INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnologa

DISEO DE PLANTAS
Equipo 1. 25-Ago-2014
Estudio comparativo de la produccin y purificacin
de penicilina por Penicillium chrysogenum aislada de
grasas y muestras ctricas.
Profesor:
Martnez Meza Isabel S.
Itzel Gonzlez Reyes
Rodrguez Rodrguez Ftima M.
Purificacin e Identificacin de la
Penicilina
La purificacin de la penicilina se llev a cabo
por filtracin del caldo.

1.- Se separan clulas microbianas y slidos.

2.- Se trat el caldo rico de penicilina con carbn
activado para eliminar impurezas y pigmentos.

3.- Se recuper la penicilina por extraccin
lquido-lquido (acetato de butilo)

4.- Se evaporo la muestra para recuperar los
solutos.
5.- La identificacin de la penicilina fue
realizada con TLC (cromatografa de capa
fina) con benceno-acetato de etilo-cido
actico
6.- Visualizador UV
Purificacin e Identificacin de la
Penicilina
Caracterizacin de la Penicilina purificada


El anlisis de la actividad de la penicilina fue llevada a
cabo en tres cepas patgenas Klebsella spp.,
Escherichia coli (E. coli), Staphylococcus aureus
(MRSA).

Se realizaron siembras en placas de agar de las
especies ya mencionadas y se seleccionaron las
muestras con mayores halos de inhibicin del ensayo.

Se colocaron en un pocillo 100 mL del extracto
purificado y del sobrenadante que contiene
penicilina.
Se incubaron a 37C para observar la inhibicin con
respecto a las cepas mencionadas.
Anlisis de penicilina por HPLC
Se llev a cabo en un equipo
SCIGENICS que tiene un
detector UV a 254 nm.
La columna de analisis
consista en la fase movil
(metanol): tampn de
fosfato (85/15 v/v), a un
flujo de mL/min.
Discusin
Se observ que el halo de inhibicin mostrado
como bueno para el ensayo fue de 30 mm, lo que
se asemeja al ensayo elaborado por Knudsen y
Randall (21 mm).

Se observ un diferente patrn de crecimiento para
cada medio de cultivo, siendo el componente
ms importante la fuente de carbono.

Se estudi el efecto del azcar empleado en el
medio de cultivo, que se consume rpidamente a
excepcin del que contiene lactosa como fuente
de carbono.
As mismo la cepa que creci con lactosa como
fuente de carbono present un menor halo de
inhibicin, que indica que la penicilina es
inestable en medio con lactosa.

La produccin mxima se obtuvo en medio con
maltosa y se observ tambin un mayor efecto
inhibitorio en esta cepa.
Para MRSA no se observ una buena actividad
de la penicilina, siendo que es una de las
bacterias ms sensibles a este antibitico

Con respecto al ensayo HPLC, la penicilina producida
de la muestra de suelo de GGH tuv una alta
absorbancia de 441.5 mAu en comparacin con la
de la penicilina producida a partir de la muestra
SGH, 85.52 mAu.
Por lo tanto, hay una un cambio considerable en la
cantidad de penicilina producida de las muestras.

En conclusin, a pesar de que el estudio no mostr
inhibicin contra MRSA, podra haber alguna
fuente natural o fuente de modificacin gentica
para la penicilina para actuar en MRSA.