Regeneracin de plantas in vitro

Regeneracin de plantas in vitro

Centella asiatica,
 Regeneracin de plantas in vitro

Brotacin y proliferacin de yemas

Organognesis

Embriognesis Somtica
 Brotacin y proliferacin de yemas

Parte de estructuras multicelulares , es decir de meristemos

ya formados.

Los meristemos son grupos de clulas

indiferenciadas responsables del crecimiento
permanente de las plantas debido a que
tienen una alta capacidad de divisin celular.
 ORGANOGNESIS

Se refiere a la formacin de novo de rganos

en los explantes cultivados.

Pinus maximartinez
ORGANOGNESIS

Citrus aurantifolia
 ORGANOGNESIS

DIRECTA INDIRECTA

Explante Tejido calloso

Original

rganos
Explante Clulas de
Explante
Original

Comienzo de divisin

Cambiando su estado
de Diferenciacin

Generacin de
Meristemoides

Brotes adventicios
Explante Clulas de
Explante
Original

Comienzo de divisin

Cambiando su estado
de Diferenciacin

INDUCCIN

Generacin de
Meristemoides

Brotes adventicios
Generacin de
Meristemoides

INDUCCIN

Clulas del explante Cambios cuantitativos

sufren un aislamiento
fsico y/o fisiolgico
con respecto al resto
del tejido.
en la disponibilidad de
Nutrientes y RCV en
una clula en
particular, lo induce a
esta a dividirse.

Las clulas aisladas

Expresan su potencial
de desarrollo
dividindose.
Generacin de
Meristemoides

Compuestos por clulas pequeas

Isodiametricas

Pared celular delgada

Vacuolas perifricas pequeas

Ncleo grande (cntrico)

 Induccin de Brotes Adventicios

Reguladores de crecimiento
(citocininas y las auxinas).

Factores que dependen del explante

Genotipo
Estado general de la planta donadora del explante
rgano de donde se toma el explante
Tejidos y tipos celulares presentes en el explante
Tamao del explante
Edad fisiolgica y ontognica del tejido de donde proviene el explante
Pretratamientos aplicados al explante o la planta donadora
Estacin del ao en que se toma el explante
Posicin y orientacin en que se inocula el explante
Densidad de inoculacin
Factores que dependen del medio de cultivo

Reguladores del crecimiento (tipo, concentracin y proporcin de uno con

Respecto del otro)
Macro y micronutrientes
Vitaminas
Nitrgeno orgnico
Fuente de carbono
Suplementos nutritivos
Consistencia del medio (lquido o slido)
Tipo de concentracin del gelificante en el caso del medio slido
Otros componente (antioxidantes, carbn activado)

Factores relacionados con el ambiente de incubacin

Luz, obscuridad o fotoperiodo

Tipo de luz
Temperatura
VARIABLES Tipo de explante depende
de la especie

Segmentos de
hoja

Hipocotilo

Cotiledn

Tallos jvenes
VARIABLES

REGULADORES DE CRECIMIENTO

Generalmente se plantean experimentos donde

se prueba el efecto de varias concentraciones de
una CITOCININA combinada con varias
concentraciones tambin de una AUXINA.
 cido 2-4-
cido diclorofenoxi-
indolactico actico (2,4D)
(AIA)

cido
naftaleinactic Picloram
o
(ANA)

cido
indolbutirco
(AIB)
 Embriognesis Somtica

Proceso de formacin de embriones.

Los embriones somticos tienen la capacidad de
formar una nueva planta despus del proceso de germinacin
(asexual) por lo que la nueva
planta ser exactamente igual a la donadora de la clula inicial.
Embriognesis Somtica

Clulas determinadas o inducidas.

Clulas embriognicas determinadas

(CED) o proembrignicas.
 Embriognesis Somtica

DIRECTA INDIRECTA

Tejido calloso o una suspensin

Explante celular embriognica
Original
con Embriones
somticos
Embriones somticos
INDUCCIN

HISTODIFERENCIACIN

GERMINACIN

MADURACIN
 INDUCCIN

Es el proceso de conversin de una clula somtica

a una clula pro-embrignica.
:::Procesos determinantes para la induccin:::

Genotipo

Grado de diferenciacin de las clulas del

explante

Auxinas

Aislamiento celular
 Genotipo

Diferentes genotipos en una misma especie

causan diferencias notables en la capacidad para
activar los elementos clave que se requieren
para iniciar el proceso de embriognesis
somtica.
Grado de diferenciacin de las clulas del
explante

La ES ser ms factible en tejidos jvenes poco

diferenciados y prcticamente imposible en
tejidos diferenciados maduros.
 Auxinas

La presencia de auxinas es un factor determinante para que

ocurra el fenmeno de la Induccin.
Su presencia estimula entre otras cosas la metilacin del ADN, lo
cual puede favorecer el patrn de la expresin gentica que se
sabe requiere para que ocurra la induccin.
 Aislamiento celular

De una clula o un grupo de ellas con respecto al resto del

tejido estimula tambin la induccin o conversin de una clula
somtica en pro-embriognica.
El aislamiento se puede producir cuando hay necrosis en
el tejido adyacente al aplicar tratamientos fsicos para separar clulas.
La presencia de auxinas tambin puede contribuir al promover
la friabilidad del tejido.
 HISTODIFERENCIACIN
Las masas clulas se diferencian formando embriones somticos ,
mediante divisin y diferenciacin celular simultaneas.
 POLARITY

Plant polarity refers to the asymmetric distribution of cellular

components along a particular axis within a cell, and is essential
for processes such as intercellular communication, cell division,
cell morphogenesis and differentiation. Polarised cells are
involved in the patterning of plant tissues and organs, and
therefore contribute to the overall shape of the plant.
 MADURACIN

El estado de torpedo no tiene la capacidad de germinar.

Para ello se requiere la fase de Maduracin durante la cual
existe una fase de elongacin celular ya sin divisin.
 GERMINACIN

Es el proceso de elongacin y reactivacin metablica de un

embrin somtico maduro para convertirse en una plntula.
 Sistema radical inicial. Desarrollo de la etapa de germinacin. Primer internudo del tallo
correspondiente al hipocotilo

Plntulas iniciando la emergencia; el hipocotilo, Detalle de una plntula de frejol. El epicotilo

an curvado y portando los cotiledones en su corresponde al segundo internudo.
extremo, se endereza sobre el suelo.
 GERMINACIN

ESTIMULOS

LUZ AC. GIBERELICO CITOCININAS

GERMINACIN

INHIBICIN

Ac. Abscsico
Tilia amurensis

Embrin de Hipocotilo Epidermal trichome

initial cells
Arabidopsis thaliana

Hipocotilo Pericycle cells

Chirita flavimaculata

Hoja

Chrysanthemum morifolium Epidermal cells

Tallo
Cortex cells
Arabidopsis thaliana

Hoja
reprogrammed by overexpression of the embryonic regulator RKD4 .
 Brotes Adventicios Embriones Somticos

Las estructuras son unipolares Estructuras polares, donde

conteniendo slo un pice esta visible y un pice y una
radcula.

Los brotes adventicios No tienen una conexin

conservan usualmente su vascular con el explante
conexin con el sistema original por lo que son
vascular del explante inicial. independientes al mismo

La morfologa de las 1ras hojas Las 1ras hojas tienen la

no es similar a los cotiledones. morfologa muy similar a los
cotiledones.

Sin presencia de protenas Expresin diferencial de

especificas de la protenas especificas.
embriognesis. (marcadores moleculares)
 Totipotencialidad celular

Caracterstica de un grupo de clulas vegetales conocidas

como celulas meristematicas, presentes en los distintos
rganos de la planta. La potencialidad de una clula
diferenciada (una clula de conduccin, epidrmica,
etc.).
SEALIZACIN DE ABA
(Acido abscsico)