A DIRECT GENE TRANSFER STRATEGY

VIA
BRAIN
INTERNAL
CAPSULE
REVERSES THE BIOCHEMICAL DEFECT
IN TAYSACHS DISEASE
S. Martino, P. Marconi, B. Tancini, et al.
Departamento de Medicina Experimental y Ciencias Bioqumicas, Seccin de
Bioqumica y Biologa Molecular de la Universidad de Perugia, Perugia, Italia.
Human Molecular Genetics, 2005, Vol. 14, No. 15
Advance Access published on June 22, 2005

Introduccin a la genmica 2015-2

pp: 21132123

Qu es el tay-sachs?

Gangliosidosis GM2 causada por una deficiencia de hexosaminidasa

A debido a mutaciones en la subunidad de dicha enzima.
Acumulacin de compuestos parcialmente degradados en el SNC.

Qu es el tay-sachs?

Herencia autosmica recesiva,

gen HEXA defectuoso en el
cromosoma 15 .

Sntomas

Sordera
Disminucin en el contacto visual,
ceguera
Disminucin del tono muscular
Retraso en el desarrollo
habilidades mentales y sociales

de

Demencia

Aumento del reflejo de sobresalto

Irritabilidad

Apata o desgano

Prdida de las destrezas motrices

Parlisis

Crisis epilptica

Crecimiento lento

OBJETIVOS
1.

2.

3.

Encontrar una estructura anatmica cerebral

adecuada para distribuir la enzima faltante de
manera ptima.
Distribuir la enzima HexA faltante en SNC,
logrando as la reduccin de los depsitos de
ganglisido GM2 en ambos hemisferios
cerebrales.
Lograr un enfoque teraputico eficaz que
pueda actuar ms rpido que la progresin de
la enfermedad humana.

PROCEDIMIENTO
Construccin de un vector de herpes simple adecuado para la transferencia
y transduccin de cDNA que codifica para la subunidad de HexA

Estrategia de transferencia gnica in

vivo para la enfermedad TS
Se inyect el vector en la cpsula interna del hemisferio
cerebral izquierdo. Se diseo un plan experimental
compuesto por cinco grupos de ratones TS de 5 meses de
edad.
Grupo 1: TS HSV Hex, 2.5x10^6 p.f.u totales
Grupo 2: TS HSV Hex, 5x10^6 p.f.u totales
Grupo 3: TS HSV-T0Z, 5x10^6 p.f.u totales
Grupo 4: los ratones no tratados TS
Grupo 5: ratones control (WL)

RESULTADOS

Discusin de resultados

El sitio de inyeccin del vector viral (que codifica cDNA para HexA)
en la cpsula interna cerebral de los ratones con TS in vivo fue
adecuado ya que contiene numerosos fibras que hacen que sea posible
llegar a varias reas del SNC con una sola administracin del vector y
adems:

I.
II.
III.

La capacidad intrnseca para ser transportados de una manera

retrgrada a los cuerpos celulares neuronales.
La capacidad para infectar una amplia variedad de tipos de clulas
en la fase no replicativa, especialmente las neuronas.
La capacidad para permitir una expresin sostenida del transgn,
debido a que est bajo el control del promotor ICP0, que es
necesario para la activacin por factores de transcripcin en las
neuronas que han sufrido daos.

Disminucin en el almacenamiento del ganglisido

GM2 consistente con la administracin del la
dosis del vector viral. Un mes despus de la
inyeccin,
se
observ
la
ausencia
del
almacenamiento del ganglisido GM2 en ratones
TS inyectados con la dosis ms alta de HSVT0Hex.
La dosis ms baja no es capaz de transfectar
suficientes clulas, lo que sugiere que se
necesita ms tiempo para eliminar el material de
almacenamiento completo.

La actividad HexA fue restaurada en todas las

reas del cerebro del ratn TS tratado. Parte de la
enzima secretada a partir de clulas transducidas
contribuye a la difusin de la enzima recombinante
en las diferentes reas del cerebro.

No se observaron efectos adversos debido al vector

viral, sitio de la inyeccin o la expresin gnica y
con base en los resultados obtenidos, el mismo
enfoque podra aplicarse a otras enfermedades
similares que implica un defecto enzimtico.

Conclusiones

Con esta estrategia de transferencia de genes, por

primera vez, se restableci la actividad de HexA,
eliminado
totalmente
el
almacenamiento
del
ganglisido GM2 en ambos hemisferios, en el cerebelo
y la mdula espinal de modelo animal TS en un lapso de
tratamiento de un mes.
No se observaron efectos adversos debido al vector
viral, sitio de la inyeccin o la expresin gnica y con
base en los resultados obtenidos, el mismo enfoque
podra aplicarse a otras enfermedades similares que
implica un defecto enzimtico.

REFERENCIAS

S. Martino, P. Marconi, B. Tancini, D. Dolcetta, M.G. Cusella De Angelis.

(Junio 22, 2005). A direct gene transfer strategy via brain internal
capsule reverses the biochemical defect in TaySachs disease . Human
Molecular Genetics, Vol. 14, No. 15 , 21132123.
E Berto, A Bozac and P Marconi. (2005). Development and application of
replicationincompetent HSV-1-based vectors. Gene Therapy, 12, S98
S102.
M Begoa Cachn-Gonzlez, Susan Z Wang, Rosamund McNair. (27 March
2012). Gene Transfer Corrects Acute GM2 GangliosidosisPotential
Therapeutic Contribution of Perivascular Enzyme Flow. Molecular
Therapy , Vol. 20 No. 8, 14891500 .
DM Krisky, PC Marconi, TJ Oligino. (1998). Development of herpes
simplex virus replicationdefective multigene vectors for combination
gene therapy applications. Gene Therapy , 5, 15171530.