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Contedo
1- Planejamento de validao
2- Como proceder para determinar as caractersticas de desempenho de mtodos
2.1- Aplicabilidade
2.2- Faixa de trabalho
2.3- Linearidade
2.4- Faixa linear de trabalho
2.5- Sensibilidade
2.6- Homocedasticidade/heterocedasticidade
2.7- Limite de deteco
2.8- Limite de determinao/quantificao
2.9- Exatido/recuperao
2.10- Preciso
2.10.1- Repetitividade
2.10.2- Preciso intermediria
2.10.3- Reprodutibilidade
2.11- Seletividade
2.12- Robustez
Validao
Tipo de mtodo
FDA. International Conference on Validation of Analytical Procedures: Definitions and Terminology; Availability. Federal Register. V. 60 (40)
p. 11260-11262, March, 1995.
Procedimento
analtico
Identificao
Teste de
Quantitativo
Impureza
Ensaio-limite
Doseamento
Exatido
No
Sim
No
Sim
No
Sim
No
Sim
No
Sim
No
Sim
Especificidade
Sim
Sim
Sim
Sim
LD
No
No
Sim
No
LQ
No
Sim
No
No
Linearidade
No
Sim
No
Sim
Faixa
No
Sim
No
Sim
Preciso
Repetitividade
Preciso
Intermediria
Aplicabilidade
Faixa de trabalho
Linearidade
Homocedasticidade/heterocedasticidade
Faixa linear de trabalho
Sensibilidade
Limite de deteco
Limite de determinao/quantificao
Preciso (repetitividade, preciso intermediria e reprodutibilidade)
Exatido/Taxa de recuperao
Seletividade
Robustez
Aplicabilidade
Determinar qual ou quais matrizes e analito ou analitos para que o
mtodo analtico serviria,
Identidade do analito, incluindo especificao onde apropriado (p. ex:
arsnio total),
Faixa de concentrao coberta pela validao (p. ex: 0 50 mg/kg),
Uma especificao da faixa de matrizes do material teste coberta pela
validao (p. ex: frutos do mar),
Descrever o equipamento, reagentes, procedimento (incluir variao
permissvel p. ex: aquecer 1005C por 305min), procedimento de
calibrao e qualidade e, precauo de segurana especial necessria,
A aplicao pretendida e sua incerteza crtica (p. ex: anlise de
alimento para monitoramento). A incerteza padro u(c) do resultado c
deveria ser < 0,1 x c.
THOMPSON, M., ELLION, S. R. , WOOD, R. Pure and Applied Chemistry. V. 74, p. 835-855, 2002.
Faixa de trabalho
Linearidade
a habilidade das respostas analticas serem diretamente
proporcionais s concentraes das substncias em estudo.
Ser verificada analisando em triplicata solues padro
com 6 ou mais concentraes diferentes, dispostas em um
intervalo estabelecido pela faixa de trabalho. Os valores
encontrados para confeco da curva analtica tm que
estar livres de valores aberrantes e os mesmos devem
apresentar homocedasticidade.
sr = (xmedido xcalculado)2
n-1
Preparo da soluo me
Pesou-se 0,1066g de estireno com 99% de pureza.
Diluiu-se esta massa em balo volumtrico de
100mL com n-heptano. Considerando a pureza do
estireno 99%, o procedimento resultou em soluo
com concentrao de 1,055mg/mL
Concentrao (mg/L)
0,00 10,55
21,10
52,75
10
105,5
Homocedasticidade/heterocedasticidade
Determinao da homocedasticidade
Analisou-se em triplicata todos os pontos da curva
analtica (10,55 105,5 mg/L), calculando em
seguida as varincias das respostas de cada ponto de
concentrao. Dividiu-se a maior varincia (S2) pelo
somatrio das varincias ( S2). O valor obtido
comparado com o valor tabelado
Varincia
S2 = 1/n-1 [xi X(mdio)]2
Homocedasticidade
Se o valor calculado for menor que o tabelado de
Cochran, o mtodo homocedstico. Portanto, a
curva analtica pode ser construda pelo mtodo dos
mnimos quadrados normais
C cal = S2 maior/ S2
A faixa de trabalho(conc. na alquota de anlise 10,55105,5 mg/L) possibilitou detectar o estireno dentro dos
limites de interesse e a resposta do detector do
cromatgrafo conservou-se linear, que foi de 0,035 a 0,35
% m/m concentrao na amostra
Sensibilidade
Descreve quanto a resposta varia com a variao da
concentrao do analito. Pode ser expressa como a
inclinao da curva analtica (coeficiente angular),
expresso pala equao S=dx/dc, onde:
dx=variao da resposta, dc=variao da concentrao
medida ao mesmo tempo que testa a linearidade
Depende da natureza do analito e da tcnica de deteco
BRUCE, P. , MINKKINEN, P. , RIEKKOLA, M. L. Practical Method Validation: Validation sufficient for an Analysis
Method. Mikrochimica ACTA. V. 128, p. 93-106, 1998.
Limite de deteco LD
Limite de determinao/quantificao LQ
Limite de quantificao LQ
UKAS PUBLICATION ref: LAB 27, United Kingdom Accreditation Service. www.ukas.com
Preciso
Repetitividade
Preciso intermediria
Reprodutibilidade
Repetitividade
o grau de concordncia entre resultados
de anlises individuais quando o
procedimento aplicado repetidamente
mltiplas anlises de uma mesma amostra
homognea, em idnticas condies de
teste.
Determinao da repetividade
Um mnimo de 9 determinaes cobrindo a faixa especfica
para o procedimento (p. ex: 3 concentraes/3 replicatas cada,
menor, intermediria e maior); ou
Um mnimo de 6 determinaes a 100 % de concentrao teste
Calcular o desvio padro, o desvio padro relativo ou
coeficiente de variao ou a varincia.
GUIDANCE FOR INDUSTRY Q2B. Validation of Analytical Procedures: Methodology U.S. Department of Health and Human
Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research, Center for Biologics evaluation and
Research, November 1996 ICH.
Preciso intermediria
Expressa as variaes dentro de um laboratrio,
como: dias diferentes, analistas diferentes,
mtodos diferentes, ou equipamentos diferentes,
sobre uma mesma amostra ou padro, definindo
exatamente quais as condies a variar (uma ou
mais)
Reprodutibilidade
o grau de concordncia entre os resultados das medies
de um mesmo mesurando, efetuadas sob condies
variadas de medio(VIM).
A reprodutibilidade no um componente de validao de
mtodo executado por um nico laboratrio, obtido em
relao aos dados de validao obtidos atravs de
comparao interlaboratorial (INMETRO, 2002).
INMETRO. Orientaes sobre validao de mtodos de ensaio qumicos. DOQ-CGCRE-008, reviso:00-outubro 2002.
VIM Vocabulrio Internacional de termos Fundamentais e Gerais de Metrologia, 1995.
Exatido
Taxa de Recuperao
a relao entre o resultado experimental
obtido depois da anlise de uma amostra,
fortificada com uma quantidade conhecida
do analito, e o valor terico desta
quantidade fortificada
Seletividade
a interferncia por outra substncia, que
no seja o analito de interesse, na medio
pelo detector
Determinao da seletividade
Analisa-se trs vezes a soluo de estireno em heptano na
concentrao de (10,55mg/L) e depois analisa-se trs vezes
uma amostra que apresente na alquota de anlise uma
concentrao prxima a concentrao de (10,55mg/L) e
depois calcula-se o teste de igualdade de duas mdias de
amostras independentes (t)
Determinao da seletividade
O clculo do valor de t quando se comparam
mdias de duas amostras diferentes dado pela
expresso
t=
x1 x 2
Sa 1 / n1 1 / n2
Determinao da seletividade
Sa a estimativa do desvio padro agregado,
calculado a partir das estimativas dos desviospadres das duas amostras
Sa
(n1 1) S (n2 1) S
n1 n2 2
2
1
2
2
Robustez
Determinao da robustez
DEHA % m/m
48
120 h
0,286 0,306
0,270 0,325
0,276 0,329
DEHP % m/m
48
9,43
9,13
9,28
120 h
10,12
10,95
10,99
Plastificantes
Desvio padro das diferenas
0,624
(%m/m)
Teste de igualdade de duas mdias
(%m/m)
T tabelado
DEHA
DEHP
0,020
3,760
3,910
4,303
4,303