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Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional De Ciencias Biolgicas


MICROBIOLOGA GENERAL

Digestin de Macromolculas
Equipo

1
Entender y montar ensayos de
degradacin de polimeros por
enzimas extracelulares microbianas.
Microorganismo permiten:
CICLO DEL
OXGENO

CICLO DEL
CARBONO
CICLO DEL
AGUA

CICLO DEL
NITRGENO
CICLO DEL
AZUFRE
Para que una clula crezca debe satisfacer todos sus
requerimientos nutricionales.
Requerimientos nutricionales y clasificacin fisiolgica
Fuente de Proceso fisiolgico
Energa Fsica (luz) Fototrofa
Qumica Quimiotrofa
Carbono nicamente CO2 Autotrofa
Orgnico Heterotrofa
Donador inicial de Inorgnico Litotrofa
electrones Orgnico Organotrofa
Aceptor final de Orgnico Fermentacin
electrones Inorgnico Respiracin anaerobia
O2 Respiracin aerobia
CO2 Autotrofa, fotosntesis,
metanognesis
Clula auxtrofa: Clula incapaz de convertir precursores biosintticos en
biopolmeros.

Clula prottrofa: no requiere factores de crecimiento.


Factor de crecimiento: Son compuestos orgnicos que favorecen el crecimiento.
Factor o vitamina funciones principales

p-aminobenzoico (PABA) precursor del cido flico


Acido flico metabolismo de compuestos C1, transferencia de grupos
metilo
Biotina biosntesis de cidos grasos; fijacin de CO2
Cobalamina (vitamina B12) reduccin y transferencia de compuestos C1; sntesis de
desoxirribosa
Niacina (cido nicotnico) precursor del NAD; transferencia de electrones en reacciones
redox
Riboflavina precursor de FAD y FMN
cido pantotnico precursor de la CoA
Tiamina (vitamina B1) descarboxilaciones; transcetolasas.
Complejo B6 (piridoxal, piridoxamina) transformaciones de aminocidos y cetocidos

Grupo Vitamina K, quinonas transportadores de electrones (ubiquinonas, menaquinonas,


etc.)

Tabla. Factores de crecimiento: vitaminas y sus funciones


Componentes del almidn.
El almidn es producido
principalmente por plantas
superiores, est compuesto
de amilosa y amilopectina.
Diversas enzimas amilolticas
hidrolizan almidn y sus
productos.
El lugol con el almidn
forman un complejo color
caf-prpura que desaparece
cuando el almidn ha sido
degradado.
LPIDOS
Son molculas orgnicas solubles en disolventes no polares como ter
dietlico, cloroformo, tetracloruro de carbono o benceno.

Las funciones de los lpidos van desde ser fuente de energa hasta la
formacin de membranas.
Se clasifican en 3 grupos principales
Grasas
simples o Aunque tambin es
neutras un trmino
abarcativo para
describir un grupo de
grasas

Derivados Grasas
grasos compuestas
Los fosfolpidos son steres complejos de alcohol, cido graso, cido
fosfrico y una base nitrogenada.

Las bacterias tienen una cantidad considerable de lpidos como


constituyentes de su membrana, sobre todo fosfolpidos y glucolpidos.
Las enzimas que los hidrolizan son las fosfolipasas, a las que se asigna una
letra diferente segn el enlace ster que escinden en el lpido.

Figura 1. Hidrlisis de un diglicrido


PROTEINAS

Las protenas son polmeros de aminocidos, de alto peso


molecular, unidos por enlaces peptdicos. Algunos
microorganismos producen y liberan enzimas
extracelulares llamadas PROTEASAS
Capaces de hidrolizar parcialmente las protenas a
pptidos, y stos a su vez ser degradados a aminocidos y
por otras enzimas llamadas PEPTIDASAS.
FUNDAMENTO
DETERMINA LA CAPACIDAD DE UN MICROORGANISMO DE PRODUCIR
PROTEASAS. LA GELATINA ES HIDROLIZADA POR LA GELATINASA EN SUS
AMINOCIDOS CONSTITUTIVOS CON PERDIDA DE SUS CARACTERSTICAS
GELIFICANTES

PROTENA GELATINA PROTEASA GELATINASA POLIPPTIDOS

POLIPPTIDOS PEPTIDASAS AMINOCIDO


Nucleasas
Las nucleasas son enzimas que producen la rotura de los enlaces fosfodister de la cadena
polinucleotdica de los cidos nucleicos.
Aplicaciones.

Las nucleasas se pueden utilizar para la


determinacin estructural de cidos nucleicos
mediante el diseo de nucleasas que puedan
reconocer ciertas secuencias especificas.

Las nucleasas se pueden emplear en el tratamiento


de enfermedades producidas por virus, hongos,
bacterias y algunos tipos de cncer.
1.- HIDRLISIS DE LA GELATINA
a) prueba de licuefaccin de la gelatina en tubo

Sembrar los
microorganismos Incubar a 37C Pasar los tubos a
por picadura en durante 24-48 h 4C o un bao de
medio con gelatina hielo durante 1 h

Gelatina Nutritiva
Sustrato: Gelatina (protena).
Enzima: Gelatinasa (Proteasa,
exoenzima).
Producto: Aminocidos.
HIDRLISIS DE LA GELATINA

b) Prueba de la digestin de la gelatina y la casena en placa


Marcar cajas Aadir HgCl2
Petri con Incubar los a las placas y
gelosa Sembrar por cultivos a 28 a observar los
gelatina y estra abierta 30C por 48 halos de
agar leche horas transparentes
descremada de hidrolisis
HIDRLISIS DE PROTENA EN TUBO
MICROORGANISMO CRECIMIENTO HIDRLISIS

Escherichia coli
+ -
Bacillus subtilis
+ +
Pseudomonas aeruginosa
+ -
Salmonella typhi
+ -
proteus vulgaris
+ -
Klebsiella pneumoniae
- -
Shigella flexneri
+ -
Staphylococcus aureus
+ -
HIDROLISIS DE GELATINA Y CASENA EN
PLACA
MICROORGANISMO CRECIMIENTO GELATINA CASENA

Escherichia coli
+ - -
Bacillus subtilis
+ + -
Pseudomonas aeruginosa
+ + +
Salmonella typhi
+ - -
Proteus vulgaris
+ - -
Klebsiella pneumoniae
+ + +
Shigella flexneri
++ - -
Staphylococcus aureus
+ - -
RESULTADOS
AGAR LECHE DESCREMADA
HIDRLISIS DE CASENA EN PLACA
HIDRLISIS DEL ALMIDN
Composicin:
Caldo nutritivo deshidratado 8.0 g
Almidn soluble 5.0 g
Agar 15.0 g
Agua, agorar a 1000 mL
Ajustar pH a 6.8 7.2
MICROORGANISMO CRECIMIENTO ALMIDN CASENA

Escherichia coli + - -
Bacillus subtilis + - -
Pseudomonas aeruginosa + + +
Salmonella typhi + - -
Proteus vulgaris - - -
Klebsiella pneumoniae + - +
Shigella flexneri + - -
Staphylococcus aureus + - -
AGAR YEMA DE HUEVO
Composicin:
*Medio base gelosa sangre; el cual
consta de:
*Infusin de 500g de corazn de
ternera, deshidratada 2g
*Triptosa 10 g
*Cloruro de sodio 5g
*Agar 15 g
*Agua (aforar a 1000 mL)
*Ajustar a pH de 6.8

*Huevo (50 mL)


METODOLOGA

Incubar los cultivos a 37 C


durante 48 horas

Sembrar por estra abierta


cada una de las bacterias
en el medio de cultivo
Agar Yema de Huevo Observar las placas y
determinar si hay presencia de
zonas de hidrlisis
GELOSA SANGRE
Composicin:

*Infusin de 500 g de corazn de


ternera, deshidratada 2g
*Triptosa 10 g
*Cloruro de Sodio 5g
*Agar 15 g
*Agua (aforar a 1000 mL)
*pH (ajustar a 6.8)
*Sangre
Es un medio enriquecido y diferencial.

Este medio es adecuado para el cultivo y aislamiento de


microorganismos exigentes, as como para estudiar la actividad
hemoltica.

La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un


alto valor nutritivo.
La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un
alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad
de microorganismos, an de aquellos nutricionalmente exigentes.

Las hemolisinas son enzimas que lisan los hemates. Las bacterias
que producen estas enzimas presentan un halo transparente
alrededor de las colonias a consecuencia de la lisis de los hemates.
HEMLISIS
Lisis parcial de los glbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso alrededor
de la colonia en estudio. Es debido a la oxidacin de la hemoglobina a
metahemoglobina (compuesto de color verdoso) por el perxido de hidrgeno
generado por los microorganismos.
HEMLISIS
Lisis total de los glbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante
alrededor de la colonia en estudio.
HEMLISIS
Ausencia de lisis de los glbulos rojos. El medio de cultivo no
presenta modificaciones de color y aspecto alrededor de la
colonia en estudio.
METODOLOGA

Incubar los cultivos a 37 C


durante 48 horas

Sembrar por estra abierta


cada una de las bacterias
en el medio de cultivo Observar el tipo de
Gelosa Sangre hemlisis
Agar yema de
huevo
Hidrlisis de Fosfolpidos

Microorganismo Crecimiento Agar yema de Agar yema de


Huevo 1. huevo 2.

Escherichia coli + -
-
Bacillus subtilis + +
-
Pseudomonas + +
+
aeuroginosa
Salmonella typhi + -
-
Proteus vulgaris + -
-
Klebsiella pneumoniae + -
-

Shigella flexneri + -
-
Staphylococcus aureus + +
-
Digestin de protenas & Fermentacin de
Leche tornasolada.

Reduccin: El medio se ve blanco.


Peptonizacin: Fragmentacin del coagulo.
Licuefaccin: El medio se licua totalmente.(apariencia Agua con arena)
Alcalinizacin: El medio vira a color violeta.
Interpretacin

Control Acidificacin Coagulacin Reduccin


Peptonizacin Licuefaccin Alcalinizacin

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