PRODUCCIN

HETERLOGA DE
PROTENAS
TERAPUTICAS
Pablo Gmez Martnez Grupo 1.10

Introduccin.

Standley Cohen (izq.) y Herbert Boyer (der.) impulsores de la

tecnologia del ADN recombinante en 1973.

Introduccin.

http://www.dnalc.org/view/15916-DNA-transformation.html

Conceptos Bsicos.

Expresin biolgica en sistemas heterlogos

1. Aislar el RNAm que codifica para una proteina concreta.
2. Obtener su correspondiente cDNA, previamente amplificado por
PCR.
3. Insertar en un vector gnico (plsmidos, virus,).
4. Replicar el vector en una clula husped.

Produccin de Protenas
Teraputicas Recombinantes.
Estandarizacin de
condiciones de cultivo (T,
pH, etc.

Obtencin de extracto con

PR (forma soluble y
funcional)

Purificacin

Produccin de Protenas Teraputicas Recombinantes.

Fbricas Biolgicas para la Produccin de

Protenas Recombinantes
Bacterias: fciles de aislar,

no realizan splicing y tampoco glicosilan ni realizan todas las

modificaciones postraduccionales necesarias para la funcin de
la protena. Vectores:
virus, plsmidos.

Levaduras: realiza glicosilacin, pero de forma distinta a

como la realizamos los humanos. Debido a ello estas protenas

pueden ocasionar problemas de inmunorespuesta. En este caso,
los vectores apropiados para estos organismos son los
plsmidos.

Insectos: clulas inoculadas con baculovirus, o bien insectos

completos. La glicosilacin sigue siendo un problema.
A veces, lo que se hace es buscar mutantes que sean capaces de
glicosilar.

Clulas de mamferos (CHO, HEK293,..): si la

protena se excreta, se purifica el lquido. Y si es intracelular,

rompemos las clulas y purificamos. Suelen ser cultivos lentos.
Los vectores de expresin habituales son Virus (SV40).

Produccin de Protenas Teraputicas Recombinantes.

Produccin en animales completos

(animales como bio-reactores)

Se les introduce DNA de ciertos genes

humanos, capacitndolos as para
producir ciertas protenas humanas para
tratar enfermedades.

Pez Tilapia: insulina humana

Vaca: insulina en leche

Cerdo: hemoglobina

Produccin de Protenas Teraputicas Recombinantes.

Produccin en animales completos

(animales como bio-reactores)

En febrero de 2009 la FDA (Food

and Drug Administration)
aprob la produccin de la
protena recombinante humana
alfa-antitrombina, protena
anticoagulante.

Las cabras poseen cinco copias de ADN construido que produce

directamente antitrombina humana, localizado en el sitio GTC 155-92,
insertados en los embriones de cabra usando la tcnica de
microinyeccin, bajo el control de un promotor de la beta casena.

Produccin de Protenas Teraputicas Recombinantes.

Sistemas Basados en Tejidos Vegetales

La produccin de PR en semillas es la plataforma ms utilizada. Este sistema ofrece varias
ventajas, tales como: mnimo coste de produccin, no propaga virus y patgenos de
mamferos, confiere un almacenamiento estable.
El principal obstculo para la produccin de PR en tejidos vegetales ha sido su bajo nivel de
acumulacin (una alternativa es la produccin de PR en clulas de plantas en bio-reactores).
El producto es susceptible de producirse envasado de forma natural (en los frutos o las hojas).

Las protenas recombinantes a partir de plantas es an un camino en vas de explotacin.

Produccin de Protenas Teraputicas Recombinantes.

Ejemplos de Protenas Recombinantes

Insulina: Diabetes mellitus.
Somatostatina: Hormona del crecimiento
humano.
Eritropoyetina: Pacientes anmicos con
insuficiencia renal crnica.
Somatotropina: Enanismo congnito (algunos
casos de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob). La
bovina se usa para incrementar la produccin de
leche en vacas.

La Insulina.
La insulina Normal que es
biolgicamente activa es
monomrica o existe como nica
molcula. Tiene dos
encadenamientos largos del
aminocido o encadenamientos del
polipptido. Los encadenamientos
son A de cadena con 21
aminocidos y el encadenamiento
B con 30 aminocidos.
Dos puentes de disulfuro conectan
los encadenamientos, y encadenan
A contienen un puente de
disulfuro interno (residuos A6 a
A11).
Estas juntas son similares en
todos los formularios mamferos
de la insulina.
Trabajos de Fred Sanger.

La Insulina.

Existen dos rutas distintas para la produccin de Insulina:

1. Producir por separado ambas cadenas para posteriormente
asociarlas qumicamente.
2. Producir proinsulina que ser procesada hasta insulina madura
mediante mtodos enzimticos.

Obtencin de insulina por primera vez en bacterias (1982)

http://www.dnalc.org/view/15926-Synthetic-insulin.html

La Insulina.

1. Producir por separado ambas cadenas para posteriormente

asociarlas qumicamente.

La Insulina.

2. Producir proinsulina que ser procesada hasta insulina madura

mediante mtodos enzimticos.

Aplicaciones de las Protenas

Recombinantes.
Campo de aplicacin

Industria farmacutica

Aplicaciones ambientales

Industria papelera

Industria textil
Industrias de los
alimentos
Industria energtica

Usos

Beneficios

Disminuye costos y tiempo de

produccin,
frmacos
ms
Produccin
de
compuestos
especficos,
disminuye
activos, intermediarios terapias.
reacciones
inmunolgicas
e
infecciones
Deteccin de
mediante
monoclonales

contaminantes Ms baratos y rpidos que las

anticuerpos pruebas
convencionales.
Se
pueden aplicar en campo

Mejora
el
proceso
de Disminuye la toxicidad de los
manufactura mediante el uso de residuos del procesamiento de
enzimas
la pulpa
Aplicaciones en la fabricacin
secado
y
terminacin
de
productos, adicin de enzimas
en detergentes
Procesos
de
produccin,
generacin
de
aditivos
y
conservadores
Uso de enzimas en procesos de
produccin de biocombustibles

Disminuye
la
toxicidad
de
residuos
de
produccin,
detergentes ms efectivos
Mejora de procesos, calidad de
productos, tcnicas de anlisis
Generacin de biocombustibles
ms limpios y a partir de
desechos
industriales
o
agrcolas

La expresin recombinante de DNA proporciona un

sistema de produccin ilimitada de protenas cuya
presencia en la naturaleza sea escasa o su
aislamiento implique dificultades. Es
responsabilidad nuestra el uso que hagamos de ello.

Referencias.
Gamboa RA, Trujillo RMA. 2009. Un acercamiento a la produccin de protenas
recombinantes teraputicas de uso humano. El Residente 4 (3), 87-91.
Guevara-Hernndez E, Lpez-Zavala AA, Jimnez-Gutirrez LR,y Sotelo-Mundo RR.
2013. Perspectivas actuales del uso de protenas recombinantes y su importancia
en la investigacin cientfica e industrial. Biotecnia 15 (3), 8-17.
Lara AR. 2009. Produccin de protenas recombinantes en Escherichia coli. Revista
Mexicana de Ingeniera Qumica 10 (2), 209-223.
Poutou Piales RA, Martnez EA, Candelario Frontela M. 1994. Banco de Clulas
Primario (BCP): Caracterizacin y papel en la produccin de protenas
recombinantes. Biotecnologa Aplicada 11 (1), 55-62.
ProteoGenix. 2014. Produccin de protena en E. coli (Escherichia Coli) y purificacin.
Palomares, L. A., Estrada-Mondaca, S. y Ramrez, O. T. 2004. Production of
recombinant proteins: challenges and solutions. Methods in Molecular
Biology. 267:15-52.
Klin Bellinghan, Jim. (April 2009) Nature Biotechnology volume 27, number 4.
302-304.
http://www.proteogenix-antibody.com/es/produccion-proteina/produccion-ecoli
http://biogenmol.blogspot.com.es
http://www.dnalc.org/view/15916-DNA-transformation.html
http://www.dnalc.org/view/15926-Synthetic-insulin.html
http://www.emea.europa.eu/humandocs/PDFs/EPAR/atryn/058706es1.pdf