidado hasta el radical libre estable ABTS + en presencia de compuestos antioxidantes como los polifenoles, que retarden dicha oxidacin o bien disminuyen la absorbancia de la disolucin por captura del radical. La absorbancia se mide a 734 nm, longitud de onda en la que el radical coloreado presenta un mximo de absorcin Es el ms indicado para ensayos de compuestos coloreados, ( antocianinas del camu camu).
3. PEROXILO
Con este mtodo se cuantifico la actividad antioxidante mediante el radical libre pirxilo Un radical libre es un molcula que tiene uno o ms electrones no apareados girando en sus rbitas externas. Es por esto que el perxido acta oxidando molculas en la muestra para as adquirir un equilibrio qumico. DISEO EXPERIMENTAL 1.-TOMA DE MUESTRAS 2.-CUANTIFICACIN DE ANTOCIANINAS 3.- CUANTIFICACIN DE CIDO ASCRBICO 4.-CUANTIFICACIN DE POLIFENOLES 5.- CUANTIFICACIN ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE: Mtodo de DDPH Mtodo de ABTS +
Mtodo de perxilo
Estados de Maduracin Color de la Cscara Consistencia del fruto Fotografa 01 (Verde) 0-25 % de pigmentacin rojiza Rgida y dura 02 (Pintn) 26-50 % de pigmentacin rojiza Rgida 03 (maduro) 75-100 % de pigmentacin rojiza Rgida Tabla 1 .-Atributos fsicos de las muestras biolgicas de los frutos de camu camu empledos MUESTRAS BIOLGICAS CUANTIFICACIN DE ANTOCIANINAS MTODO DEL pH DIFERENCIAL Agitacin Filtro 2 alcuotas (2mL c/u) Buffer pH 1.0 Buffer pH 4.5 Registrada a 510 nm 0.5g de muestra Solvente agua CUANTIFICACION DE CIDO ASCRBICO MTODO REPORTADO POR HUNG YEN Muestra 100uL Extracto acuoso 900uL de 2.6 diclorofenolin dofenol Muestra control 100uL de cido oxlico 900uL de 2.6 diclorofenoli ndofenol Absorbancia a 510nm CUANTIFICACIN DE POLIFENOLES TOTALES MTODO DE AZUL DE PRUSIA 1mL de Extracto acuoso 3mL de FeCl3 0.1M en HCl 0.1N 3mL de K3Fe(CN)6 0.008M Absorbancia 720nm RADICAL 2.2-DIPHENYL-1-PICRILHYDRAYL (DPPH) MTODO DE AZUL DE PRUSSIAN Etanol al 96% 950uL de DPPH (100uM) 50uL de muestra Absorbancia a 515nm EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE EN LA CASCARA DE CAMU-CAMU (3-etilenbenzotiazolino-6cido sulfnico) (ABTS + ) Mtodo reportado por Pelligrini (1999). REALIZADO 100uL de extracto acuoso en tres estados de madures. DILUCIONES Con 900uL de ABTS +
REACCIN Por tiempo de 10 minutos. Absorbancia a 374 nm RADICAL PEROXILO Mtodo de TRAP 10uL de extracto Reaccionar con 990uL del radical pirxilo Absorbanci a a 414nm a intervalos de 30 segundos durante 10 m TRAP ( Poder Total de Actividad Reductora) Se observa que en estado fresco la cascara maduro de camu-camu, presenta mayor contenido de antocianinas ANTOCIANINAS CIDO ASCRBICO Figura N1:Contenido de cido ascrbico de la cascara de camu-camu en estado fresco y seco. POLIFENOLES TOTALES
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTES DPPH ABTS +
Tabla 3. Coeficiente de inhibicin de la cascara del camu camu frente al cation ABST RADICAL PEROXILO CONCLUSIONES La mayor actividad antioxidante lo present el extracto acuoso de la cscara seca del fruto pintn La cscara de camu-camu en estado fresco que present el mayor contenido en antocianinas y cido ascrbico fue la madura La mayor actividad antioxidante, fue el extractos de la cscara seca de muestra pintn, frente a los radicales DPPH, ABTS+ y Peroxilo.
GLORIA ASTRID GARZN, LAS ANTOCIANINAS COMO COLORANTES NATURALES Y COMPUESTOS BIOACTIVOS, ENCONTRADO EN: http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S0120- 548X2008000300002&script=sci_arttext LILIANA ANDREA SANTACRUZ CIFUENTES, ANLISIS QUMICO DE ANTOCIANINAS EN FRUTOS SILVESTRES COLOMBIANOS, ENCONTRADO EN : http://www.bdigital.unal.edu.co/5351/1/197518.2011.pdf GREGORIO MARTINEZ SANCHEZ,ESPECIES REACTIVAS DEL OXGENO Y BALANCE REDOX, PARTE I: ASPECTOS BSICOS Y PRINCIPALES ESPECIES REACTIVAS DEL OXGENO,ENCONTRADO EN : http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0034- 75152005000300009&script=sci_arttext ENA VILMA VELAZCO CASTRO, RODNEY VEGA VIZCARRA, ESTABILIDAD DEL CIDO ASCRBICO EN PRODUCTOS ELABORADOS DE CAMU CAMU Myrciaria dubia, ENCONTARDO EN : http://www.iiap.org.pe/promamazonia/sbiocomercio/Upload%5CLineas%5CDo cumentos/254.pdf
Al Principio Dios Creo El Cielo y La Tierra A Las Plantas y Animales Hasta Que Al Final Creó Al Hombre y A La Mujer A Su Imagen y Semejanza Rodeada de Toda La Creación y de Seres Que Ahor
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