Qu microorganismo esta observando usted en esta microfotografa?

10X
Qu microorganismo esta observando usted en esta microfotografa?
40X
 Los microorganismos por su tamao (um)
y por el aspecto hialino del citoplasma,
son difciles de verse con el microscopio
ptico.
La principal dificultad es la falta de
contraste entre la clula y el medio que la
rodea.
Qu podemos emplear para distinguir
la morfologa estructuras de los
microorganismos
Histotcnicas microbiolgicas

Mg. Eduardo Sedano

Gelvet
 Microbiologa mdica
Es el estudio de las interacciones entre
los humanos y los microorganismos con
los que coexisten.
Los microorganismos son clasificados de
acuerdo a la naturaleza de su interaccin
en un espectro que va desde los
beneficiosos hasta los dainos.
 Clasificacin de los
microorganismos
Comensales:
Colonizan el cuerpo sin causar dao
Microbiota o flora microbiana normal

Patgenos
Producen dao en el husped humano
Invasin directa e injuria
Por la produccin de una toxina
 Clases de microorganismos
patgenos
Por su posibilidad de cultivarse
No exigentes
Exigentes
Parsitos intracelulares obligados
Tipo
Priones
Virus
Bacterias
Hongos
Parsitos
 Bacteria:
Microorganismos procariotas
Unicelular simple
Miden entre 0.2 a 2 um.
No posee membrana nuclear
No posee sistema mittico.
No posee cloroplastos
No posee mitocondrias
Cromosoma circular nico (ADN)
 Ribosomas pequeos 70S
Reproduccin
Divisin simple
Fisin binaria
Pared celular que es diferente en:
Bacteria Gram (+)
Bacteria Gram (-)
Mycobacteria.
Algunas presentan:
Cpsula
Flagelo
Fimbrias o pili sexual.
Las bacterias y otros procariotas
(clulas sin ncleo) viven:
Cubren superficies corporales
Animales
Agua hirviente
Desiertos polares
Corteza terrestre
Lagos salados
Residuos nucleares
Suelo marciano
 Relaciones con los
organismos hospederos
 Simbiosis: Asociacin cooperativa,
beneficiosa para ambos y que se
requiere para la supervivencia de stos.
Ejemplo: Escherichia coli en el intestino
humano.
Comensalismo: Organismos dismiles
que viven juntos para beneficiar a uno
(el comensal), sin daar ni beneficiar al
otro (hospedero). Ejemplo: Microbiota o
flora microbiana normal.
 Saprofitismo: Estado en el cual los
microorganismos viven de seres
muertos.
Parasitismo verdadero: Organismos
dismiles que viven juntos para
beneficio del parsito y en
detrimento del hospedero. Ejemplo:
Helicobacter pylori
 Situaciones que contribuyen a
la propagacin y transmisin
de enfermedades por bacterias
Mala sanidad
Malnutricin
Hacinamiento
Pacientes debilitados en los hospitales
Personas con sistemas inmune
defectuoso
Criterios patolgicos
para establecer que
una bacteria es el
causante de una
enfermedad lesin
Criterios patolgicos
Se encuentra en la lesin que
caracteriza la enfermedad
Se encuentra centrado en la lesin o
guarda una relacin simtrica con ella
Su cantidad aumenta a medida que la
lesin se expande
Su cantidad disminuye y desaparece a
medida que la lesin se resuelve.
 Mtodos de estudio
Examen inmediato
Mtodo del preparado en fresco sin
colorear.
Preparados pos fijacin e incluidos
en parafina
Mtodos de coloracin
Mtodos de impregnaciones argnticas

Mtodos histoqumicos.
 Mtodos inmunohistoqumicos
Mtodos moleculares:
Mtodos de deteccin directos:
Prueba directa de cidos nucleicos.
Hibridacin in situ.
 Mtodos de amplificacin:
Reaccin de la cadena polimerasa (PCR)
PCR nested
PCR multiplex
PCR in situ
Reaccin de la cadena ligasa (LCR)
DNA cadena ramificada (bDNA)
 Examen inmediato
Mtodo del preparado en
fresco sin colorear.
Preparados pos fijacin e
incluidos en parafina

Mtodos de coloracin.
Mtodo de coloracin de Gram
Mtodos de coloracines alcohol-
cidorresistente
Mtodos de coloracin con colorantes
neutros
 Mtodos de impregnaciones argnticas
Impregnacin argntica de Warthin-Starry
Mtodos histoqumicos.
Reaccin de PAS
Mtodos inmunohistoqumicos.
Mtodos moleculares
Hibridacin
PCR
Mtodo de coloracin de Gram
 Coloracin de Gram
Coloracin diferencial
Dos grupos: Gram positivo o
negativo
Bacterias y otros microorganismos
Forma: coco, bacilo, espiral
Asociacin: pares, cadenas,
racimos
 Coloracin de Gram
Localizacin: intra o extra
Otras caractersticas: cpsula, espora
Clulas epiteliales y otras
Leucocitos
Hemates
 Diferencias entre la Pared Celular de las
bacterias Gram (+) y Gram (-)
Pared Gram (+)
Capa densa y uniforme de 200 a 800 A
Peptido glucano 50%
Lipoproteinas 1 a 4%
(pocas veces)
cidos teicoicos 50%

Pared Gram (-)

Capa interna delgada de 20 a 30 A,
cubierta por capas externas de
densidad menor
Peptido glucano 5-10% (peso seco)
Lpidos 20%
cidos teicoicos 5-10%
 Procedimiento de la coloracin de Gram

Cristal violeta
 Procedimiento de la coloracin de Gram
Lavar con agua destilada

Solucin de Se forma complejo Cristal violeta - Lugol Se forma complejo Cristal violeta - Lugol

Yodo de Lugol
 Procedimiento de la coloracin Gram
Lavar con agua destilada

Diferenciar con alcohol-acetona

 Procedimiento de la coloracion Gram
Lavar con agua destilada

Zafranina
 Procedimiento de la coloracin Gram
Lavar con agua destilada

Bacteria Gram positiva Bacteria Gram negativa

 Coloracin de Gram Diagnstico

Gram Negativos Gram Positivos

Mycobacterium
Taxonoma
Phylum BXIV. Actinobacteriae phy. Nov.
Clase I Actinobacteria
Subclase V. Actinobacteridae
Orden I. Actinomycetales
Suborden VII. Corynebacterineae
- Familia I. Corynebacteriaceae
- Familia II. Dietziaceae
- Familia III. Gordoniaceae
- Familia IV. Mycobacterium
- Familia V. Nocardiaceae
- Familia VI. Tsukamurellaceae
- Familia VII. Williamsiaceae
 Caractersticas generales

Bacilos aerobios, alcohol-cido resistentes, de

crecimiento lento
Dcada de los 80: disminucin de casos
Dcada de los 90: aumento de casos por VIH
Aparicin de Mycobacterium tuberculosis
MDR y XDR
 Especies importantes

Complejo tuberculosis:
Mycobacterium tuberculosis (humana)
Mycobacterium bovis (ganado)

Mycobacterium africanum (humana)

Mycobacterium microti (rata)

 Morfologa
Caractersticas:
Bacilos finos de 0.2 a 0.4 mm por 2 a 10mm
Aisladas son rectas o ligeramente curvas
En cultivos forman grupos debido a la hidrofobicidad de su
superficie.

Pared celular:
cido N-glicolilmurmico
Sin cido acetl murmico
Alto contenido de cido miclico (60% del peso seco de la
bacteria) forma una gruesa capa cerosa resistente a la tincin.
Cuando se fuerza la entrada a su interior de colorantes
derivados de la fucsina, estos resisten la decoloracin por los
cidos o por el alcohol.
Diagnstico histopatolgico
Coloraciones alcohol-
cidorresistentes:
Mtodos de coloracin a base
de carbolfucsina
Mtodo de coloracin de Ziehl-Neelsen
(coloracin en caliente)
Mtodo de coloracin de Kinyoun
(coloracin en frio)
Mycobacterium tuberculosis in lung, Ziehl-Neelsen acid fast stain.
Otros microorganismos
alcohol cido resistentes
 Nocardia asteroides
Diagnstico
Bacilos Gram positivos.
Bacilos alcohol cido resistentes de color rosa plido

Coloracin de Gram Coloracin de Ziehl Neelsen (+)

 Rhodococcus equis
Diagnstico
Coco bacilos Gram positivos .
Coco Bacilos alcohol cido resistentes de color rosa
plido

Coloracin de Gram Coloracin de Ziehl Neelsen (+)

 Coccidias
Diagnstico
Cryptosporidium sp. alcohol cido resistentes de
color rosa plido

10 X 100X
 Coccidias
Diagnstico
Coccidias alcohol cido resistentes de color rosa
plido

Isospora belli 100 X Cyclospora sp. 100X

 Mtodo de coloracin a
base de fluorocromos
Auramina O, se une al cido miclico
de la pared celular de la
mycobacteria permitiendo
observarlas de color amarillo
brillante sobre un fondo oscuro, es
frecuente utilizar como contraste el
florocromo rodamina.
Mycobacterium tuberculosis en
pulmn, coloracin de auramina
Colorantes neutros o hematolgicos o
de Romanovsky

Sales neutras que se obtienen mezclando un

colorante cido (eosina) con otro de tipo bsico
(azul de metileno). La oxidacin del azul de
metileno produce los azures de metileno.
Giemsa
Wright
Leishman
May-Grnwald
 Caractersticas
Despus de la disociacin de la molcula
colorante, sobre el tejido se observa tres
colores:
Azul por el azul de metileno.
Rosado por la eosina.

Prpura por metacromasia de los azures y

del azul de metileno.
 Bartonella baciliforme
Chlamydia tracomatis
Helicobacter pylori
Calymmatobacterium
(Donovania) granulomatis
Borrelia recurrentis
 Mtodos de impregnaciones
argnticas
Algunas tienen la capacidad de
captar sales de plata, esta Ag+1 es
reducido por la hidroquinona hasta
Ag0 de color negro. Se puede lograr
el mismo resultado con sulfito de
sodio o con formol.
 Impregnacin argntica de
Warthin-Starry
Impregnacin argntica
modificada de Dieterie
Impregnacin argntica de
Steiner y Steiner
 Treponema pallidum
Borrelia recurrentis
Leptospira icterohaemorrhagiae
Helicobacter pylori
Bartonella baciliforme
Calymmatobacterium
(Donovania) granulomatis
Klebsiella rhinoscleromatis.
 Treponema pallidum
Diagnstico
Treponema pallidum espiroquetas de color negro con
la impregnacin argntica de Warthin-Starry

100X
Helicobacter pylori
Diagnstico
Helicobacter pylori bacterias curvas de color negro
con la impregnacin argntica de Warthin-Starry

100X
 Reacciones
histoqumicas
 Reaccin de P.A.S.
Oxidacin con cido perydico
rompe y oxida los grupos alfa glicol,
con la consiguiente formacin de
grupos aldehdos (-CHO). Estos son
reconocidos por el reactivo de
Schiff produciendose un color rojo
magenta.
 Chlamydea tracomatis
Calymmatobacterium
(Donovania) granulomatis
 Reacciones
inmunohistoqumicas
Marcadores especficos

Helicobacterpylori
Mycobacterium tuberculosis