Producción de PHB

PARMETROS CINTICOS PARA LA PRODUCCIN DE PHB POR
MEDIO DE RALSTHONIA EUTROPHA USANDO GLICEROL COMO

SUSTRATO.
Karen Daz | Alejandra Gualdrn | Leidy Gualdrn | Sergio Pea
SUSTRATO:
Glicerol
QU ES EL PHB?
El PHB es producido
por
microorganismo
por la asimilacin de
carbono y es empleado
como una forma de
almacenamiento
de
energa
para
ser
metabolizado cuando
otras
fuentes
de
energa comunes no
estn disponibles.
Frmula: C3H8O3.
Densidad: 1,26 g/cm.
Punto de ebullicin:
290 C.
Punto de fusin: 17,8

C.
Clasificacin:
Polialcohol
Residuo Diesel
(98%pureza)
BIOMASA:
Ralstonia Eutropha
DSM 545
Crece
Aerbios.
en
ambientes
Produce
Polihidroxibutiratos (PHB)
cuando crece expuesta a
un exceso de azcares
como sustrato es decir
sometida a condiciones de
estrs nutricional.
El PHB puede acumularse
hasta
niveles
de
aproximadamente el 90%
del peso de la clula en
PRETATAMIENTO DEL
GLICEROL
ALGORITMO DE
SOLUCIN PARA
DETERMINAR LOS
PARMETROS
CINTICOS
CONDICIONES DE OPERACIN BATCH

ESPECIFICACIONES:
Nombre de la cepa: Ralstonia eutropha
DSM 545
Sustrato seleccionado: Glicerol puro
CONDICIONES DE OPERACIN
DEL
Condiciones de
mantenimiento de la cepa hasta ser utilizada
PROCESO:
Ralstonia eutropha DSM 545
Temperatura
Glicerol
4C
1%
Condiciones de preparacin del inculo

Erlenmeyer de 1 L contenido 200 mL
Se mantuvo en agitador shaker orbital
de medio de cultivo
durante 24h a 200 rpm y 35 C
Condiciones de fermentacin en Sartorious Stedim Biotech (BIOSTAT A
Temperatura
35C
pH
7
Plus).
volumen
Concentracin inicial de glicerol
2 L medio de cultivo
26.45 g/L
TABLA DE DATOS PARA BIOREACTOR BATCH
Tiempo
0
7,5
12
18
24
32
38
43
48
Biomasa, Sustrato, Producto,

(h)
X(g/L)
S(g/L) PHB(g/L)
0,2
26,45
0
0,4
25,47
0
0,5
21,5
0
1,2
19,28
0
2,6
18,28
0
8,6
13
0,52
12,8
8,42
1
16,5
7,74
1,35
19,5
6,39
1,42
56
19,6
4,68
2,44
60
19,2
0,27
3,35
Los datos vienen de experimentos realizados

en el laboratorio en fermentador Sartorious
Stedim
Biotech
35C
pH
de
7,
conteniendo 2 L de medio de cultivo.

Se obtuvo 0,2 g/L de biomasa al inicio de la
fermentacin.
La determinacin de biomasa, glicerol y PHB
se tomaron en muestras de intervalos
irregulares.

Se obtuvo la regresin polinmica para sustrato y biomasa en funcin del tiempo con el fin de
obtener nuevos valores equi-espaciados para el tiempo.
Comparacin de Biomasa Vs tiempo
Comparacin de Sustrato Vs Tiempo

30
25
25
20
20
Sustrato [g/L]
15
Dato ajustado
15
Dato sin ajuste
Biomasa [g/L]
Dato con ajuste

Dato sin ajuste
10
10
5
0
0
10
20
30
40
Tiempo [h]
50
60
70
10
20
30
40
50
60
70
Tiempo [h]

Resultados obtenidos con el ajuste:
t
X
(g/l)
S
(g/l)
25.83
6
24.23
7
22.03
2
19.56
3
17.08
9
14.78
7
12.74
8
10.98
1
0.305
10
0.357
15
0.930
20
2.279
25
4.499
30
7.531
11.16
3
15.02
4
18.59
0
9.412
40
45
dX/dt
26.40
0.368
2
0.038 -0.024
35
1/S
1/X
2.721
0.039 -0.001
3.281
0.041 0.063
2.805
0.045 0.192
1.075
0.051 0.357
0.439
0.059 0.525
0.222
0.068 0.666
0.133
0.078 0.749
0.090
0.091 0.743
0.067
0.106 0.616
0.054
0.06
5
0.00
4
0.17
5
0.20
7
0.15
7
0.11
7
0.08
8
0.06
7
0.04
9
0.03
3
dS/dt
Yx/s
dP/dt
qp
Yp/x
-0.010
-2.425
0.000
0.000
0.000
0.000
-0.216
-0.005
0.000
0.000
0.000
0.000
-0.380
0.164
0.000
0.000
0.000
0.000
-0.467
0.411
0.000
0.000
0.000
0.000
-0.494
0.722
0.000
0.000
0.000
0.000
-0.478
1.100
0.000
0.000
0.000
0.000
-0.434
1.535
0.212
0.084
0.011
0.125
-0.381
1.969
0.836
0.093
0.008
0.124
-0.334
2.226
1.144
0.050
0.003
0.068
-0.310
1.987
1.340
0.049
0.003
0.079
CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO Y

CONSUMO DE GLICEROL.
Biomasa - Sustrato Vs tiempo
Visualizacin
del
consumo de sustrato y
crecimiento
de
los
microorganismos
presentes en el reactor
30
25
20
Biomasa- Sustrato (g/L)
Biomasa
15
Sustrato
10
0
0
10
20
30
40
Tempo Horas
50
60
70
CONSUMO DE OXGENO
: Oxgeno que difunde desde el aire al medio

de cultivo.
: Oxgeno consumido por el microorganismo
: Coeficiente de transferencia de
oxgeno (1/h) .
: Concentracin de saturacin del
oxgeno disuelto en el lquido en la
interfase gas-lquido (g O2/L).
: Concentracin de oxgeno disuelto en
el medio de fermentacin (g O2/L).
O2
Actividad
del ciclo
de Krebs
PHB
: Constante asociada al consumo de oxgeno

para el mantenimiento celular (1/h) .
: Rendimiento de biomasa residual con respecto
al oxgeno consumido. (g R/ g O)
: Rendimiento de PHB con respecto al oxgeno
consumido. (g P/g O)
MODELO Y HERRAMIENTA
COMPUTACIONAL PARA PROCESO
BATCH: CONTOUIS
Es unmodelo matemticopara el crecimiento de microorganismos. El modelo de Contois
es considerablemente mejor que el modelo de Monod.
La herramienta computacional empleada para desarrollar el mtodo numrico de Contois

empleado en el proceso Batch fue IBM SPSS Statistics a travs de una regresin No
Lineal.
El algoritmo a travs del cual se desarroll la ecuacin Contois de la cintica Crecimiento
bacteriano fu Levenberg-Marquardt ya que posee un alto grado de convergencia y
exactitud en el modelamiento de los datos.
10
11
El modelo Contois arroj un R cuadrado

que se ajusta de manera correcta a los
datos suministrados, el Ks bajo indica
que el microorganismo tiene gran
afinidad con el sustrato lo que conlleva
a una gran generacin y concentracin
de producto.
12
BIOPROCESO EN CONTINUO: NO
FACTIBLE
Los estudios que se han llevado a cabo con el Microorganismo Ralsthonia

Eutropha no indican proceso en Continuo con glicerol ni con otros sustratos
debido a que el microorganismo al producir intracelularmente el PHB requiere ser
sometido a un proceso de Lisis celular al terminar la fermentacin, es decir
finalizado el crecimiento bacteriano con produccin interna del PHB la clula
debe morir para poder obtener el producto.
Se propone realizar un proceso

productivo en Lotes alimentados
o proceso
Fed-batch.
13
OPERACIN FED-BATCH
ESPECIFICACIONES:
Nombre de la cepa: Ralstonia eutropha
DSM 545
Sustrato seleccionada: Fructosa
La abundancia
del glicerol en la naturaleza
permite que los diferentes tipos de los
microorganismos lo metabolicen como un nico
carbn y fuente de energa. As, en algunos
procesos de la fermentacin industriales, el glicerol
puede substituir hidratos de carbono tradicionales,
como sacarosa, fructosa, glucosa y almidn.
Por el ejercicio acadmico se ha reemplazado el

glicerol por fructosa para poder desarrollar la
operacin en proceso fed-batch.
Glicer
ol
Fructos
a
14
ECUACIONES DE DISEO FED-BATCH
La velocidad de incremento en un cultivo est definido por:

Donde es el volumen de cultivo inicial.
La concentracin de biomasa en el recipiente en cualquier instante es:
Cuando el sustrato es totalmente consumido, y . Adems, puesto que casi todo el sustrato
en una unidad de volumen se consume se puede considerar
15
TABLA DE DATOS PARA BIOREACTOR FED

BATCH
Sulfat
S
Tiemp
X
P
o de
(Fructo
o (h) (g/l) (g/l)
Amoni
sa) (g/l)
o (g/l)
0
0.2
6.5
0.73
0.4
8.2
1.23
10
0.8
0.01
8.3
1.3
15
1.8
0.9
6.4
1.4
20
2.5
3.8
1.27
25
3.2
1.3
2.2
1.1
30
3.8
2.1
0.42
35
4.3
3.4
0.27
40
4.6
3.9
1.9
0.25
Sr
0.112
3
0.150
0
0.156
6
0.218
8
0.334
2
0.500
0
0.200
0
0.135
0
0.131
6
F
F(l/h)
(ml/h)
(h
-1
80
0.08
0.04
En este proceso de cultivo por

lote alimentado, los nutrientes
son
continuamente
alimentados, mientras que el

efluente
es
removido
420
0.42
0.21
80
0.08
0.04
es utilizado principalmente para
560
0.56
0.28
disminuir efectos de inhibicin,
500
0.5
0.25
llegando
350
0.35
0.175
770
0.77
0.385
310
0.31
0.155
discontinuamente. Este sistema
productividad
mejorar
la
de
la
fermentacin.
16
CRECIMIENTO MICROBIANO PARA FED BATCH

Biomasa, Producto y consumo de sustrato Vs Tiempo
9
8
7
6
X (g/l)
P (g/l)
S (Fructosa) (g/l)
Sulfato de Amonio (g/l)
S,X,P (g/l)
4
3
2
1
0
0
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Tiempo (h)
17
MODELO Y HERRAMIENTA
COMPUTACIONAL PARA PROCESO
FEDBATCH: SHAHHOSSEINI
Donde:
: Velocidad mxima de crecimiento microbiano.
: Constante de Saturacin.
: Relacin
: Concentracin de sulfato de amonio en el bioreactor (g/L).
: Concentracin de fructosa en el bioreactor (g /L).
: Valor de cuando
: Constante adimensional.
La herramienta computacional empleada para desarrollar el modelo de

Shahhosseini empleado en el proceso FED BATCH fue IBM SPSS Statistics a
travs de una regresin No Lineal.
18
19
COMPARACIN DE LOS PARMETROS

CINTICOS EN OPERACIN BATCH Y
FEDBATCH
Batch
(Glicerol)
Fed-Batch
Modelo
Contois
Shahhosseini
Mtodo de
estimacin
(Algoritmo)
LevenbergMarquardt
LevenbergMarquardt
0.005
0.210
0.599
0.042
Constante de
saturacin
Se determin que el proceso

Fed-Batch es una buena
alternativa para lograr una
alta densidad de biomasa
conteniendo
la
mayor
cantidad posible de PHB
20
REFERENCIAS
BIBLIOGRFICAS
MARTNEZ, Guadalupe. PRODUCCIN DE PLSTICOS BIODEGRADABLES EN BACTERIAS.

Maestra en Biotecnologa. Facultad de Ciencias UdelaR. 2013
POSADA, John, y Otros. OPTIMIZATION ON THE USE OF CRUDE GLYCEROL FROM THE
BIODIESEL PRODUCTION TO OBTAIN POLY-3-HYDROXYBUTYRATE Bioenergy Technology.
Universidad Nacional de Colombia sede Manizales. 2011.
G.G Yolanda ,M.C Juan Carlos , G.R Orfil, C.L Jess Antonio SNTESIS Y
BIODEGRADACIN DE POLIHIDROXIALCANOATOS: PLSTICOS DE ORIGEN
MICROBIANO. Rev. Int. Contam. Ambie. 29. Redalyc, 2013.
BECERRA JIMENEZ, Mnica Liliana. PRODUCCIN DE UN POLMERO TIPO
POLIHIDROXIALCANOATO (PHA) EMPLEANDO RESIDUOS DE LA PRODUCCIN DE
BIODIESEL Facultad de Ciencias. Universidad Nacional de Colombia. Bogot, 2013. Pgina
8-10
NARANJO VASCO, Javier Mauricio. PRODUCCIN DE POLIHIDROXIBUTIRATO A
PARTIR DE RESIDUOS AGROINDUSTRIALES. Universidad Nacional de Colombia. 2010.
PRATAP R. patnaik, DISPERSION OPTIMIZATION TO ENHANCE PHB PRODUCTION IN FEDBATCH CULTURES OF RALSTONIA EUTROPHA Institute of Microbial Technology,
Bioresource Technology 97 (2006) 19942001
GRACIAS

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PARMETROS CINTICOS PARA LA PRODUCCIN DE PHB POR

MEDIO DE RALSTHONIA EUTROPHA USANDO GLICEROL COMO

Densidad: 1,26 g/cm.

Punto de fusin: 17,8

CONDICIONES DE OPERACIN BATCH

Ralstonia eutropha DSM 545

Se mantuvo en agitador shaker orbital

durante 24h a 200 rpm y 35 C

Condiciones de fermentacin en Sartorious Stedim Biotech (BIOSTAT A

TABLA DE DATOS PARA BIOREACTOR BATCH

Biomasa, Sustrato, Producto,

Los datos vienen de experimentos realizados

conteniendo 2 L de medio de cultivo.

TABLA DE DATOS PARA BIOREACTOR BATCH

Comparacin de Biomasa Vs tiempo

Comparacin de Sustrato Vs Tiempo

Dato sin ajuste

Dato con ajuste

TABLA DE DATOS PARA BIOREACTOR BATCH

CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO Y

Biomasa- Sustrato (g/L)

: Oxgeno que difunde desde el aire al medio

: Constante asociada al consumo de oxgeno

La herramienta computacional empleada para desarrollar el mtodo numrico de Contois

El modelo Contois arroj un R cuadrado

Los estudios que se han llevado a cabo con el Microorganismo Ralsthonia

Se propone realizar un proceso

Por el ejercicio acadmico se ha reemplazado el

ECUACIONES DE DISEO FED-BATCH

La velocidad de incremento en un cultivo est definido por:

TABLA DE DATOS PARA BIOREACTOR FED

En este proceso de cultivo por

alimentados, mientras que el

es utilizado principalmente para

disminuir efectos de inhibicin,

discontinuamente. Este sistema

CRECIMIENTO MICROBIANO PARA FED BATCH

La herramienta computacional empleada para desarrollar el modelo de

COMPARACIN DE LOS PARMETROS

Se determin que el proceso

MARTNEZ, Guadalupe. PRODUCCIN DE PLSTICOS BIODEGRADABLES EN BACTERIAS.

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