HISTOTECNOLOGIA

Clase N6: MICROTOMIA

MG.T.M. GERRY FRANK ARANDA CAMPOS

El objeto de la inclusin que hemos descripto
anteriormente es hacer posible la reduccin del
tejido a cortes lo suficientemente delgados como
para permitir el paso de la luz para examinarlo al
microscopio. los micrtomos son instrumentos de
gran precisin que nos proporcionan cortes delgados
parejos y de espesor graduable. los cortes ms
corrientes son los de 4-6 micrones.

La microtoma, es; en parte una tcnica y

en parte un arte.
 Historia del micrtomo
1840 La mayora de los tejidos fueron examinados por la tcnica "aplastamiento"
El cuchillo de doble filo para cortar "finas" secciones
Pritchard 1835 Micrtomo mquina de corte para seccionar muestras de madera.
1840 Topping Micrtomo usada para cortes animales as como material vegetal.
1885 - Caldwell Micrtomo automtico.
1885 - Cambridge Micrtomo de balanceo - Darwine Horacio
corte revolucionando la histologa. Proporciona una cinta de las secciones del
bloque.
Micrtomo de Caldwell - Automtico.
MICRTOMO DE BALANCEO.
Micrtomo de Rotacin.
Micrtomo Sledge - Deslizamiento
 TIPOS DE MICROTOMOS

TIPOS DE MICRTOMOS
Consideraremos cuatro tipos Tipo deslizamiento: La
Deslizamiento pieza queda fija mientras
El tipo Minot la cuchilla se desliza por
Congelacin unas guas especiales
merced a un soporte al
Criostato o critomo.
que se sujeta la cuchilla
con unos tornillos.
Tipo Rotacin o Minot: La
cuchilla queda fija y es la
pieza la que se desliza sujeta
a una platina, sta se desliza
verticalmente cuando se
hace girar una manivela.

Permite obtener cortes

seriados en forma de cinta.
Tipo congelacin: se parece al
de deslizamiento, pero la
cuchilla o navaja, en lugar de
deslizarse, gira sobre un eje. Por
otra parte, el aparato se
caracteriza por tener un sistema
de congelacin colocado debajo
de la platina que utiliza la
expansin brusca del anhdrido
carbnico contenido en un
cilindro con el cual se comunica.
Criostato: Consta de un micrtomo tipo Minot
incluido en una cmara de congelacin. El volante
de inercia que controla la realizacin del corte
permanece en el exterior, mientras que la cuchilla y
el mecanismo de avance estn situados dentro de
la cmara fra (normalmente a -20 C). Pese a la
disposicin horizontal de la cuchilla, la obtencin de
secciones seriadas es posible gracias a la existencia
de un sistema anti-enrollamiento que obliga al
corte a deslizarse sobre la superficie de la cuchilla.
 CUCHILLAS

Con mucho cuidado, retire una cuchilla descartable del dispensar, usando el botn
plstico Afloje los prisioneros Allen con la llave provista
Coloque con cuidado la cuchilla descartable entre las mordazas
Asegrese de que la cuchilla haya quedado asentada sobre el escaln del adaptador
Reajuste los prisioneros
 TCNICA DE CORTE
1.-Fije las muestras de manera adecuada
La fijacin es el paso ms importante al llevar a cabo las tcnicas de preparacin de
muestras histolgicas. No importa el cuidado con el que procese y seccione las
muestras de tejido, los detalles morfolgicos esenciales slo se mostrarn si el
tejido se fija de manera adecuada y rpida.

Casi siempre es mas difcil seccionar las muestras mal fijadas que aquellas que
estn bien fijadas.
Los tejidos mal fijados siempre mostraran menos caractersticas morfolgicas,
aunque se hayan procesado de manera optima y con cuidado.
1.-Coloque el micrtomo de manera adecuada
La posicin del micrtomo en el laboratorio es importante.
Coloque el micrtomo en un lugar estable, lejos de rfagas de aire, puertas y
puntos de paso. Cualquier movimiento del aire debido a los equipos de aire
acondicionado u otras causas puede hacer que el tratamiento de la seccin sea muy
difcil.
Es preferible utilizar un banco ajustable en altura y una silla ergonmica.
Es muy importante que el personal no este distrado al usar el micrtomo por los
riesgos de lesionarse con cuchillas extremadamente afiladas. Al colocar los
micrtomos en un laboratorio debera considerarse el potencial para interactuar con
otros miembros del personal.
Es preferible tener un suelo antideslizante en las inmediaciones de los micrtomos
porque, inevitablemente, los fragmentos de parafina caern al suelo y pueden
originar una superficie resbaladiza. Muchos laboratorios usan esterillas
antideslizantes para que el entorno sea mas seguro.
 Utilice las caractersticas de seguridad de forma
apropiada
Debe estar familiarizado con las caractersticas de seguridad del micrtomo que est
utilizando y observar algunas normas bsicas durante el corte.
Las cuchillas reutilizables y desechables del micrtomo estn extremadamente afiladas y pueden causar lesiones de carcter grave a
no ser que se actu con el cuidado pertinente al trabajar con ellas. Los accidentes se producen cuando un usuario esta distrado o no
esta completamente concentrado.
Use pinzas o pincel en lugar de los dedos para coger las secciones o los fragmentos de parafina de la cuchilla o de la cara del bloque.
La proteccin de seguridad puede estar colocada para cubrir toda la longitud del filo.
El bloqueo del volante inmovilizara el porta muestras en la parte superior de la carrera de corte; se debe utilizar al cambiar los
bloques.
La proteccin debe estar colocada y el bloqueo del volante activado cuando un bloque esta siendo colocado o eliminado de la pinza
porta bloques, o cuando se esta realizando cualquier manipulacin del bloque mientras la cuchilla esta colocada. La proteccin tambin
debe ser utilizada cuando el micrtomo se deja sin supervisin.
El freno del volante bloqueara el micrtomo en cualquier posicin del mango; se utiliza al realinear la cara del bloque o al ajustar el
avance de desbaste.
No deje nunca una cuchilla en el lugar de trabajo o en una caja, con el filo mirando hacia arriba. Si por casualidad se cae una cuchilla,
djela caer, no intente cogerla en ningn caso (este es un reflejo natural contra el que tiene que luchar).
 AJUSTE EL ANGULO DE INCLINACIN DE LA
CUCHILLA DE FORMA OPTIMA.

El ngulo de inclinacin de la cuchilla se puede ajustar y

debe ser configurado para un rendimiento ptimo
El Angulo de incidencia previene el contacto entre la
faceta de la cuchilla y la cara del bloque.
El ngulo de la faceta es el ngulo creado entre las dos
facetas que forman el filo. Para el uso rutinario, las cuchillas
desechables estn hechas con un ngulo de la faceta de 35
aproximadamente, pero este ngulo puede variar en
funcin del tipo de cuchilla y su fabricante.
Por eso, hay que ajustar, de forma optima, el ngulo de
inclinacin en funcin del tipo de cuchilla.
Siga las instrucciones del fabricante del micrtomo para el
ajuste del ngulo recomendado.
Maximice la vida til de la cuchilla

Hay algunas estrategias simples para obtener la vida mxima de cada cuchilla.
Al limpiar la cuchilla, evite arrastrar cualquier cosa a lo largo del filo, incluso las
fibras de celulosa pueden daarla.
Evite tocar el borde con cualquier objeto duro, como un pincel o unas pinzas.
Use la cuchilla sistemticamente, trabajando desde un extremo al otro. Esto le
proporcionara la mxima vida til a cada parte de la cuchilla.
Utilice un lado de la cuchilla para desbastar y otro para la obtencin del corte, o
alternativamente use cuchillas diferentes.
Un micrtomo de retraccin prolonga la vida de la cuchilla porque retrae
ligeramente la muestra despus del corte y reduce la formacin de residuos en la
parte posterior de la cuchilla..
Oriente la muestra de manera adecuada
La orientacin de la muestra puede afectar a la facilidad con la que se puede obtener una
cinta e influye directamente sobre la calidad de la seccin.

En la mayora de los laboratorios, todos los moldes de inclusin estn colocados en la pinza
portaobjetos con la misma orientacin (p. ej., la etiqueta hacia la izquierda para la
orientacin este-oeste o la etiqueta boca arriba para la orientacin norte-sur). Esto se hace
para facilitar el desbastado de mltiples bloques antes de preparar las secciones de alta
calidad y de permitir cortes mas profundos o recortes sin una perdida excesiva del tejido.
Por eso, debe tener en cuenta la orientacin de la muestra hacia la cuchilla en el estado de
inclusin.

Este requisito a menudo se pasa por alto.

Tenga cuidado al efectuar un recorte, un refrentado
o un desbastado
En la micrtomia, esta etapa requiere un excelente cuidado, ya que tejido importante para
el diagnstico se puede perder fcilmente o la superficie del bloque puede ser daada.

Antes de iniciar el recorte, asegrese siempre de que todos los mecanismos de sujecin
estn apretados con seguridad.
El objetivo de recortar un bloque de forma adecuada es exponer el tejido con cautela en
el nivel en el que se pueda obtener una seccin representativa.
El recorte normalmente se efecta con unos grosores de entre 10 y 30 m.
Al efectuar un recorte basto y rpido de tejidos quebradizos se corre el riesgo de daar
la superficie de la muestra. Tenga especial precaucin al utilizar el dispositivo de recorte
mecnico a 30 m.
Como paso final, pula la cara del bloque cortando suavemente unas pocas secciones
finas.
Tenga en cuenta los factores que afectan al
grosor de la seccin.
Configure el micrtomo con el ajuste deseado pero
observe que hay varios factores
que determinan el grosor de la seccin real.
Una seccin cohesiva de 4 m puede proporcionar mas
informacin que una seccin de 2 m interrumpida
severamente.
El grosor real del primer par de secciones de una cinta
puede ser mayor de lo indicado debido a la dilatacin por
calor al cortar un bloque frio.
Otros factores como la velocidad de rotacin, el ajuste
del angulo de incidencia y las condiciones del filo pueden
influir sobre el grosor real alcanzado.

Las secciones de la izquierda fueron
cortadas
de un bloque relativamente caliente,
sin enfriar.
Las secciones de la derecha fueron
cortadas del
mismo bloque despus de que se
enfriara, sobre la superficie de hielo
derritindose.
Asegrese de que los bloques estn fros
El corte normalmente mejora cuando la muestra est bien incluida en
parafina dura. Por esta razn, la mayora de los bloques de parafina deben
estar fros cuando se cortan las secciones. El mtodo exacto utilizado para
enfriar el bloque es importante.
La parafina fra proporciona un mejor soporte para los elementos duros
en una muestra, permitiendo que se obtengan secciones mas delgadas.
Coloque los bloques sobre una placa fra o sobre una superficie fra y
hmeda durante unos minutos (como la superficie de hielo derritindose).
El agua penetra un poco en la cara del bloque, hinchando los tejidos y
hacindolos mas adecuados para cortarlos. Esto tiene particular
importancia en el caso de tejidos excesivamente deshidratados, secos o
que se desmigajan.
El hecho de colocar los bloques en el congelador puede ocasionar la
ruptura de la superficie, cuando el tejido se separa de la parafina que tiene
alrededor. Esto puede hacer que sea mas complicado obtener secciones
cohesivas.
Estudie la tcnica para cortar secciones finas, de elevada calidad y
consistentes
No existe ningn sustituto para la experiencia, pero hay algunos pasos fundamentales que harn la tarea ms fcil.
Use una seccin de cuchilla que no haya sido utilizada para el desbastado.
Al utilizar el avance de desbaste, evite cortar secciones gruesas involuntariamente, ya que esto podra daar su
cuchilla y, posiblemente, la cara del bloque.
Si la cara del bloque se calienta o si se requieren niveles mas profundos, puede ser necesario volver a enfriarlo.
Generalmente, los mejores resultados y la menor compresin se obtienen con una carrera de corte uniforme y
lenta.
No pare ni reinicie durante una carrera de corte ya que esto producira franjas de diferentes grosores a lo largo de
la seccin.
La practica de soplar suavemente sobre la cara de un bloque enfriado, justo antes de cortar cada seccin es una
practica comn en algunos laboratorios. La aplicacin de un aliento clido y hmedo tiende a hacer las secciones
mas cohesivas, pero tambin ocasiona la dilatacin a causa del calor, por eso, la seccin se hace mas gruesa.
Los residuos que se adhieren al borde superior o inferior del bloque o a la parte trasera de la cuchilla pueden
dificultar la obtencin de cintas cohesivas y ocasionar que la cinta se separe de la cuchilla en la carrera ascendente.
Si hay residuos, elimnelos, vuelva a enfriar el bloque y comience de nuevo.
Realice una limpieza y un mantenimiento profundo del
micrtomo
Es importante eliminar la parafina y los residuos de tejido acumulados despus de su uso. Es importante
efectuar un mantenimiento preventivo de forma regular.
Limpie el equipo diariamente.
Antes de limpiarlo, quite siempre la cuchilla.
El porta cuchillas se puede retirar sencillamente para facilitar el acceso para limpiarlo.
Los desperdicios de la seccin se quitan mejor con un pincel seco.
No limpie las superficies exteriores con alcohol o xileno, ya que no son resistentes a estos disolventes
y se debe evitar una exposicin al xileno. Se recomiendan una solucin para eliminar la parafina,
detergentes comerciales suaves o jabn y agua.
Durante la limpieza, no debe penetrar ningn fluido en el interior del instrumento.
Como mnimo una vez al ano, el instrumento debe pasar una inspeccin realizada por un tcnico de
servicio cualificado.
Siga las instrucciones de lubricacin facilitadas en el manual de instrucciones y utilice los lubricantes
recomendados.