CUANTIFICACIÓN DE

PROTEÍNAS
MÉTODOS
Absorción UV
Método de biuret
Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el
Cu2+ y los grupos NH4 de los enlaces peptídicos en medio
básico.

La intensidad de coloración es directamente proporcional a

la cantidad de proteínas (enlaces peptídicos) y la reacción
es bastante específica, de manera que pocas sustancias
interfieren.

La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda

para la cuantificación de proteínas en preparados muy
concentrados (por ejemplo en suero).
Método de biuret
1. Bastante específicas para proteínas
2. Muestra pocas interferencias
3. Es barato
4. Tiene poca sensibilidad
Método de lowry
Es un método colorimétrico de
valoración cuantitativa de las
proteínas. A la muestra se añade
un reactivo que forma un
complejo coloreado con las
proteínas, siendo la intensidad
de color proporcional a la
concentración de proteínas, según
la ley de Lambert-Beer
El reactivo de folin-ciocalteau en esta técnica, el color es
más intenso

Este resultado se debe a la información de un enlace de

coordinación entre los enlaces peptídicos y el cobre alcalino
(reacción de biuret), más a reacción de reducción de las
sales de fosfomolibdato y fosfo tungsteno (folin-
ciocalteau), ocasionada por los residuos de tirosina y
triptófano de las proteínas.
Es recomendable elaborar la curva patrón con proteínas del
mismo tipo cuantificar, ya que en este método están
involucrados los aminoácidos aromáticos, tirosina y
triptófano.
Método de Ácido Bicinconínico (BCA)
Se basa en que las proteínas reducen los iones cúpricos del
reactivo BCA a iones cuprosos en medio básico.
Es sencillo, rápido,
• Cambio de color del verde (BCA) al morado. muy sensible, y
muestra una gran
proteína Cu+2
OH- tolerancia a
Cu+1 compuestos que
afectan a otros
métodos.
En un medio
alcalino
Cu+1 BCA-Cu+1
BCA
Método de bradford
Método de Bradford Se utilizó el método de
Bradford para determinar la concentración de
proteínas. El procedimiento se basa en la
formación de un complejo entre el colorante
Comassie Blue G-250 y la proteína en
solución.
Las ventajas que
ofrece es que el
reactivo está listo
para su uso (no
requiere de mezcla o
diluciones), con una
incubación rápida de
cinco minutos se
puede proceder a la
lectura de la placa.
● La absorbancia a 595 nm es
directamente proporcional a
la cantidad de proteína.
● Se requiere de una curva
patrón, la cual puede ser
albúmina.
● Esta técnica sólo requiere
agregar la solución del
colorante en medio ácido a
la solución problema