METODOS DE DETERMINACION

PARA VITAMINA C
INTEGRANTES:
Guzmn Flores, Eduardo
Mendoza Polo, Rosita
Ramrez Benavides, Lucero
Sabino ,Casahuamn ,Miriam
Tandaypan Marios ,Melissa

DETERMINACIN DE LA
VITAMINA C POR
ESPECTROFOTOMETRA

ESPECTROFOTOMETRA
Se basa en la reduccin del colorante 2-6 diclorofenolindofenol, por el
efecto del cido ascrbico en solucin.
El contenido de cido ascrbico es directamente proporcional a la
capacidad de un extracto de muestra para reducir una solucin estndar
de colorante determinada espectrofotomtricamente.
La espectrofotometra es el conjunto de procedimientos que utilizan la luz para medir
concentraciones qumicas

Las mediciones espectrofotomtricas son realizadas por medio de

espectrofotmetros, que tiene una serie de componentes para identificar
la absorbancia de la muestra a analizar.

La absorbancia es importante porque es directamente proporcional a la

concentracin de la especie que absorbe la luz de la muestra

Vitamina C.

El contenido de vitamina C en las frutas y verduras vara dependiendo

del grano de madurez, menor cuando estn verdes aumenta cuando est
en su punto de cosecha y luego vuelve a disminuir; por lo que la fruta
madura pierde parte de su contenido en vitamina C lo ms
recomendable es comer las frutas y verduras frescas pues la accin de
calor destruye a la vitamina C. tambin hay q mencionar que la
vitamina C en contacto en contacto con el aire se oxida y pierde su
actividad. La otra forma de destruccin de la vitamina C es al tener
contacto con el alcohol etlico, por ejemplo con la cerveza.

Materiales y Mtodo
Materiales:
a)

Materia prima : naranja (zumo)

b)

Materiales

Probeta

Cuchillo

Vaso precipitado de 100ml. y otro de

250ml.

Embudo

Matraz 150ml.

Papel filtro.

Fiolas

pipetas

c) Reactivos:

cido oxlico0.4 %
cido ascrbico al 0.1%
2-6 diclorofenolindofenol (solucin coloreada)

d) Equipos:

Espectrofotmetro UV- visible

Centrifuga

MTODOS

Preparacin de la curva
estndar de vitamina C

Preparar los estndares de

trabajo: tomar alcuotas de
0.1, 0.3, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5,
3, 3.5 y 4 ml de cido
ascrbico al 0.1% y llevar a
volmenes de 50 ml con una
solucin de cido oxlico al
0.4 %. Estas soluciones
enumeradas contendrn 5 mg
de cido ascrbico por 100
ml respectivamente.

Luego de seleccionar los 20 tubos de ensayo se procedi preparar la

solucin para leer la vitamina C.

Del mismo modo se realiz para los 20 tubos de ensayo con

sus respectivas concentraciones donde luego fueron ledos
en el espectrofotmetro

b) Paralelamente, preparamos 4 tubos prueba enumerados del I al IV y agregamos los

siguientes:
I. 10 ml de agua destilada

II. 1 ml de acido oxlico al 0.4 % + 9 ml de solucin coloreada.

III. 1 ml de E.T N 1 + 9 ml de agua destilada

IV. 1 ml de E.T N 1 + 9 ml de solucin coloreada.

RESULTADOS

REALIZACIN DE LA CURVA DE
CALIBRACIN

a) Preparacin de la Curva Estndar

CUADRO N 1:LECTURA DE ABSORBANCIA A UNA DE 520 nm

b)Determinacin de la curva estndar de la vitamina C por

el

mtodo colormetro de la 2,6 diclorofenollindofenol

Se llev acaba el Mtodo de Espectrofotmetro

GRUPO N 1:

Para una mejor linealidad se obviaron los

datos de la cada de la curva quedando:

Observamos que existe an una no linealidad en las primeras concentraciones por tanto
Obviamos esos datos para obtener un mejor rango de linealidad quedando:

GRUPO N 2:

Cuadro con los datos obviados de la cada de la curva.

Observamos que an existe una no linealidad en las primeras

concentraciones, por lo tanto obviamos esos datos para obtener una
mejor linealidad

DISCUSIONES:
La

curva obtenida por el grupo 2, se debi a distintos factores, tales

como, una mala manipulacin al momento de realizar las diluciones
ya que no se tuvo el cuidado de no mezclar las concentraciones al
usar una misma pipeta para todas sin un previo lavado al pasar de
una concentracin a otra provocando de alguna u otra manera una
alteracin.

Otro

de los factores fue al momento de la adicin del colorante ya

que debe ser inmediato (max. despus de 15 seg.) ya que el 2,6
dicloroindofenol es rpidamente oxidado en la presencia del cido
ascrbico.

Otro

error cometido seria, al no mantener al blanco (tubo de ensayo

con agua destilada) constante, se cambi para cada concentracin
lo que pudo causar cierta variacin.

CONCLUSIN

El estudio de la linealidad fotomtrica permite establecer el rango de

absorbancia en el que
el instrumento tiene respuesta proporcional a los cambios de
concentracin. Para ello se determina

la respuesta del espectrofotmetro a diferentes concentraciones de una

sustancia que cumpla con la ley de Lambert-Beer.

DETERMINACIN DE VITAMINA C
POR YODOMETRIA

CONSIDERACIONES GENERALES

El cido ascrbico o vitamina C, es una vitamina hidrosoluble y

solamente se encuentra en concentraciones significativas en
frutas y vegetales.

Es particularmente sensible a las reacciones de oxidacin ,

destruyndose con gran facilidad durante el procesado de los
alimentos en presencia de oxigeno. La oxidacin es
dependiente del PH, ya que la forma ionizada es mas sensible
que la forma no ionizada.

Es esencial para mantener la integridad del organismo, en

especial para la reparacin de los tejidos, absorcin de hierro y
la formacin de colgeno.

FUNDAMENTO:

La yodometria es un mtodo de valoracin indirecto.

La yodometria constituye una parte de los mtodos de oxidacion.-reduccin, que se

refiere a las valoraciones de sustancias reductoras mediante soluciones de yodo.

La vitamina c es un agente reductor suave que reacciona rpidamente con el ion

triyoduro.

En este caso el yodo actua como oxidante, entonces la titulacin se efectua

aadiendo al reductor tanta solucin valorada de yodo como sea necesario para
obtener una reaccin cuantitativa cuyo final puede percibirse.

Para determinar cundo se ha llegado al final de la titulacin, en la disolucin

problema se agrega un indicador que sufre un cambio fsico apreciable, como por
ejemplo cambio de color, en el punto final de la reaccin. En este caso se utiliza el
almidon.

Los seres humanos son incapaces de sintetizar cido ascrbico y dada

la importancia de este en muchas reacciones celulares es menester la
ingesta adecuada.

A nivel industrial, sus usos han sido variados llegndose a emplear como
enriquecedor de alimentos o como preservante (antioxidante).

PROCEDIMIENTO PARA LA CUANTIFICACION DE

VITAMINA C EN ZUMO DE FRUTAS

Extraer el jugo de la muestra a analizar y filtrarlo.

Medir 40ml de jugo filtrado y depositarlo en un matraz Erlenmeyer de

250 ml.

Adicionar 3 ml de almidn al 1%( la muestra mantiene su color inicial)

Disolver 1 g de almidn soluble en 100 ml de agua hirviendo.

Homogeneizar la suspensin. Una vez fra, filtrarla utilizando
algodn.

Titular con una solucin de I2, 0.01N.

La titulacin termina cuando la muestra toma una coloracin azul.

Anotar el gasto de la titulacin y hacer los clculos respectivos.

Ventajas

El mtodo de titulacin
yodometrica es uno de los mas
eficaces para la determinacin
de acido ascrbico en zumo de
frutas y verduras.

Es rpido y simple de
determinar.

RECOMENDACIONES

Hay que tener en cuenta que la vitamina C es oxidada

fcilmente por el aire, por tanto, las disoluciones que
contienen vitamina C deben ser preparadas
inmediatamente antes de ser tituladas, con el fin de
obtener resultados fiables.

El almidn se hidroliza con facilidad y uno de los

productos de la hidrlisis es la glucosa, la cual tiene
carcter reductor, por tanto, una disolucin de almidn
parcialmente hidrolizada puede ser una fuente de error en
una titulacin redox.

COMPARACIN DE LOS
MTODOS UPLC Y HPLC PARA
LA DETERMINACIN DE LA
VITAMINA C

OBJETIVO

Fue determinar la estabilidad de AA en cido metafosfrico utilizado para la muestra preparacin.

El prximo objetivo de este estudio fue validar y

comparar UPLC y mtodos de HPLC para la
determinacin de AA y TAA. El validado Mtodos de
HPLC y UPLC se aplicaron a diferentes jugos de
frutas y los suplementos vitamnicos. Por otra
parte, la concentracin de AA y TAA se determin
en diferentes zumos de fruta almacenada por 24 y
48 h despus de la apertura para comprobar la
necesidad de la determinacin de ambos AA y DHAA
para evaluar la concentracin de vitamina C en este
tipo de producto.

Ultra rendimiento cromatografa lquida (UPLC) se ha

convertido en una tcnica ampliamente utilizada, que
tiene ventajas completas de principios cromatogrficos
para levar a cabo la separacin, utilizando columnas
cortas lleno de pequeos partculas (lm sub-2). Esto ha
llevado a un tiempo de anlisis ms corta, mejora de la
eficiencia pico (anchura de pico), mejor resolucin y
disminucin del uso de disolventes en comparacin con el
alto rendimiento convencional cromatografa lquida
(HPLC)

Materiales

Botellas de bebidas de frutas comerciales (jugos y

Bebidas)

Preparaciones de vitamina farmacutica C.

Botellas de zumos DE FRUTA (tres para cada tipo de jugo

procedentes de dos diferentes lotes (n = 6) se
almacenaron despus de la apertura de 24 y 48 h en el
fro (T4-6 C) para evaluar el efecto del tiempo de la
concentracin de DHAA (cido dehidroascrbico).

cido fosfrico y Meta- AA (mnimo 99,7 %)

DL- ditiotreitol (DTT; mnimo 099 %)

Agua destilada se filtr a travs de un filtro de 0,45 ml

para HPLC.

Metanol fue de grado HPLC. Todos los dems productos

qumicos eran de grado reactivo.

Preparacin de la muestra

Muestra de bebidas (0,5 ml) y 10% de cido

meta-fosfrico (0,5 ml),se mezclaron
mediante
un
vrtice
(5
min)
(concentracin final de metafosfrico
cido era 5%), se centrifugaron a 8500G
durante 10 min, y se inyect en la HPLC o
columna UPLC para determinar el
contenido de AA

Antes de la inyeccin en Columna UPLC, se

diluyeron las muestras de los jugos de
frutas
o
bebidas
1:50

01:10,
respectivamente, usando cido metafosfrico al 10%.

El mtodo de extraccin de la
vitamina C

Muestra de bebidas (0,5 ml) y 10% de cido meta-fosfrico (0,5 ml) se mezclaron
mediante un vrtice (5 min) (concentracin final del cido metafosfrico era
5%), se centrifugaron a 8500G durante 10 min, y se inyect en la HPLC o columna
UPLC para determinar el contenido de AA

Antes de la inyeccin en Columna UPLC, se diluyeron las muestras de los jugos de

frutas o bebidas 1:50 01:10, respectivamente, usando cido meta-fosfrico al
10%.

Se determin; (TAA contenido de vitamina C) La suma de AA y DHAA despus de

la reduccin de DHAA a AA utilizando la TDT. La muestra de jugo (0,2 ml) y 5%
DTT (0,2 ml) se mezclaron y se diluy hasta 2 ml con 10% de cido meta-fosfrico
y se inyect en HPLC o columna UPLC para determinar la vitamina C.

Tabletas de vitamina C se disolvieron en 25 ml de

10% de cido meta-fosfrico y tratados como
muestras de bebidas de frutas. Antes de la
inyeccin en HPLC o columna UPLC, se diluyeron
las muestras de tabletas 1:50 o 1:50 minutos,
respectivamente, usando cido meta-fosfrico al
10%.

Tres extracciones independientes se llevaron a

cabo para todas las muestras. El nico diferencia
entre la preparacin de muestras para HPLC y
UPLC fue el magnitud de dilucin de la muestra
antes de la inyeccin.

Determinacin UPLC (Ultra rendimiento

cromatografa lquida) de vitamina C

Se realiz utilizando Acquity de ultra cromatografa lquida de alto

rendimiento equipado con ACQUITY UPLC BEH C18 equipado con
columna de seguridad. Un gradiente de la fase mvil compuesta de
metanol (disolvente A) y 5 mmol / L de KH2PO4, pH 2.65 (disolvente
B) se utiliz de acuerdo con el siguiente programa: lineal incrementar
comenzando con 5-15% A en 1 min, del 15% al 35% para el prximo 1
min y el retorno a las condiciones iniciales dentro de la prximo 4 min
con la velocidad de flujo de 0,2 mL / min. El diluido se ha detectado
usando un fotodiodo conjunto detector de red de Aguas Acquity a
245 nm. El volumen de inyeccin fue de 5 SD.

Resultados y Discusiones:

Los resultados de nuestro estudio muestran que la estabilidad

de AA en jugo muestras usando 2,5% de cido meta-fosfrico
(concentracin final de cido meta-fosfrico era 1,25%) fue
significativamente menor que con cido meta-fosfrico al 10%
(concentracin final de cido meta-fosfrico de 5%).

La concentracin de AA en muestras de jugo (n = 6)

disminucin de 252,7 a 232,2 mg / L (8%) en 1 h. Al mismo
tiempo, la concentracin de AA en las muestras de tableta
disuelta en 2,5% cido metafosfrico (n = 6) se redujo desde
62,5 hasta 46,5 mg / comprimido (26%).

Muestras de jugo o tabletas disueltas en 10% la meta-fosfrico

cido eran ms estables.

Sin embargo, despus de 24 h, al menos 97,3% de AA todava

estaba presente en muestras de jugo o tabletas. Basndose en
estos resultados, cido meta-fosfrico al 10% se utiliza para la
preparacin de muestras

Conclusiones

Ambos mtodos puede ser til en el anlisis cualitativo y cuantitativo de

rutina de vitamina C en bebidas y preparaciones farmacuticas. Sin embargo,
Mtodo UPLC es ms rpido, ms sensible, consume menos eluyente y es ms
ecolgico que el mtodo HPLC convencional. En consecuencia, es ms barato
que UPLC HPLC debido a un mayor nmero de anlisis por unidad de tiempo
se puede realizar y el consumo de eluyente es mucho menor.