Laboratorio

Enzimas
Somsimith Deechaleune
BIOL3051

Objetivos
Definir qu es una enzima y cmo sta

acta en las reacciones dentro de la

clula.

Identificar los diferentes factores que

pueden afectar la actividad enzimtica.

Diferenciar

entre
inhibicin
competitiva y no-competitiva.

Introduccin
Las enzimas son en su mayora protenas o

RNA (riboenzimas).

Son catalizadores qumicos que agilizan una

reaccin qumica que involucra la formacin o

rompimiento de enlaces qumicos.

No

se consumen
reacciones.

ni

se

alteran

en

las

Al finalizar la reaccin la enzima se libera y

queda disponible para otra reaccin.

Introduccin
Actan sobre un sustrato formando un

complejo enzima-sustrato al unirse en

un lugar especfico del sustrato: sitio
activo de la enzima.
Las

enzimas son selectivas, pocas

molculas pueden interactuar con el sitio
activo y formar el complejo (figura 1).

Fig. 1: Reaccin con participacin de

una enzima.

Sustratos

Sitio activo

Complejo Enzima-Sustrato

Producto

Enzima

Fig. 2: Energa de activacin necesaria

para iniciar la reaccin.
Sinenzima
Conenzima

Energade
activacin

Cursodelareaccin

Cuando se forma esta interaccin baja la energa de

activacin necesaria para poder llevar a cabo la reaccin.

Enzimas en una reaccin

Funcionan

mejor
bajo
condiciones
especficas
(ptimas) que incluyen:

Temperatura
pH

Los cambios pueden alterar

el desempeo de la enzima,
desactivarla o destruirla.
Algunas enzimas necesitan

activadores
para
poder
formar el complejo enzimasustrato.

Cofactores e Inhibidores
Activadores que cambian la conformacin de
la enzima para formar el complejo enzimasustrato reciben el nombre de cofactores:

pueden ser
orgnico).
de
origen
coenzimas.

iones

metlicos

orgnico

se

(nada
llaman

Cofactores e Inhibidores
Los inhibidores impiden la actividad de la
enzima, como el pH y la T. Pueden afectar el
sitio activo de de dos maneras:

Competitiva: Bloquea el sitio activo (Fig.

3).

No competitiva: Altera indirectamente

la forma del sitio activo, al pegarse en
otro lugar de la enzima (Fig. 4).

Fig. 3: Inhibicin competitiva

Fig. 4: Inhibicin no competitiva

Ejemplos de enzimas: Catalasa

Se encuentra en casi todas las clulas

aerbicas.

Acta rompiendo el perxido de hidrgeno en

agua y oxgeno que se produce en las clulas:

catalasa

2H2O2

2H2O+O2

Observaremos su funcionamiento en varios

organismos.

Ejercicio 1: Funcionamiento de la catalasa

en varios organismos.
Materiales

Perxido de hidrgeno
Papa
Hgado
Setas
Espinaca
Gasa (cheesecloth)
Placas de porcelana
Goteros
Morteros o licuadora

Procedimiento
En este ejercicio se prepararn varios homogenados para

obtener partculas pequeas y uniformes al mezclarlas con el

agua.
Para preparar los homogenados, corte en pedazos por separado
las muestras de papa, hgado, setas y espinaca.
Usando una licuadora o mortero, muela el material con un poco
de agua hasta diluir parte de la muestra; no muela
excesivamente para que queden pedazos pequeos del
material.
De ser necesario, filtre el macerado con una gasa (cheesecloth).
Coloque cada homogenado en un tubo de ensayo.
Usando un gotero, coloque cinco gotas de cada homogenado en

las fosas de la placa de porcelana y aada tres gotas de

perxido de hidrgeno.

Resultados
Resultados homogenado con perxido de
hidrgeno
Homogenado

Reaccin al aadir gotas de

perxido.

Agua
Papas
Setas
Hgado
Espinaca

Preguntas
1. Qu ocurri al aadir el perxido?

2. Ocurri lo mismo para todas las

muestras?
3. Por qu se forman las burbujas?
4. Qu otros organismos podran
usarse para esta prueba?

Ejercicio 2: Se comportan todos los

organismos de la misma manera?
Materiales
Homogenado de hgado, papa, setas y
espinaca
Tubos de ensayo
Perxido de hidrgeno
Goteros

Procedimiento
Rotule cinco tubos de ensayo con las letras A a la E.
Ponga 3 mL de cada homogenado en los tubos como sigue:

A - Hgado
B - Papa
C - Setas
D - Espinaca
E - Agua
Marque el nivel hasta donde llega cada homogenado.

Ponga 3 mL de perxido de hidrgeno en cada tubo de ensayo.

Observe la reaccin que sucede en cada tubo y marque el

cambio en el nivel del lquido.

Resultados
Resultados produccin de catalasa en varios
organismos
Tubo

Cantidad de
burbujas

Cantidad de
homogenado
consumido

A
B
C
D
E

Preguntas
1. Qu organismo produjo ms
gas?
2. Qu gas se est produciendo?
3. Qu sugieren los resultados
sobre la fisiologa de estos
organismos?

Ejercicio 3: Efecto de la temperatura

sobre el funcionamiento de las enzimas.
Materiales
Homogenado de hgado
Bao de agua
Agarradera de tubo

Ejercicio 3: Efecto de la temperatura

sobre el funcionamiento de las enzimas.
Influye en la actividad. El punto ptimo

representa el mximo de actividad.

A temperaturas bajas, las enzimas se hallan

"muy rgidas, la actividad se detiene y

cuando se supera un valor considerable la
actividad cae bruscamente porque, como
protena, la enzima se desnaturaliza.

Procedimiento
Rotule cinco tubos de ensayo del 1 al 5 y caliente un bao de agua

hasta 37 C y otro hasta 80C.

Aada 5 mL de hgado homogenado a cada tubo.
Mantenga los tubos a las siguientes temperaturas:

Tubo 1 = 80 C por 5 minutos

Tubo 2 = 37 C por 5 minutos
Tubo 3 = Temperatura ambiental
Tubo 4 = Hielo por 30 minutos
Tubo 5 = Congelador a 4 C por 30 minutos

Aada 2 mL de perxido de hidrgeno al tubo 1.

Mida el tiempo transcurrido desde que se aadi el perxido hasta que

se comienzan a producir burbujas, y antelo en la Tabla..

Repita con los dems tubos.
Compare sus resultados en trmino de tiempo de reaccin vs.
temperatura.

Resultados
Resultados del efecto de la temperatura
Tubo

Temperatura

80C

37C

Ambiente

Hielo

Congelador

Tiempo que
tard en
comenzar
reaccin

Observaciones

Preguntas
1. Cul es la relacin entre la
temperatura y la actividad
enzimtica?
2. Qu le sucede a las enzimas cuando
se exponen a temperaturas extremas
(muy fras o muy calientes)?

Ejercicio 4: El efecto del pH sobre el

funcionamiento de las enzimas
Todas las enzimas presentan un pH ptimo de
actividad. El pH puede afectar de varias maneras:
El centro activo puede contener aminocidos
con grupos ionizados que pueden variar con el pH.

El sustrato puede verse afectado por las

variaciones del pH.

Algunas
enzimas
presentan
variaciones
peculiares. La pepsina del estmago, presenta un
ptimo a pH=2, y la fosfatasa alcalina del

intestino un pH= 12

Efecto del pH sobre el funcionamiento

de la enzima
Procedimiento

Rotule tres tubos de ensayo A, B y C

Aada 1 mL de homogenado de hgado a cada tubo.
Aada 3M HCl y 3M NaOH a los tubos como sigue,
y agite suavemente hasta mezclar:
Tubo A tres ml de 3M HCl
Tubo B tres ml de 3M NaOH
Tubo C tres ml de agua (control sin cido ni base).
Aada 3 mL de perxido de hidrgeno a cada tubo.
Observe y anote las reacciones en la siguiente tabla.

Resultados
Resultados del efecto del pH sobre la actividad
enzimtica.
Tubo

Tiempo que toma

Descripcin
la reaccin en
comparativa de las
completarse
reacciones.

A
B
C

Preguntas
1. Cul es la relacin entre el pH y la
actividad enzimtica?
2. Las enzimas del estmago funcionan
mejor con un pH de 2. Cmo
afectara un pH de 4 en el estmago
a la digestin?