Enzimas

Historia
1700s estudios en la digestin de carne
1800s conversin del almidn en azcar por la saliva y
extractos de plantas
1850s Louis Pasteur la fermentacin, del azcar hasta
alcohol es catalizado por fermentos
1897 Eduard Buchner fermentacin es promovida por
molculas. Frederick W. Kuhne llam a estas molculas
ENZIMAS.
1962 Cristalizacin de la ureasa James Sumner
Qu es una enzima?
Es un tipo de protena que acta como catalizador de
reacciones qumicas.
Incrementa la velocidad de reaccin sin cambiar el
punto de equilibrio.
Como catalizador:
Es especfico para cada reaccin. No necesariamente
para un solo sustrato, aunque muchas enzimas lo son.
Tiene gran poder cataltico, transformando hasta 10
3
a
10
4
molculas por segundo.
Est sujeto a diversos mecanismos de regulacin de
modo tal que no genere ms producto que el necesario.

Qu hace un catalizador?
Reduce la barrera de energa para una reaccin
por lo que ms molculas alcanzan la energa de
transicin. No tiene efecto sobre la posicin de
equilibrio
Como lo hace?
Forzando la molcula a
un estado intermediario
que se parece al de
transicin pero de
menor energa.
Puede reunir dos
molculas reactivas en
la orientacin adecuada,
aumentando su
reactividad
Orienta partes de la
molcula de forma
adecuada para alcanzar
la transicin.


Modelos de actividad Enzimtica
Enzima y sustrato se unen a travs de un sitio activo. Este
es una hendidura en la protena, rodeada de cadenas
laterales de aminocidos que se unen al sustrato y de
otras cadenas laterales que intervienen en la catlisis. El
ajuste es muy estrecho por lo que explica la especificidad.
Modelo cerradura-llave: explica la especificidad, pero no
la catlisis. Emil Fischer
Modelo de ajuste inducido: la enzima no acepta
simplemente el sustrato, sino que exige que este se
distorsione a algo cercano al estado de transicin.
Modelos de actividad Enzimtica
Todas las enzimas son protenas con excepcin de un pequeo
grupo de molculas catalticas de RNA
Se conocen mas de 3000 enzimas.
Las enzimas son catalizadores biolgicos que aceleran la reaccin.
Las enzimas son altamente especificas y reaccionan solo con un
sustrato para formar un producto y puede acelerar la reaccin en
ms de 10
17
.
Importante
Las enzimas tienen un rango de magnitud de incrementar la reaccin
de 5 a 17 ordenes de magnitud
Importante
Tipos de enzimas por accin
Enzimas extracelulares, exocelulares o
exoenzimas.- tienen accin cataltica fuera
de la clula. Ejemplo amilasa
Enzimas intracelulares, endocelulares o
endoenzimas. Cuya accin cataltica se
limita al interior de la clula.
Algunas enzimas requieren un
componente quimico adicional
denominado cofactores.

Las coenzimas actan como portadores
transitorios de grupos funcionales
especficos


Cofactores / coenzima
Un cofactor o coenzima que es muy relacionado o se
enlaza covalentemente a una protena enzimtica es
llamada grupo prosttico.
La enzima activa o completa es llamada holoenzima
La Parte proteica (sin cofactor y/o coenzima): apoenzima
o apoproteina
Cofactor / coenzima
Clasificacin de las Enzimas
Clase de enzima Tipo de reaccin catalizada
Oxidoreductasas
Reacciones que transfieren electrones de un sustrato
a otro.xido reduccin
Transferasas
Transfieren un grupo funcional de una molcula a otra.
Grupos como metilos, acilos, fosfatos etc
Hidrolasas
Rompen enlaces entre carbonos u otras molculas
con la adicin de una molcula de agua.
Liasas
Rompen enlaces C-C, C-S, C-N sin el ingreso de una
molcula de agua.
Isomerasas
Transforman un ismero en otro transfiriendo un grupo
funcional de una posicin a otra.
Ligasas
Forman enlaces C-C, C-N, C-O y C-S uniendo dos
molculas con gasto de energa.
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de transferencia de hidrgeno (H) o
electrones (e-) de un sustrato a otro
AH
2
+ B

A + BH
2

A
red
+ B
ox


A
ox
+ B
red

Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo qumico (distinto del
hidrgeno) de un sustrato a otro
A-B + C

A + C-B
Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrlisis
A-B + H
2
O

AH + B-OH
Clase 4: LIASAS
Catalizan reacciones de ruptura o unin de sustratos
A-B

A + B
Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversin de ismeros
A

B
Fosfoglucosa isomerasa
EC 5.
Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis simultnea
de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.)
A + B + XTP

A-B + XDP + P
i

Especificidad y sitio activo
Las reacciones se inician
cuando el sustrato se une al
sitio activo de la enzima.
El sitio activo es una porcin
espacial de la enzima creada
por la coincidencia de varias
cadenas laterales de amino-
cidos especficos. Estos
pueden no estar en
secuencia, pero los dobleces
de la protena enzimtica los
aproximan.
enzima
sustrato
enzima
productos
Localizacin enzimtica
Las enzimas ejercen su
funcin predominantemente
en el interior celular. Mas
an lo hacen en determinado
organelo de la clula.
Las enzimas que se
encuentran en el plasma o
lquidos diversos
corresponden a aquellas que
se estn eliminando y muy
pocas como la LCAT (Lecitina
colesterol acil transferasa),
LLP (Lipasa lipoproteica),
ejercen su funcin a nivel
plasmtico.
Succinato deshidro-
genasa.Citocromo oxidasa
Mitocondria
Catalasa
Peroxisoma
Alfa manosidasa
Complejo Golgi
Retculo endoplasma
Glucosa 6 fosfatasa
Na/K ATPasa
membrana
Factores que modifican la reaccin
enzimtica

La velocidad de una reaccin mediada por
enzimas est influenciada por:

Temperatura del medio
El pH del medio
Concentracin de la enzima
Concentracin del sustrato
Temperatura
No existe actividad enzimtica a -273C
o cero absoluto.
A partir de esa temperatura los incre-
mentos provocan mayor actividad enzi-
mtica. La que se expresa como coefi-
ciente de temperatura o Q
10
. Esto es, el
incremento de actividad por cada 10C
de aumento de temperatura.
En trminos generales Q
10
= 2, es decir
que por cada 10C de temperatura la
velocidad se dobla.
Existe una temperatura ptima tras la
cual los aumentos provocan
desnaturalizacin de la protena
enzimtica y prdida de la actividad.
temperatura
a
c
t
i
v
i
d
a
d

0 70
pH
Cada enzima tiene un pH
ptimo de trabajo, el cul es
variable. Las enzimas intra-
celulares trabajan entre 5 y 9 ,
las enzimas digestivas pueden
trabajar en pH diferentes.

Los extremos de pH afectan la
ionizacin de los centros
activos (-COO
-
(glutamico,
aspartico) NH3
+
(arginina,
lisina,histidina) SH (Cisteina,
metionina)).
X
Y
X
H Y
H X
H Y
Enzima Enzima Enzima

pH cido (inac) pH ptimo (activo) pH alcalino (inac)

pH
0
14
Concentracin de la enzima y
constante de equilibrio
La concentracin de la enzima incrementa la velocidad de la
reaccin, pero no modifica la constante de equilibrio.
As, si la reaccin se produce en ausencia de la enzima...


La constante de equilibrio ser:


Y, si la reaccin se produce en presencia de la enzima...


La constante de equilibrio ser:
P S
K
K

1
1
) (
) (
1
1
S
P
K
K
Keq

P Enz S Enz
K
K

1
1
) (
) (
) )( (
) )( (
1
1
S
P
S Enz
P Enz
K
K
Keq

Cintica qumica: cintica enzimtica
Las reacciones qumicas son:
De primer orden si son dependientes de la concentracin de
sustrato
De orden cero si son independientes de la concentracin de
sustrato
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas, manteniendo
condiciones ptimas en la mayora de factores: pH
temp, tiempo, concent.de enzima, conc. De sustrato etc

Cintica enzimtica.....
Concentracin del sustrato
Si se aumenta la concentracin
del sustrato, manteniendo cons-
tante las dems variables, la
velocidad inicial de reaccin (Vi)
aumenta hasta un valor mximo
(Vmax) el que se estabiliza.
Se dice bajo estas condiciones
que la enzima est saturada con
el sustrato. Esto se produce de
acuerdo a la afinidad enzima
sustrato.
S
Vmax
Vmax/2
Km.
Primer
orden
Orden
cero
Leonor Michelis y Maud Menten (1913)
Ecuacin de Michaelis Menten
La relacin entre velocidad de reaccin y concentracin de
sustrato se describe en la frmula:




Bajo estas condiciones Vmax se observa cuando todos los sitios activos
estn llenos de sustrato. Toda la enzima est bajo la forma de [ES] y la
Km se define como concentracin de sustrato a Vmax/2
Vmax: es un ndice de la eficiencia de una enzima. Es la velocidad cuando
todos los sitios activos estn saturados, y es proporcional a la
concentracin de la enzima. Sus unidades son unidades de velocidad.
Km: es una medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato.
Una baja Km indica alta afinidad entre enzima y sustrato. Las unidades de
Km son unidades de concentracin.
] [
] [
S Km
S Vmax
v

Km: expresin de afinidad

S
Vmax
Vmax/2
Km. Km Glucoquinasa
(hgado)
Hexoquinasa
(cerebro)
La aplicacin de la ecuacin de
Michaelis Menten se basa en...
La concentracin de sustrato es tan grande con respecto a la de
enzima, que la formacin de ES no altera significativamente la
concentracin de sustrato.
Al inicio de la reaccin la concentracin del producto es tan
insignificante que la velocidad descrita como k4 puede ser
ignorada.
La velocidad de transformacin de ES en E+P(k3) es el factor
limitante de la reaccin.
La formacin de ES es rpida y reversible y es igual a la velocidad
de desaparicin de ES.
P E ES S E
K
K
K
K


3
4
1
2
Reacciones de multisustrato
Captacin indistinta..Cada sustrato ser captado en
su momento, generalmente uno es preferente:





Hexoquinasa, glucosa? Galactosa?
Reacciones de multisustrato
Captacin ordenada de sustratos para unir
un sustrato debe unirse otro primero




Reacciones de oxidorreduccin co-
catalizadas por NAD
Reacciones de multisustrato
Mecanismo ping-pong cuando existe una secuencia
cataltica. La enzima se modifica por persistencia de un
fragmento del primer sustrato.








Enzimas proteolticas
Grfica de Lineweaver Burk
La grfica de Lineweaver
Burk es usada para obtener
Vmax y Km.
Se usa la inversa de la ecua-
cin de Michaelis Menten.



Cuando 1/v se grafica frente a
1/s se obtiene una recta,
donde la pendiente es
Km/Vmax.
La interseccin en el eje de y
es igual a 1/Vmax y la del eje
de x es igual a 1/Km.
Vmax S Vmax
km
v
1
] [
1
.
1

1/v
1/[S]
1/Vmax
-1/Km
Inhibidores competitivos
Estructuras semejantes al sustrato que compiten con l por el mismo
centro activo.
Sus efectos pueden revertirse si se incrementa la concentracin del
sustrato hasta ocupar todos los centros activos.
La Vmax no cambia, pero si el Km porque se
necesita ms sustrato.
v
[S]
inhibidor
1/[S]
1/V
1/Vmax
-1/Km
Inhibidores competitivos
Inhibidores no competitivos
Estructuras diferentes al sustrato por lo que se unen a un sitio indepen-
diente de la enzima.
Ambos, sustrato e inhibidor pueden unirse a la enzima al mismo tiem-
po. Su efecto no puede revertirse aumentando la concentracin del
sustrato.
No tiene efecto sobre la Km pero s sobre la Vmax.
V
[S]
inhibidor
1/V
1/[S]
1/Vmax
-1/Km
Inhibicin
no competitiva
Inhibidores irreversibles
Reaccionan covalentemente con la cadena lateral de un aminocido
de la enzima, para formar un complejo estable permanentemente
inactivado.
Se les llama tambin substratos suicidas.
Su efecto es igual al de un inhibidor no competitivo.
Droga Uso teraputico Enzima afectada Tipo de inhibidor
Lovastatina Hipercolesterolemia HMGCoA reductasa Competitiva
5-fluouracil Cncer Timidilato sintetasa Irreversible
Metrotexate Cncer Dihidrofolato reductasa Competitiva
Alopurinol Gota Xantino oxidasa Irreversible
Cumadin Anticoagulante Glutamil carboxilasa Competitiva
Aspirina Antiinflamatorio Ciclooxigenasa Irreversible
Captopril Hipertensin art. Enz.convert.angiotensina Competitiva
Efecto clnico de los Inhibidores
Papel Clnico de las Enzimas
Si bien es cierto las enzimas cumplen su actividad en
el interior celular, es posible encontrarlas en los
lquidos biolgicos con cierta frecuencia.
Todas las enzimas plasmticas, las del LCR o
Pleural se encuentran en bajos niveles de
concentracin actividad- provenientes de los tejidos
ricos en ellas y generalmente de paso a un proceso de
destruccin heptica o eliminacin renal.
nicamente algunas enzimas como las del
metabolismo de lpidos (LCAT, LLP) o los factores
de coagulacin ejercen su actividad en el plasma o
suero.
Elevacin enzimtica en el
plasma...
La actividad enzimtica en el plasma y otros lquidos biolgicos
se produce por:
Necrosis: destruccin celular y vaciamiento de las enzimas
como en el infarto de miocardio, hepatitis viral.
Permeabilidad: aumento de permeabilidad de membrana
igual a necrosis.
Sobre produccin: mayor metabolismo en un tejido
-neoplasia-.
Menor eliminacin: no se elimina normalmente
-obstruccin biliar-.
Incremento de clulas inflamatorias: en lquidos como
Pleural los exudados se acompaan de aumento de actividad
enzimtica.
Origen de las enzimas
en el plasma
Enzimas Ejemplos
Especficas del plasma
Protrombina, plasmingeno,ceruloplasmina,
Lipasa Lipoproteica,colinoesterasa
Secretadas Amilasas, fosfatasa prosttica, pepsingeno
Del metabolismo celular
Lctico deshidrogenasa, aldolasa, aspartato y
alanina transferasa.
Uso de Enzimas en el diagnstico
Clnico
Uso de Enzimas en el diagnstico
Clnico
Uso de Enzimas en el diagnstico
Clnico

Uso de Enzimas en el diagnstico
Clnico

Uso de Enzimas en el diagnstico
Clnico
Isoenzimas
Enzimas que realizan la misma funcin pero difieren en su estructura
qumica y propiedades cinticas.
Las formas isoenzimticas distintas pueden pertenecer a distintos
tejidos revelando sus modificaciones el tejido que le dio origen.
Generalmente son estructuras oligomricas con varios tipos de cadenas
proteicas -dmeros o tetrmeros- .
Isoenzimas LDH
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
H

g
a
d
o
R
i

n
M
i
o
c
a
r
d
i
o
M

s
c
u
l
o
E
r
i
t
r
o
c
i
t
o
s
P
u
l
m
o
n
e
s
B
a
z
o
LDH1
LDH2
LDH3
LDH4
LDH5
%
Dehidrogenasa lctica
Existen cinco isoenzimas
de la deshidrogenasa lctica
(LDH). Cada una es un oli-
gmero con cuatro prot-
meros de los tipos H y M y
tiene un PM de 34 000.
Los protmeros se combi-
nan de manera distinta y se
originan en distintos tejidos
con preferencia.
El suero tiene un contenido
representativo de todos los
tejidos.
Isoenzima SubunidadesTejido predominante
LDH1 HHHH corazn
LDH2 HHHM corazn
LDH3 HHMM rin, pulmn
LDH4 HMMM hgado
LDH5 MMMM hgado
normal
infarto
Creatino fosfokinasa
Existen tres isoenzimas de
la creatino fosfokinasa.
Cada una es un dmero
formado por la combina-
cin de protmeros M y B.
Cada dmero representa a
un tejido en particular.
Isoenzima Subunidades Tejido predominante
CK1 BB Cerebro
Ck2 MB Msculo cardiaco
CK3 MM Msculo esqueltico
(+)
(-)
CK1
CK2
CK3
Modelo imaginario para catalizar la ruptura de una barra de metal
Moderna nocin de catlisis enzimtica Michael Polanyi 1921, Haldane 1930 y
elaborado finalmente por Linus Pauling 1946: La enzima debe ser complementario
al estado de transicion