PREPARACIN DE MUESTRAS

POR EXTRACCIN EN FASE

SLIDA

EXTRACCIN FASE SLOIDA (SPE)

Objetivo:
Limpiar la muestra
Determinar la concentracin de los
compuestos
Aplicaciones:
SPE es usado por el mtodo EPA 525,
para determinar compuestos orgnicos
en agua potable.

EXTRACCIN FASE SLOIDA (SPE).

Otras aplicaciones:

Farmacutica
Biotecnologa
Clnica
Industrial

EXTRACCIN LIQUIDO/LIQUIDO SPE

Reparto Lquido/Lquido
Inmiscibilidad con el solvente
Selectividad limitada
El nmero de manipulaciones afecta a la
recuperacin y la precisin.
Tcnica dependiente de la recuperacin y la
precisin.
Concentracin puede resultar tediosa, ya
que, consume mucho tiempo

EXTRACCIN FASE SLIDA

Recuperacin alta
Mayor selectividad
Rpida y econmica la operacin
Proceso de muestreo mltiple
En los ltimos 10 aos, SPE es un mtodo preferido para la
preparacin de muestras.

DESARROLLO DEL MTODO/ SPE

Consideraciones importantes para SPE:
Analito

Matriz

Fase

El analito: Grupo funcional, solubilidad, valores de Pka,

estabilidad y comportamiento cromatogrfico.

DESARROLLO DEL MTODO/ SPE

Caractersticas de la matriz:
Orgnica, acuosa y compuestos de
interferencia.
Nota: para matrices acuosas, es
necesario considerar el pH y la fuerza
inica.

DESARROLLO DEL MTODO/ SPE

Fase silica: Las caractersticas fsicas

pueden ser similares para todas las
fases de silica; la extraccin puede ser
determinada por la fase de uso.

INTERACCIN POLAR

Un ejemplo de estos mecanismos es el anlisis de aceites y

grasas en agua potable.

INTERACCIN NO POLAR
La opcin de una 2da fase permite la
separacin de compuestos hidrofilicos de
matrices no polares

INTERACCIONES POLARES

El ejemplo de este mecanismo es la separacin de drogas

teraputicas, cremas y pomadas.

FASES DE INTERCAMBIO IONICO

Por el control del estado inico de la matriz, analito, y la fase a utilizar,

puede lograrse la retencin selectiva de una gran variedad de
compuestos.

REQUERIMIENTOS ANALITICOS
Otra consideracin en el desarrollo
del mtodo es qu mecanismo de la
extraccin
ser
una
muestra
directamente compatible con la
tcnica analtica.
Mecanismos

Elucin de solvente

compatibilidad

No polar

Solvente no polar

CG, CG / MS

Intercambio inico

Buffer

HPLC

MECANISMOS DE SELECCIN

PROCEDIMIENTO DE EXTRACCIN
FASE SLIDA

Limpieza de la muestra, para remover contaminantes

PROCEDIMIENTO DE EXTRACCIN FASE SLIDA

Concentracin

CONDICIONAMIENTO
EL CONDICIONAMIENTO ES HECHO NORMALMENTE POR EXPOSICIN
DE SORBENTES A UN SOLVENTE PARA QUE LAS PROPIEDAES SEAN
COMPATIBLES
CON
LA
MATRIZ
Y
LA
FASE.
EL CONDICIONAMIENTO PERMITE QUE LA MUESTRA INTERACCIONE
RECPROCAMENTE CON EL SORBENTE.
Mecanismo

Sorbente

Condicionamiento

Elucin

No polar

C18,C8,C2,C1,
CH, CN

1.Metanol
2.Agua

Solventes no polar

Polar

NH2, 2OH,
SI, CN

Solventes no polar

Solventes polares

Intercambio catin

CBA, PRS,
SCX

1.Metanol
2. pH bajo (2-6)

1. pH alto (8-12)
2.Fuerza inica alta

Intercambio anin

NH2, PSA,
DEA, SAX

1.Metanol
2. pH alto (8-12)

1. pH alto (8-12)
2.Fuerza inica baja

ELUCIN DEL SORBENTE

Elucin: La eliminacin de la sustancia analizada del sorbente, es
llevada a cabo por un disolvente que tienen propiedades ms
atractivas para la sustancia analizada que para la fase adicionada.

Mecanismo

Sorbente

Condicionamiento

Elucin

No polar

C18,C8,C2,C1,
CH, CN

1.Metanol
2.Agua

Solventes no polar

Polar

NH2, 2OH,
SI, CN

Solventes no polar

Solventes polares

Intercambio catin

CBA, PRS,
SCX

1.Metanol
2. pH bajo (2-6)

1. pH alto (8-12)
2.Fuerza inica alta

Intercambio anin

NH2, PSA,
DEA, SAX

1.Metanol
2. pH alto (8-12)

1. pH alto (8-12)
2.Fuerza inica baja

TECNOLOGIA EMPORE SPE

Empore disco
Discos de alta seccin transversal.
Caudales altos , debido a una disminucin de presin,
que se produce en los cartuchos de SPE.
Slice modificado qumicamente, partculas inertes
incrustadas
en
PTFE.
Fase de slice estable, el pH 02
Proporcin de sorbente con el PTFE en peso.
90:10 de sorbente para PTFE por peso.
Compatible con todos los solventes orgnicos.
Partculas de 8 de silica o resina

07.

CARACTERISTICAS DE SORBENTE EN
CARTUCHO VS DISCOS
El caudal se limita con los cartuchos estrechos, por lo
tanto tiempos largos de arrastre para los volmenes
de muestra grandes.
Muestras relativamente sucias pueden tapar
rpidamente el rea representativa de un cartucho
tpico
Potencialmente, 40m partculas pueden causar el
lecho que tapa el canal de salida , pueden afectar la
separacin del analito del inters

CARACTERISTICAS DE SORBENTE EN
CARTUCHO VS DISCOS
Parmetro

SPE Disco

SPE Cartucho

Dimensin

0.5 x 38mm

10 x 9.5 mm

Tamao de
partcula
Densidad

8 m

40 m

575 mg/cg

500-650 mg/cg

Flujo

22 mL/min

8 mL/min

Velocidad linear

0.03 cm/seg

0.18 cm/seg

APARATO DE EXTRACCIN POR DISCO

Un mltiple de la extraccin de seis

estaciones, puede permitir fcilmente 12
extracciones del agua potable por hora.

UNA AMPLIA GAMA DE APLICACIONES

AMBIENTALES

Extraccin de los agentes

contaminadores del agua subterrnea.
Extraccin de pesticidas.
Extraccin de ptalato del agua potable.
Extraccin y concentracin de sub-ppb
de PCBs del agua.

PRINCIPIOS DE OPERACIN DE PURGA Y

TRAMPA

Secuencia de
eventos:
1.
2.
3.
4.

Purga
Trampa
Desorbcin
Interfase
directa

SPME
Microextraccin en fase slida SPME (por sus siglas en ingls)
Es una tcnica utilizada en qumica analtica para extraer
compuestos qumicos para su posterior identificacin.
Fue desarrollada a principios de los aos noventa por el equipo
del Dr. Pawliszyn en la Universidad de Waterloo.

Esta tcnica novedosa y relativamente econmica se puede

implementar tanto en el laboratorio como en el campo y no
requiere el uso de solventes.

SPME
La SPME puede ser entendida como un una columna capilar de
cromatografa de gases (CG) muy corta abierta al exterior.
La SPME es una fibra cubierta con una fase que sirve para la
extraccin, que puede estar constituida de un polmero liquido o un
sorbente slido. Esta capa puede extraer diferentes tipos de molculas,
voltiles o no voltiles, de diferentes tipos de medios en fase lquida o
gaseosa.
La cantidad de molculas extradas por la fibra es proporcional a su
concentracin en la muestra, siempre y cuando se alcance el equilibrio
termodinmico.
En caso de que la extraccin se realice en tiempos cortos la agitacin
manual de la muestra acelara el proceso de extraccin.

SPME

SPME

El segundo paso es la desorpcin de los compuestos

extrados en el paso previo para su posterior anlisis.
Luego de la extraccin, la fibra de SPME es transferida
al puerto de inyeccin del instrumento de separacin
(generalmente un aparato de cromatografa de gases),
donde la desorpcin de las molculas toma lugar.

SPME

SPME

SPME
La cromatografa de gases permite cuantificar los
compuestos separados y en algunos casos
identificarlos, pero si el anlisis lo requiere, la
espectrometra de masas (EM) es ms cualitativa.

Adems el umbral de deteccin pueden estar en el

orden de partes por trilln (ppt).

SPME

SPME

La SPME posee un gran potencial en aplicaciones

en el campo: el muestreo se puede llevar a cabo en
lugares remotos sin necesidad de que el personal
tenga un alto nivel de experiencia.
Cuando las muestras son almacenadas de manera
adecuada, estas pueden ser analizadas das
despus del muestreo sin perder cantidades
significativas de los compuestos en cuestin.

SPME

Las
tcnicas
cromatogrficas
combinadas con los sistemas de
deteccin habituales no son capaces de
detectar las concentraciones mximas
permitidas por la legislacin para
determinados compuestos en aguas.

SPME

En consecuencia, es necesario incluir un

paso previo de preconcentracin de las
muestras. En los ltimos aos la
extraccin en fase slida (SPE) ha sido
la tcnica ms utilizada.

SPME

Sin embargo, hace unos 10 aos se desarroll una

nueva tcnica de preconcentracin, la SPME, que
presentaba como mayor ventaja frente a la SPE que
no necesita del uso de disolventes orgnicos, es
muy sencilla de utilizar y se puede acoplar tanto a la
GC como a la HPLC.
En esta tcnica de preconcentracin, el sorbente
est dispuesto en forma de fibras.

SPME
Etapas a considerar:
1. Seleccin de la fibra
2. Seleccin del modo del muestreo
3. Seleccin del mtodo de la separacin y/o de deteccin
4. Determinacin del perfil de la extraccin
5. Seleccin del tiempo de la extraccin
6. Optimizacin de las condiciones de la matriz
7. Determinacin del tiempo de la desorcin
8. Determinacin de la precisin del mtodo
9. Seleccin del mtodo de la calibracin
10. Validacin del mtodo

SPME
1.Seleccin de la fibra
La opcin de la fibra depende de la
volatilidad y de la polaridad del analito
o de los analitos que son extrados.
La gama de los pesos moleculares
extrados por los tipos que diferencian
de fibra a la ayuda en la opcin de la
fibra.

SPME
Fibras comerciales
fibras fundidas largas de la silicona de los 2cm cubiertas con
varia fase polimrica.
Las fases polimricas comerciales disponibles son:

Polidimetilsiloxano (PDMS)
Polidimetilsiloxano /divinilbenzeno (PDMS/DVB)
Poliacrilato (PA)
Carbowax/divinilbenzeno (CW/DVB)
Polidimetilsiloxano /carboxen (PDMS/CAR)
Polidimetilsiloxano /divinilbenzeno/carboxen1006
(PDMS/DVB/CAR)
Carbowax/resina de Templated (CW/TPR)

SPME
2. Modo del muestreo
Caracterstica de la matriz del Analito, del modo del muestreo
Directo.
Medio voltil bajo

Gas medio de la polaridad (agua)

Lquido (preferiblemente simple)
Espacio libre a la volatilidad media
Punto bajo de la polaridad (complejo incluyendo)
Slido

SPME
3. Seleccin del mtodo de la separacin usada con
SPME.
La fibra de SPME se puede interconectar con:
Cromatografa de gas de (CROMATOGRAFA GAS)

Cromatografa lquida del (LC)

Cromatografa flida supercrtica del (SFC)
Electroforesis capilar

SPME

4. Determinacin del perfil del

tiempo de la extraccin
Optimizar la extraccin de voltiles de la
matriz a los mtodos de la agitacin del
espacio libre debe ser considerado.

SPME
5. Seleccin del tiempo de la extraccin
El objeto con SPME es generalmente alcanzar un
equilibrio de la distribucin dentro del sistema por lo
tanto all no sera cualquier variacin en la
transferencia total que causa la variacin en
resultados, pero para la fibra de CAR/PDMS el
sistema puede trabajar a menudo mejor en un
sistema del desequilibrio antes de todos los poros
que son llenados, porque cuando sucede ste puede
conducir a la dislocacin competitiva entre los
analytes.

SPME
6. Optimizacin de las condiciones de la matriz
La matriz se debe optimizar para mejorar sensibilidad del
mtodo, esto se puede hacer con modificaciones del pH o la
derivacin del analito.
La matriz puede tambin requerir el muestreo usando anlisis
del espacio libre. La seleccin de la temperatura puede tambin
reducir el tiempo del equilibrio particular con el aumento en
temperatura pero esto tiene que ser considerada con la prdida
en la sensibilidad de la fibra debido a la disminucin de la
distribucin constante.

SPME
7. Determinacin del tiempo de la desorcin
Los factores que determinan el tiempo de la desorcin son:
Flujo linear del gas portador (para la CROMATOGRAFA GAS)
Temperatura
Estos factores influenciarn en la adherencia en la fibra.

SPME
8. Determinacin de la precisin del mtodo
Los factores principales que efectan la precisin de
la fibra son:
1. Condicin de la fibra - deterioracin del la capa
Efectos de la matriz
Inyector de la CROMATOGRAFA GAS
2. Colocacin de la fibra
Tiempo de la desorcin
Prdidas del Analito
3. Adsorcin

SPME
8. Determinacin de la precisin del mtodo
4.Absorcin
5.impregnacin
6.desorcin de la fibra
7.Estabilidad del de la respuesta del detector
8.Volumen de muestra
9.Agitacin
10. Tiempo de la extraccin
11.Temperatura

SPME
9. Seleccin del mtodo de la calibracin
El uso de un valor conocido de K
No requiere anlisis de la adicin
- debe alcanzar equilibrio
Adicin estndar
puede ser utilizado con las matrices de la composicin diferente
Requiere anlisis de curva de calibracin
Dilusin isotpica
- la mayora de los resultados son confiables
- GC/MS
- costoso

SPME
10. Validacin del mtodo
Comparacin de los materiales y los
mtodos estndares de referencia
Estudios Inter-laboratorio

TCNICA DE PURGA
La purga es una tcnica de muestreo Headspace dinmico.
En teora casi el 100% de los voltiles es posible

TCNICA DE PURGA

Es un proceso dinmico porque

el gas inerte de purga (He) esta
continuamente
purgando
la
muestra.

Nunca se alcanza el equilibrio a

diferencia
del
Headspace
esttico.

TIPOS DE RECIPIENTES

INTERFASE DIRECTA SPI

MODULO DE CONTROL DE HMEDAD

(MCM)

MODULO DE CONTROL DE HMEDAD

(MCM)

Es calentado elctricamente, elimina

efectivamente el agua.

Enfriado

durante

el

paso

de

la

desorbcin.

El MCM es calentado a 90C durante el

paso de Bake