Qumica Analtica

DICROISMO CIRCULAR
UV-VIS

PRESENTADO POR: LUIS ENRIQUE FLOREZ MERCHAN

PRESENTADO A: GUILLERMO SALAMANCA GROSSO
MATERIA: QUIMICA ANALITICA
FACULTAD: CIENCIAS

Facultad de Ciencias
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ESTUDIO POR DICROSMO CIRCULAR DE LA

DESNATURALIZACIN TRMICA DE LA SUBTILISINA BPN'.
MODELO IRREVERSIBLE DE DOS ESTADOS
UV-VIS

Resumen: Se estudi la desnaturalizacin trmica de la

subtilisina BPN por dicrosmo circular. Se observa que el
proceso fue fuertemente dependiente de la velocidad de
calentamiento, como es de esperarse para un proceso de
desplegamiento que se encuentra bajo control cintico, debido a
la presencia de una reaccin irreversible. El proceso de
desnaturalizacin trmica sigue un modelo simple de dos
estados (N D). Se calcul la energa de activacin (E) para la
reaccin por diferentes mtodos. El valor de E obtenido fue muy
similar variando de 266 a 339 kJ mol1.
Palabras clave: Subtilisina BPN, desnaturalizacin, dicrosmo
circular, irreversibilidad.

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PARTE EXPERIMENTAL

- Enzima
- Purificacin
- Electroforesis
- Protelisis
- Inhibicin de la subtilisina
- Concentracin de la protena
- Dicrosmo circular
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DICROISMO CIRCULAR
Los espectros de dicrosmo circular (DC) se obtuvieron en un
espectropolarmetro Jasco J-715, equipado con un portacelda
rectangular con controlador de temperatura tipo Peltier PTC-
UV-VIS 348WI y agitacin magntica. La temperatura fue medida en el
interior de la celda con la sonda externa del sistema Peltier. Los
espectros en la regin del UV lejano (190-240 nm), para el
estudio del cambio conformacional en funcin de la temperatura
se realizaron en una celda de recorrido ptico de 1.0 cm. La
subtilisina fue disuelta en un regulador de fosfatos 0.01 M, pH 7.5
a una concentracin de 20mg / mL. Los espectros de dicrosmo
circular son reportados como elipticidad por residuo medio
(q)MWR, la cual fue calculada utilizando una masa molecular de
110 por residuo.

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ANALISIS DE DATOS

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RESULTADOS

Los espectros de DC, a pH 7.5, en la regin del ultravioleta lejano

(190-240 nm) para la subtilisina BPN nativa (25 C) y la subtilisina
UV-VIS
BPN desnaturalizada (70 C), por efecto del aumento de la
temperatura, se muestran en la Fig. 1. Los cambios observados son
atribuibles a la prdida de estructura secundaria . Adems, se
observ que no existe reversibilidad en el proceso de
desnaturalizacin trmica (Fig. 1).

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