Recoleccin y Conservacin de

Muestras para Investigacin

Criminal y Paternidad Biolgica

Diagrama de la clase
1. Degradacin del ADN y factores que influyen
2. Contaminacin del ADN
3. Recoleccin de diferentes tipos de muestras
4. Caso de cadveres
5. Casos de violacin

Alta sensibilidad de la PCR

permite tipificacin
gentica a partir de
muestras muy escasas

Presencia incontrolable
de inhibidores de la PCR

la introduccin de otro
material celular puede
dar resultados confusos
e invalidar la prueba

EVIDENCIA

agentes fsicos,
qumicos y biolgicos

Extraccin y
purificacin
del ADN

contaminacin
degradacin

ADN purificado
contaminacin
y degradacin
remanente
INVALIDACION
DE LA PRUEBA

PCR

muestra sana
de origen humano
sin contaminacin
VALORACION
DE LA PRUEBA

2. Degradacin del ADN y factores que influyen

Degradacin del ADN

DENTRO DEL CUERPO

FUERA DEL CUERPO

Integridad del ADN

asegurada por
varios mecanismos

El ADN queda expuesto a

factores ambientales fsicos,
qumicos y biolgicos

DEGRADACIN

Degradacin del ADN

Fragmentacin del ADN en trozos ms pequeos

Agentes Fsicos
Luz UV
radiacin ionizante

Agentes Biolgicos
enzimas bacterianas
antibiticos fngicos

Agentes Qumicos
cidos y bases
fuertes

LUZ ULTRAVIOLETA
doble enlace covalente entre dos pirimidinas adyacentes

d;imero de
Timina
Timina

distorsin de
la hlice

Timina

irradiacin UV

bloqueo
de la PCR

RADIACIONES IONIZANTES
Efecto directo

Efecto indirecto

Ionizacin de la materia
que atraviesan

Radilisis del agua

generacin de
radicales libres

RUPTURAS DEL ADN

radical OH

ANTIBITICOS Y RADIACIONES IONIZANTES

Radiaciones ionizantes
Bleomicina, Calchemicina, Neocarcinostatina
el radical hidroxilo
reacciona con la
desoxiribosa

radical OH

OH

la desoxiribosa se
transforma en un
radical libre
en presencia de O2 se
transforma en un
radical an ms reactivo
se pierde la base
prica o pirimdica

ruptura de cadena

CIDOS

prdida de purinas (Adenina y Guanina)

distorsin local

Guanina

depurinacin
cido

degradacin
del ADN

BASES pH>9,5
ruptura puentes de H

sensibilidad a luz
blanca y al movimiento

DEGRADACIN TOTAL O PARCIAL

ruptura puentes de H

ENZIMAS BACTERIANAS
BACTERIA
bacterifago
(virus)

Bacteria infectada
enzimas de
restriccin

Bacteria sana
ejemplo: enzima
Eco RI, produciendo
una ruptura de ADN
de cadena doble

Eco RI
5'G/AATTC 3'
3' C TTAA/G 5'
/: lugar de corte

secuencia de
reconocimiento

3. Contaminacin del ADN

Contaminacin del ADN

Qumica

Biolgica
no humana

Biolgica
humana

Cada una de ellas provoca distintas interferencias en

la tipificacin de ADN y son de intensidad variable

Contaminacin Qumica
Producida por cualquier agente qumico que interfiera con
las enzimas usadas en la extraccin del ADN o en la PCR

Jabones

Detergentes

Colorantes
ej.: taninos

Porfirinas
de la
hemoglobina

Inhibidores de la PCR

componentes de:
1. fluidos corporales o reactivos de laboratorio:
a) hemoglobina, hematina, hemina
b) urea
c) heparina

Inhibidores de la PCR 2

componentes de:
2. de los alimentos
a) compuestos fenlicos
b) glucgeno
c) grasas
d) Ca+2).

Inhibidores de la PCR 3

componentes de:
3. del medio ambiente
a) polen
b) fenoles
c) cidos hmicos
d) metales pesados

Inhibidores de la PCR

componentes de:
4. del laboratorio
a) talco de los guantes
b) algunos plsticos desechables
c) celulosa y nitrocelulosa de los papeles de
filtro

Contaminacin Biolgica no Humana

Producida por materiales biolgicos y ADN de bacterias,
hongos, plantas y animales. Es de importancia cuando:

hongos y bacterias
crecen mucho en
fluidos aptos como
sangre y semen

las productos de
estos organismos
degradan el ADN

la mayor parte del

ADN extrado es de
estos organismos

La HUMEDAD y la TEMPERATURA
favorecen el crecimiento fngico y bacteriano

Contaminacin Biolgica Humana

Introduccin inadvertida de

sangre

pelos

saliva

piel

envo

anlisis

durante

recoleccin

manejo

Por favor, no contamine las muestras!!!!!!!!!!!!!!!!!

este Lpez Larraza
no tena otra cosa
que hacer que venir
a dar consejos?

No sea cosa que tengan que suplicar...

le juro Su Seora
que yo no contamin
las muestras

Cmo proceder en el lugar del hecho para minimizar

ls degradacin y la contaminacin del ADN

INVESTIGACIN CRIMINAL
Espacio adicional

LUGAR DEL HECHO

ESCENA
DEL
CRIMEN

Cinta perimetral

Cmo proceder en el lugar del hecho

Usar guardapolvo limpio, guantes desechables, barbijo y cofia
No fumar, ni beber, ni comer
Secar las muestras hmedas o lquidas al aire
Usar paquetes, sobres y bolsas de papel limpios y nuevos
Nunca usar bolsas plsticas
Empaquetar las muestras por separado
Refrigerar las muestras hasta su envo al laboratorio

SECADO DE LAS MUESTRAS

EN AMBIENTES VENTILADOS

A TEMPERATURA AMBIENTE
Nunca caliente las muestras
ni las exponga a luz solar directa

4. Recoleccin de diferentes tipos de muestras

EVIDENCIAS DE ORIGEN BIOLOGICO

sangre
lquida

sangre
seca

semen

pelos

saliva

piel

huesos

dientes

secreciones
nasales

cualquier
resto
celular

uas

orina

MUESTRAS DE SANGRE LIQUIDAS

OBJETOS
GRANDES

levantar con
gasa estril
y secar al aire

OBJETOS
PEQUEOS
tomar muestras
de otras zonas
con gasa hmeda
y secar al aire
(controles negativos)

colocar cada muestra

en bolsas de papel distintas

secar
al aire

cubrir la zona
con papel y cinta

MUESTRAS DE SANGRE SECAS

prendas

envolver
con papel

bolsas de
papel o cajas

objetos
slidos
pequeos

colocar en
cajas

objetos
slidos
grandes
transportables

objetos
slidos
pelos
grandes no
transportables

cubrir la mancha
con papel y sellar
los bordes con
tela autoadhesiva

diapositiva
siguiente

OBJETOS SLIDOS GRANDES NO TRANSPORTABLES

Tcnicas para el levantado de las muestras

corte de
la porcin
del objeto

cinta
autoadhesiva

raspado con
bistur

gasa
humedecida

En todos los casos se debe obtener una muestra de una zona

del objeto que no contenga manchas para usar como
control negativo en los ensayos de tipificacin

PELOS
Tome los pelos con una pinza. Colquelos en sobres de papel
Si estuvieren pegados a manchas de sangre o piezas
de metal o vidrio NO INTENTE DESPEGARLOS

Enve la pieza entera. Proceda como en los casos

descriptos para manchas de sangre lquida o seca

SALIVA

saliva

sobres

estampillas

colillas de
cigarrillos

Recolectar con
una gasa estril

Dejar secar
al aire

Poner en sobres de papel separados

SEMEN
Prendas de vestir
y prendas de cama

Levantar semen con

una gasa estril

Dejar secar
al aire

Poner en bolsas de papel o cajas separados

No use luz UV para identificar manchas de semen

No se demore ms de lo necesario!

che! hace
apenas
10 das
que
llegamos

apurate, que se
degrada la muestra!!!

Muestras de sangre obtenidas de individuos vivos

Extraer la sangre previo a a transfusiones

Poner en tubos con soluciones de

NO USAR
HEPARINA

cido
ctrico ms
dextrosa

1 mM
EDTA

Refrigerar y enviar al laboratorio en forma inmediata

5. Caso de cadveres

Recoleccin de muestras

Muestras de sangre o tejidos obtenidos en autopsias

Si no se puede obtener sangre

seccin de
hgado
msculo

Congelar

hueso
dientes

lavar con
alcohol

Extraer la sangre del corazn

Colocar en tubos con

cido
ctrico ms
dextrosa

1 mM
EDTA

Refrigerar

6. Casos de violacin

Examen mdico de una vctima de violacin

enzimas y pH
degradan el
semen en
forma rpida

La vctima debe ser revisada con la

mayor premura posible
sin haber tomado un bao y vistiendo las
mismas prendas que al momento del ataque

Debe desvestirse sobre una sbana blanca, sacudindose

las ropas para que caigan pelos pbicos y cabellos

Secar manchas de sangre y semen de

las ropas al aire y empaquetar
Extraer sangre (no usar heparina) y refrigerar

Toma de muestras en vctimas de violacin

hisopados
vaginales

hisopados
anales

hisopados
de saliva

lavado
vaginal

lavado
anal

lavado
bucal

restos de
piel debajo
de las uas

cabellos
y pelos
pbicos

Para los lavados usar ~10 ml de solucin fisiolgica estril

Manejo de los hisopados

Secar los hisopados con un ventilador,
al menos durante 1 hora
Efectuar el secado en forma INMEDIATA
La humedad favorece el crecimiento microbiano
No calentar las muestras
No exponerlas a luz solar directa
No analizarlas bajo luz UV

Colquelos en bolsas de papel por separado

Refrigerar y enviar al laboratorio en forma inmediata

Toma de muestras en imputados de violacin

Extraccin
de sangre

hisopado
de saliva

pelos
pbicos

cabellos

Secuestrar las prendas que usaba el acusado

en las condiciones descriptas para vctimas

CADENA DE LA CUSTODIA
Consiste en documentar la procedencia de
la muestra, el da, la hora, circunstancias y
nombre del perito
Debe dejarse constancia acerca de cada
persona que recibe la muestra, da, hora,
etc., y si procede a su manipulacin.