1.

- RESUMEN

En el presente trabajo de investigacin se busc determinar la presencia

de microorganismos patgenos como los estafilococos aureus y
Echerichia coli en teclados de computadoras y coliformes en manijas de
puertas. Todas las muestras tomadas en la Facultad de Ingeniera
Ambiental.
Para alcanzar tal objetivo se empez con la preparacin de los medios de
cultivo tales como Manitol Salado, EMB, MC Conkey y endo. Luego
mediante el mtodo de hisopado, se prosigui con la toma de muestra de
las manijas y los teclados, trasladando las muestras en medios de
transporte (usando agua peptonada y tween 80), luego se realiz la
siembra o el cultivo en todos los medios. Cuando ya se not la formacin
de colonias en los medios se hizo la tincin Gram, luego se pas a las
pruebas bioqumicas como la prueba de catalasa, con la que se pudo
diferenciar los estafilococos de los estreptococos, y coagulasa, para
diferenciar los estafilococos aureus de las otras especies de este gnero.
Los resultados a estas pruebas fueron de la siguiente manera, para la
catalasa fueron positivas mientras que para la coagulasa fueron negativas.
Por tanto en teclados no hay estafilococos aureus, en las manijas
analizadas se encontraron microorganismos entre cocos, estafilococos,
estreptococos, micrococos y bacilos.

2.- INTRODUCCIN

Como sabemos las bacterias estn en casi todos los ambientes: en el aire, el suelo y
el agua, desde el hielo hasta las fuentes termales; incluso en las grietas hidrotermales
de las profundidades de los fondos marinos pueden vivir bacterias metabolizadoras
del azufre. En el da y da y sin notarlo, la mayora de personas estn en contacto con
miles de bacterias presentes en elementos u objetos de uso comn, las cuales
pueden ser nocivas o inofensivas para la salud.
En este proyecto se analizar la presencia de microorganismos bsicamente en dos
ambientes de uso diario por el constante contacto de la mayora de personas, los
cuales son: teclados de los ordenadores del centro de cmputo y las manijas de las
puertas de la Facultad de Ingeniera Ambiental. Segn estudios realizados
anteriormente en los teclados, se ha encontrado presencia principalmente de
bacterias como la escherichia colli que puede causar gastroenteritis e infecciones de
las vas urinarias, as como el estafilococo ureo, vinculado a distintos tipos de
infecciones en la piel como la foliculitis, fornculos y tambin pueden liberar toxinas
que pueden producir enfermedades como el sndrome de shock txico.

En el caso de las manijas, se tiene un mayor riesgo de albergar coliformes y

otros tipos de bacterias que causen enfermedades como diarrea, vmito o
alguna infeccin, sobre todo si se manipula sin una buena higiene.
En este proyecto se basa principalmente en determinar y analizar la calidad
microbiolgica presentes en teclados y manijas; y para poder realizar el
reconocimiento de los microbios y/o bacterias se seguir una seria de pasos o
procesos tales como: preparacin del medio de cultivo, toma de muestra,
siembra, lectura macroscpica y microscpica y algunas pruebas bioqumicas
para determinar el estafilococo ureo.
Este trabajo tiene como propsito fundamental alertar a las personas de cuan
vulnerable esta nuestras vidas amenazadas por estos microorganismos, y de
una manera u otra concientizar que tan importante es la buena higiene para
poder contrarrestar la proliferacin de las bacterias causadas por los malos
hbitos de limpieza

2.- MARCO TERICO

BACTERIAS
Las bacterias son microorganismos procariontes que
pertenecen al reino de las mneras.
Existen en diversas formas incluyendo filamentos, esferas
(cocos), barras (bacilos), sacacorchos (vibrios) y hlices
(espirilos).
Las bacterias son imprescindibles para el reciclaje de los
elementos, pues muchos pasos importantes de los ciclos
biogeoqumicos dependen de stas
En el cuerpo humano hay aproximadamente diez veces
tantas clulas bacterianas como clulas humanas, con
una gran cantidad de bacterias en la piel y en el tracto
digestivo

ESTAFILOCOCOS
Es
un gnero de bacterias
estafilococceas
(familia de bacterias Gram
posito) de
la clase Cocci.
Comprende microorganismos que
estn presentes en la mucosa y en
la piel de los humanos y de otros
mamferos y aves.
Adems de ser cocos fermentadores
Gram-Positivos
son
oxidasa
negativos y catalasa positivos as
mismo se encuentran dispuestos en
racimos, de ah la denominacin de
estafilococos.

Staphyilococcus aureus
Es una bacteria anaerobia facultativa, grampositiva,
productora de coagulasa, catalasa, inmvil y no
esporulada que se encuentra ampliamente distribuida por
todo el mundo.
Las cepas habituales de Staphylococcus
aureus son resistentes a la penicilina,
dejando como los antibiticos ms eficaces
para combatirlos a los aminoglucsidos, las
cefalosporinas, la oxacilina o la nafcilina
La mayora de las cepas son hemolticas,
capacidad de desintegrar los eritrocitos
(glbulos rojos o hemates), en agar sangre
de caballo, pero la zona de hemlisis es
relativamente pequea si se compara con el
dimetro de la colonia (diferenciacin con
los estreptococos hemolticos).

ESTREPTOCOCOS
Son
organismos anaerobios facultativos y Gram
Positivos que a menudo aparecen formando cadenas o
por pares y son catalasa-negativos
La mayora de las cepas son
aerobias o microaerfilas aunque
hay especies anaerobias. La
reaccin de catalasa es negativa.

Escherichia Coli
Es un bacilo que reacciona negativamente a la tincin de
Gram (Gram negativo), es anaerobio facultativo, mvil
por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma
esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa.

En su hbitat natural, vive en los

intestinos de la mayor parte de los
mamferos sanos. Es el principal
organismo anaerobio facultativo del
sistema digestivo. En individuos sanos,
es decir, si la bacteria no adquiere
elementos genticos que codifican
factores virulentos, la bacteria acta
como un comensal formando parte de la
flora intestinal y ayudando as a la
absorcin de nutrientes.

MEDIOS DE CULTIVO

Son una mezcla de nutrientes que, en

concentraciones adecuadas y en
condiciones fsicas ptimas, permiten
el crecimiento de los microorganismos.

CLASIFICACIN

Segn su estado
fsico

SEGN SU USO

Medio general
Medio diferencial
Medio de enriquecimiento
Medio selectivo: Son medios utilizados para favorecer el
crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin
polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en
facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin
microbiana especfico.
Medio de transporte: preparado para servir como
almacenamiento temporal a especmenes transportados o en
transferencia; mantienen su viabilidad y su concentracin.

* protena soluble en plasma sanguneo, ayuda a detener

el sangrado al favorecer la formacin de cogulos de
sangre.
**esta protena acta como una especie
de pegamento o hilo entre las plaquetas que se
producida por exponen en alguna herida

PRUEBAS BIOQUMICAS
PRUEBA DE COAGULASA

La coagulasa es una protena

varios microorganismos que permite la conversin
del fibringeno* en fibrina**, esto hace que se
coagule la sangre.
Esta prueba se usa para distinguir entre diferentes
tipos de estafilococos, un resultado positivo indica
la presencia de estafilococos aureus.

La coagulasa est estrechamente relacionada

con la superficie de la bacteria S. aureus y puede
revestir su superficie con fibrina al entrar en
contacto con la sangre. Se cree que esta cubierta de
fibrina del estafilococo es capaz de resistir
la fagocitosis haciendo esta bacteria tenga un factor
de virulencia mayor.

PRUEBA DE CATALASA
Pone de manifiesto la presencia del
enzima catalasa en una bacteria. Esta
enzima es capaz de descomponer el
perxido
de
hidrgeno
(agua
oxigenada) en agua y oxgeno, con la
consiguiente aparicin de burbujas
(indicador del resultado de la prueba)
debido al oxgeno liberado.

3.- OBJETIVOS

GENERAL:
Determinar la presencia de estafilococos y escherichia coli en teclados de
computadoras del centro cmputo de la Facultad de Ingeniera Ambiental (FIA) y
coliformes en manijas de puertas de la FIA.

ESPECIFICOS:
Determinar la presencia de estafilococos aureus en teclados de computadoras
del centro cmputo de la Facultad de Ingeniera Ambiental, usando el medio de
cultivo Manitol Salado as mismo las pruebas de catalasa coagulasa.
Determinar la presencia de Escherichia coli presentes en teclados de
computadoras del centro cmputo de la Facultad de Ingeniera Ambiental,
usando el medio el medio de cultivo EMB (Eosina y Azul de Metileno).
Evidenciar contaminacin por coliformes en las manijas de las puertas de la
Facultad de Ingeniera Ambiental, usando medios de cultivo como agar Endo y
Mac Conkey.

4.-MATERIALES,
EQUIPOS E INSUMOS

MATERIALES
Placas Petri
Tubos de ensayo
Matraz de Erlenmeyer
Hisopos estriles
Pipeta
Espatula de Drigalsky
Asas de siembra
Papel Kraft y algodn
Etiquetas
Caja trmica
Hornilla

EQUIPOS
Balanza analtica
Autoclave
Refrigeradora
Incubadora
Hornilla

MEDIOS DE CULTIVO
Agar Mac Conkey:

Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la

recuperacin de enterobacterias y bacilos Gram negativos. La lactosa es la nica
fuente de carbono. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas colonias de
diferentes tonos de rojo. Las bacterias que no fermentan la lactosa forman
colonias incoloras o transparentes.

Agar Manitol Salado:

Es un medio selectivo para estafilococos debido a la

alta concentracin de cloruro sdico (75 g/L). La mayora de los microorganismos
no crecen a esta concentracin de sal, mientras que los estafilococos, entre los
que se encuentran los del gnero Staphylococcus, s lo hacen. Incorpora manitol
como fuente de carbono y rojo fenol como indicador, lo que permite aprovechar la
correlacin que existe entre la patogenia y la capacidad fermentadora del manitol
de los estafilococos para establecer un diagnstico presuntivo y sirve, por lo tanto,
como indicativo de la presencia de Staphylococcus aureus. Los estafilococos
patgenos fermentan el manitol y producen colonias amarillas. Los estafilococos
no patgenos no lo fermentan y producen colonias de color rosa.

 Agar Endo:

Es un medio de cultivo microbiolgico de color rosa plido.Fue

originalmente desarrollado para el aislamiento deSalmonella tipy, pero ahora
es usado mayormente como un medio para coliformes. La mayora de los
organismos gram negativos crecen bien en este medio, mientras que otros
organismos gram positivos son inhibidos. Los organismos coliformes fermentan
la lactosa en este medio produciendo un color rojo (por ejemplo Escherichia
coli) mientas que los no fermentadores de lactosa producen colonias claras y
sin color, por ejemplo Salmonella sp.

Agar EMB:

Es un medio diferencial y selectivo para aislar y detectar

enterobacterias en muestras mixtas. Los colorantes de anilina (eosina y azul
de metileno) inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y a las Gram
negativas exigentes. El medio incluye lactosa, lo que permite la diferenciacin
de los fermentadores de lactosa de los no fermentadores. Los fermentadores
fuertes de lactosa, sobre todo Escherichia coli, producen colonias de color
negro verdoso con brillo metlico. Los productores ms dbiles de cidos,
forman colonias de color violeta. Los no fermentadores de lactosa forman
colonias transparentes.

REACTIVOS
Agua

peptonada:

Medio
de
enriquecimiento no selectivo, en el cual la
peptona proporciona nutrientes necesarios
para el desarrollo microbiano y el cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico.

Tween 80:

Es una base grasa q

se emplea en la formulacin de
supositorios. Se caracteriza por su
alta compatibilidad con los P.a., su
comportamiento inerte y facilidad
de almacenamiento principalmente.

 Insumos para la coloracin Gram:

violeta, lugol, alcohol acetona y safranina.

Cristal

5.- MTODO

El objetivo de los anlisis microbiolgicos de superficies es

comprobar el estado higinico del lugar de trabajo, de modo que
evitemos contaminaciones cruzadas durante el proceso de los
alimentos.
Cabe resaltar que existen distizntos mtodos para el examen
microbiolgico de las superficies, tales como:

Mtodo
Mtodo
Mtodo
Mtodo

del hisopo
de la placa de contacto
de la jeringa de agar
de la lengeta( o pelcula pegajosa)

MTODO DEL HISOPO

Este sistema es el ms antiguo y el ms

utilizado en el examen microbiolgico de
superficies, ya que sirve para el anlisis
tanto de las superficies planas como no
planas. Es recomendado especialmente
para analizar superficies de aparatos y
utensilios (cubiertos, manijas, teclado de
computadoras, etc.)
Adems se pueden estudiar superficies
muy contaminadas, ya que a partir de la
solucin salina estril es posible realizar
las diluciones decimales precisas.

PROCEDIMIENTO
Delimitar la superficie que se va a analizar
mediante una plantilla con una abertura de
dimensiones conocidas (ej. 9 cm2, 10 cm2).
Humedecer el hisopo esteril en una solucin de
10 ml de solucin de agua peptonada y tween
80, y restregar varias veces sobre la superficie
delimitada por la plantilla.
Introducir de nuevo el hisopo en el tubo con
solucin de agua peptonada y tween 80, y dejar
durante 15-30 minutos de manera que los
microorganismos se liberen del algodn al caldo.
Sembrar 0.1 ml de dicho caldo en la placas
correspondientes.
Incubar durante 24-48 horas a 37C. El resultado
se expresa en ufc/ (9 cm2, 10 cm2).

6.- RESULTADOS

6.1.- MANITOL SALADO

OBSERVACIN MACROSCPICA

Teclado 1

Teclado 2

Teclado 3

Teclado 4

Teclado CEIA

Circular

Elevada-irregular

Elevada-irregular

circular

irregular

Superficie

Convexa

plana

plana

convexa

plana

Borde

Redondeado

irregular

irregular

redondeado

Redondeado

0.5 mm

1 mm

0.5 mm

1 mm

2.5 mm

amarillo

rosado

amarillo

amarillo

amarillo

Viscoso

viscoso

viscoso

mucoidal

viscoso

Forma

Tamao(Aprox.)
Color
Consistencia

Los estafilococos patgenos fermentan el manitol y producen

colonias amarillas. Los estafilococos no patgenos no lo
fermentan y producen colonias de color rosa. Segn nuestros
medios en su mayora son estafilococos no patgenos.

PRUEBA DE LA CATALASA
Se realiz la prueba de la Catalasa para comprobar si las colonias
seleccionadas eran de la familia Stafilococos o Streptococos, como era de
esperar; todas las colonias resultaron ser Catalasa positiva, lo cual nos
indic que dichas colonias eran de la familia Stafilococos.

Prueba de la Catalasa

Colonias

Positivo

Negativo

ii

iii

iv

PRUEBA DE LA COAGULASA
Despus de hacer la prueba de la Catalasa, proseguimos a realizar la prueba
de la Coagulasa, para determinar si se trata de un Stafilococos Aureus (que es
uno de nuestros objetivos) u otra especie de Stafilococos (sin especificar).
Prueba de la Coagulasa

Colonias

Positivo

Negativo

ii

iii

iv

Realizando la prueba de coagulasa, que consiste en

poner en diversos tubos de ensayo unas gotas de
suero. Luego sacaremos una pequea colonia (ya
antes verificada que sea Stafilococos) y sumergir en
el tubo. Si en el periodo de 1 a 4 horas a 37C
coagula, entonces se concluir que es Stafilococos
Aureus.

OBSERVACIN MICROSCPICA

6.2.- MAC CONKEY

OBSERVACIN MACROSCPICA
S. D2-161

Ing.Masgo

Post-grado

SUM

Bao

Forma

circular

puntiforme

puntiforme

circular

Circular

Superficie

convexo

umbonada

elevada

convexo

elevada

Borde

redondeado

irregular

redondeado

Redondeado

irregular

Color

amarillo

crema

rosado

rosado

crema

consistencia

viscoso

viscoso

mucoidal

viscoso

mucoidal

OBSERVACIN MICROSCOPICA
BAO DE HOMBRES

SALA DE USOS MLTIPLES (SUM)

POST-GRADO

MUESTRA

BAO
ING.MASGO

TINCIN
GRAM
+Y+

FORMAS ENCONTRADAS

diplococos estreptococos y estafilococos.

cocos, diplococos, estreptococos y estafilococos.

POST-GRADO

+Y-

diplococos y estafilococos.

SUM

+Y-

cocos, bacilos y estreptococos.

Saln D2-161

cocos, diplococos, estreptococos y estafilococos.

6.3.- EMB
OBSERVACIN MACROSCPICA
Forma
Superficie
Borde
Color
consistencia

Teclado CIFIA
Circular
Plano
Redondeado
Verde oscuro
viscoso

Centro cmputo
Puntiforme
Plana
Irregular
Negra verduzca
viscosa

OBSERVACIN MICROSCOPICA
TECLADO CIFIA

7.- DISCUSIN

 En un primer momento en las muestras preparadas con

el agar endo no hubo indicios de crecimiento bacteriano
en todos los casos, este cultivo fue adquirido ya
preparado, por lo cual se induce que no se prepar
tomndose en cuenta las precauciones necesarias; con
lo cual se procedi a la preparacin de un nuevo agar
bajo las indicaciones del supervisor de turno.
Se obtuvo en una placa Petri de Endo el brillo metlico
en tan solo una parte de la placa pues no fue invertido a
la hora de poner en el horno. Se volvi a hacer el mtodo
y sali ligeramente visible el brillo metlico.

 Para tener una mayor seguridad en los resultados, se

necesitan realizar pruebas bioqumicas para
determinar la presencia de Etaphylococcus.
En las placas que contenan manitol salado
observamos macroscpicamente el crecimiento de
colonias de color amarillo y viscoso lo cual nos indica
la presencia de Staphylococos que al verlos
microscpicamente (tuvimos que utilizar al menos tres
microscopios ya que algunos de estos se encontraban
en mal estado, es por ese motivo que no logramos
observar bien), despus de hacer tincin Gram, nos
dimos cuenta que se trataba de bacilos Gram positivo .

8.- CONCLUSIONES

 Se determin la presencia de Escherichia coli en

teclados de computadoras del centro cmputo de la
FIA.
Se determin que no hay presencia de estafilococos
aureus en teclados de computadoras del centro
cmputo de la FIA.
De determin la presencia coliformes en manijas de
puertas de la FIA.

9.- RECOMENDACIONES

 Por falta de tiempo y presupuesto, no se puedo realizar

pruebas bioqumicas como ureasa, citrato, indol para
determinar con exactitud la presencia de escherichia coli.
Al concluir que no haba presencia de estafilococos ureos,
se pudo mejorar el trabajo determinando las especies que
crecieron en los medios, pero por razones anteriormente ya
mencionadas no
se pudo realizar.

 Realizar de manera complementaria una comparacin de la

determinacin de microorganismos en internet donde las personas
manipulan los teclados con comida.
Se sugiere tener cuidado en la manipulacin de las muestras donde
existen microorganismos, ya que estas pueden infectar a las
personas que estn alrededor.
Al momento de calentar el medio de cultivo ir agitndolo para evitar
quemar el agar y as este no pierda sus propiedades.
Se debera implementar equipos como microscopios, reactivos en
buen estado y medios diferenciales para que se puedan obtener
resultados ms cercanos a la especie de las bacterias encontradas.

9.- BIBLIOGRAFA

http://www.digesa.minsa.gob.pe/norma_consulta/proy_microbiologia.htm
https://es.tendencias.yahoo.com/blogs/salud-y-bienestar/las-manos-una-fuente-infinita-bacterias
-140500946.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivo#Clasificaci.C3.B3n
http://es.slideshare.net/SHAKAROON/medios-de-cultivo-15379886?related=1
https://cv2.sim.ucm.es/moodle/file.php/21298/Practicas/PracMicro07-08.pdf (BLOCK
http://www.osakidetza.euskadi.eus/r85-sida01/es/contenidos/informacion/hd_publicaciones/es_hd
on/adjuntos/Protocolo42MuestrasMicrobiologia.pdf
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20micagral.pdf
http://defimicrobiologia.blogspot.com/2010/09/preparacion-de-muestras-y-solucion.html
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram
http://www.britanialab.com/productos/363_hoja_tecnica_es.pdf
http://www.cienytech.com/catalogos/Microbiologia/Controlsup.pdf
http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/medios-de-cultivo.pdf
https://es.wikipedia.org/wiki/Agar_endo

MUCHAS GRACIAS !!
Por la atencin prestada